军队“十五”青年基金
- 作品数：25 被引量：89H指数：5
- 相关作者：纪冬刘妍成军路长林白文涛更多>>
- 相关机构：第二军医大学第四军医大学解放军第302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B反式激活基因的克隆化研究被引量：4
- 2005年
- 目的 应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库 ,克隆HCVNS4B蛋白反式激活相关基因。方法 以HCVNS4B表达质粒pcDNA3 .1( ) NS4B转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1( )为对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,进行抑制性消减杂交分析。将富集的二次PCR产物与T A载体连接 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑取克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增后进行测序及同源性分析。结果 文库扩增后得到 3 3个阳性克隆 ,经菌落PCR分析显示其中 2 8个克隆含有大小不等的 2 0 0～ 10 0 0bp插入片段。测序及同源性分析显示 ,12种已知基因编码蛋白 ,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因 ,可能是NS4B反式激活靶基因。结论 成功构建了HCVNS4B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,为进一步阐明HCVNS4B反式调节的靶基因在肝炎。
- 刘妍成军王建军白桂芹王志凌郭风劲纪冬崔玉芳
- 关键词：NS4B反式激活基因克隆化研究CDNA消减文库基因编码蛋白
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5B反式激活基因的克隆化研究
- 2005年
- 目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白5B(HCV NS5B)转染细胞差异表达cDNA消减文库,克隆HCV NS5B蛋白反式激活相关基因.方法:以HCV NS5B表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5B转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,进行抑制性消减杂交(SSH)分析.随机挑取克隆进行测序及同源性分析.结果:文库扩增后得到35个阳性克隆,经菌落PCR分析显示其中26个克隆含有大小不等的200～1000 bp插入片段.测序及同源性分析,显示16种已知基因编码蛋白和1种未知功能基因序列,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因,可能是NS5B反式激活靶基因.结论:成功构建了HCV NS5B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HCV NS5B反式调节的靶基因在肝炎、肝纤维化和肝细胞癌发生的分子生物学机制提供理论依据.
- 刘妍白桂芹成军王志凌张黎颖纪冬
- 关键词：C型肝炎样病毒属病毒非结构蛋白质类
- 全身放射损伤对伤口早期局部组织核转录因子NF-κB活性的影响被引量：3
- 2002年
- 史春梦程天民屈纪富冉新泽
- 关键词：全身放射损伤伤口核转录因子NF-ΚB活性
- 中药奇蒿提取物体外抗菌活性的实验研究被引量：13
- 2010年
- 目的研究中药奇蒿80%乙醇粗提取物及其石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物对临床常见菌种的抗菌活性。方法对中药奇蒿进行系统性分离提取,以80%乙醇粗提取物和石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物进行体外药敏实验,序贯使用纸片扩散法和常量肉汤稀释法,选用临床常见的致病菌株,包括金黄色葡萄球菌(标准型ATCC25923)、大肠埃希氏菌(标准型ATCC25922)、铜绿假单胞菌(标准型ATCC27853)、无乳链球菌(临床型)、粪肠球菌(临床型)、福氏志贺菌(临床型)和痢疾志贺菌(临床型)。结果奇蒿80%乙醇粗提取物对痢疾志贺菌的最小杀菌浓度(MBC)为25 mg/ml;奇蒿氯仿提取物对大肠埃希氏菌的MBC为6.25 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的MBC为12.5 mg/ml;奇蒿乙酸乙酯提取物对福氏志贺菌、痢疾志贺菌、无乳链球菌的MBC均为6.25 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的MBC为12.5 mg/ml;奇蒿正丁醇提取物对无乳链球菌的MBC为12.5 mg/ml,对痢疾志贺菌的MBC为25 mg/ml;石油醚提取物未对测试的细菌表现出明显的抗菌活性。结论奇蒿不同提取物对临床多种致病菌表现出了良好的杀菌作用,在抗感染治疗领域具有较好的开发和应用前景,其有效单体及杀菌机制有待进一步研究发现。
- 谭蔚锋王靖邢新秦路平
- 关键词：奇蒿提取物体外抗菌实验最小杀菌浓度
- 用SLS法定制修复下颌骨缺损的钛植入体的实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨应用SLS法定制钛植入体修复下颌骨缺损的可行性。方法:通过螺旋CT图像重建人下颌骨三维数据并制作单侧骨缺损模型,采用健侧数据镜像反转方法获得修复缺损的植入体CAD数据模型,用SLS法将CAD数据转换成蜡模,经失蜡铸造制作纯钛植入体,通过定点测量比较植入体与CAD模型的几何差异。结果:所制作的钛植入体形态自然,尺寸精度高。结论:应用SLS法定制修复下颌骨缺损的植入体精度高,耗时短,是一种很有前景的个性化修复下颌骨缺损的方法。
- 高勃朱晓瑜王晓波王忠义
- 关键词：SLS钛植入体骨缺损
- 重组ACTH(4-10)与GDNF融合蛋白及其生物活性研究被引量：1
- 2001年
- 通过PCR方法构建了促肾上腺皮质激素 4 10 (ACTH (4 10 ) )与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的融合基因 ,并将它重组克隆到表达载体 pET 2 8a (+ )中 ,构建表达质粒pET ACTH (4 10 ) GDNF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导可高效表达ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白 .用Ni2 + NTA树脂一步法纯化目的蛋白 ,纯度达 85 %以上 .纯化和复性的ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白能显著促进脊髓神经元存活 ,作用强于ACTH (4 10 )及GDNF蛋白 .
- 陈哲宇张勇何成路长林吴祥甫
- 关键词：融合蛋白基因表达
- 抗汉坦病毒NP抗原细胞内抗体的瞬时表达及活性检测被引量：3
- 2004年
- 目的 :在真核细胞中表达抗汉坦病毒NP抗原鼠源性单克隆抗体 (mAb) 1A8的scFv ,并检测表达产物的活性。方法 :将真核表达载体 1A8 scFv Cκ/pCI neo用脂质体转染COS 7细胞 ,用间接免疫荧光和免疫共沉淀法检测瞬时表达产物的免疫学活性。结果 :间接免疫荧光的结果表明 ,约 1%细胞胞质中出现弥散荧光 ,在免疫共沉淀 /免疫印记中 ,表达的抗体片段可与汉坦病毒的NP抗原特异性结合。结论 :细胞内表达的1A8 scFv Cκ可与NP抗原特异性结合 。
- 白文涛徐志凯张芳琳罗雯刘勇吴兴安阎岩
- 关键词：细胞内免疫单链抗体汉坦病毒
- 汉滩病毒糖蛋白G2酵母双杂交诱饵载体的构建及初步鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的利用Ras募集系统(RRS),构建并鉴定含汉滩病毒囊膜糖蛋白G2的诱饵载体。方法将汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G2基因与Ras基因连接,构建嵌合基因Ras-G2及Ras-G2’(G2’无前导肽序列)。将两个嵌合基因分别克隆入酵母表达载体pMet25,并转化至酵母温度敏感株cdc25-2,检测其对RRS系统的激活作用。结果限制性内切酶酶切鉴定表明,Met-G2和Met-G2’载体构建正确。激活试验结果为阴性。结论Met-G2和Met-G2’载体可用于从cDNA文库中筛选汉滩病毒受体。
- 白文涛张芳琳吴兴安胡刚于澜史梦远王海涛徐志凯
- 关键词：汉滩病毒酵母双杂交
- 外加电场对实验性大鼠脊髓损伤作用的研究被引量：6
- 2007年
- 目的:探讨脊髓损伤后外加电场(electric fields,EF)对脊髓血流量(spinal cord blod flow,SCBF)及神经功能的影响。方法:Wistar大鼠20只,随机分为对照组(CON组)和EF治疗组(EF组)。Allen's打击法50 gcm(5 g×10 m)致伤大鼠L1～L2段脊髓,给予EF治疗,于伤前、伤后即刻、1、3、6、24 h分别记录T12段脊髓血流量、脊髓感觉诱发电位。术后7、14天行联合行为评分(CBS)。结果:与盐水对照组比较,应用EF后,大鼠SCBF、SEP明显优于CON组(P<0.05)。结论:EF能有效改善损伤早期脊髓微循环,保护脊髓神经功能。
- 邵阳王永堂高洁马海涵罗治彬陈恒胜伍亚民
- 关键词：脊髓损伤电场脊髓血流量诱发电位
- 针刺足三里整复家兔体温昼夜节律被引量：11
- 2004年
- 目的 探讨针刺足三里对体温昼夜节律的整复作用。方法 雄性日本大耳白兔22只,随机分为正常对照组、倒相模型组(昼夜体温节律倒相)、模型加针刺组(倒相模型加以足三里电针),4周后观察针刺足三里对家兔倒相体温昼夜节律的整复作用。结果 正常对照组体温子时最高(38.35℃),午时最低(37.13℃),呈现昼夜节律变化;倒相模型组体温午时最高(38.25℃),子时最低(37.19℃),仍呈昼夜节律变化,但与正常对照组的波动相反;模型加针刺组体温昼夜节律有明显恢复,酉时的体温最高(38.32 ℃),卯时最低(37.15℃),与正常对照组比较,没有出现明显的漂移。结论 针刺足三里对紊乱的家兔体温昼夜节律有一定的整复作用。
- 黄泳姜雪梅石娜温瑞丽
- 关键词：针刺疗法足三里家兔体温昼夜节律
