国家自然科学基金(31272602)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
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- MarA和SoxS共同调节大肠杆菌K12外排泵AcrAB-TolC的表达被引量：3
- 2017年
- 利用Red同源重组技术构建大肠杆菌K12调控基因缺失菌株,探讨耐药发展过程中marRAB和soxRS对大肠杆菌K12外排泵AcrAB-TolC表达的调控作用。在环丙沙星浓度递增的条件下诱导K12及调控基因缺失菌株,分别获得系列突变菌株,测定各菌株对其他药物的MIC,并检测靶位基因突变情况。利用RT-PCR方法检测诱导突变株中外排泵基因、调控基因、膜孔蛋白基因的表达水平。结果表明,K12正向调控基因(marA和soxS)缺失株在环丙沙星选择压力下仅获得环丙沙星敏感性降低的菌株,而负向调控基因(marR和soxR)在环丙沙星选择压力下可获得环丙沙星中介和耐药的菌株,且诱导突变株仅出现与耐药有关的gyrA单突变(Ser83Leu和Asp87His)。正向调控基因marA和soxS缺失后,外排泵基因表达水平变化不明显,而负向调控基因marR和soxR缺失后,marA和soxS的表达水平显著升高,引起外排泵基因表达水平显著升高,最高达到约13倍。当阻遏蛋白SoxR被敲除后,soxS的表达水平没有变化,而marA的表达水平显著升高,外排泵基因acrB表达水平也升高,说明在调控AcrAB-TolC外排泵基因表达方面,marRA与soxRS存在功能上的冗余,即当其中一个调控因子功能缺陷时,另一个调控因子可以发挥互补调控功能。因此,MarA和SoxS对三聚体系统AcrAB-TolC的正向调控作用是通过解除负向调控蛋白MarR和SoxR对其的阻遏作用实现的,MarRA和SoxRS共同调节外排泵AcrAB-TolC的表达水平。
- 张传珍常满霞杨磊刘艳艳陈品仙蒋红霞
- 关键词：大肠杆菌基因敲除外排泵
- 屠宰场猪肉中产CTX-M沙门氏菌传播分子特征
- 【目的】了解屠宰场猪肉中沙门氏菌的流行情况,优势血清型和耐药状况及bla基因传播机制。【方法】从屠宰场的白条猪上采集猪肉样品,参照GB/T4789.4-2010标准并协同PCR法分离鉴定沙门氏菌,通过玻片凝集法鉴定沙门氏...
- 杨玲江桂泽李湾曾振灵蒋红霞
- 关键词：沙门氏菌CTX-M
- 文献传递
- 食品动物源沙门菌中fOSA3流行分布及其传播特征
- 【目的】研究食品动物源沙门菌中磷霉素耐药基因fosA的流行与传播特征。【方法】从实验室保存的288株沙门菌中用PCR扩增磷霉素耐药基因fosA,fosA,fosC,阳性菌株用琼脂稀释法测定菌株对抗生素的敏感性,PCR检测...
- 张文慧谷茜茜蒋红霞曾振灵
- 关键词：沙门菌
- 文献传递
- 抗生素压力下不同血清型沙门氏菌耐药性研究被引量：8
- 2014年
- 本研究旨在探讨不同血清型沙门氏菌在环丙沙星抗生素压力下突变频率及在耐药发展过程中靶位基因突变、外排泵及调控基因表达的差异。选取临床分离的印第安纳型、肠炎型和鼠伤寒型沙门氏菌的敏感菌株,在环丙沙星压力下诱导耐药突变,分别获得一系列不同程度的耐药突变株。分别检测不同血清型沙门氏菌突变株的突变频率、靶位基因喹诺酮耐药决定区(QRDRs)和外排泵调控基因ramR-ramA突变及外排泵相关基因的表达水平;同时检测了母株在羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)存在情况下环丙沙星药物的蓄积浓度,以确定母株是否存在外排泵的作用。结果表明,在环丙沙星压力下,印第安纳型沙门氏菌较肠炎型和鼠伤寒型有更高的突变频率,易获得耐药株;印第安纳血清型菌株耐药性的获得主要是由于靶位基因gyrA发生单突变,协同外排泵外排作用增强而获得高水平耐药;肠炎型沙门氏菌耐药性获得主要是由于靶位基因gyrA发生83和87位双位点突变,并随着gyrB和parC基因的多位点同时突变而获得高水平耐药,耐药性的发展过程中没有外排泵作用参与;而鼠伤寒沙门氏菌在抗生素压力下不易发展成耐药菌,耐药性发生主要是由于靶位基因gyrB发生突变,而伴随parC基因突变及微弱的外排泵作用导致耐药水平增加。
- 刘志杰万冰璐杨磊孟祥芹付晓平蒋红霞
- 关键词：血清型沙门氏菌突变频率荧光定量
- 食品动物源沙门菌fosA_3基因的流行及传播特征被引量：1
- 2017年
- 为研究质粒介导的磷霉素耐药基因fosA_3在食品动物源沙门菌中的流行状况及传播特征,采用PCR方法对本实验室保存的288株动物源沙门菌进行磷霉素耐药基因fosA_3、fosA和fosC2的检测,用琼脂稀释法测定阳性菌株对17种抗生素的敏感性,PCR检测其他相关耐药基因,玻片凝集法确定其血清型。采用脉冲场凝胶电泳(PFG E)和多位点序列分型(M LST)分析菌株间的亲缘关系。采用接合转移/转化、复制子分型、S1-PFGE和Southern杂交等对fosA_3的水平传播和质粒特征进行分析。结果显示,共筛选得到6株(2.1%)fosA_3阳性沙门菌,没有检测到fosA和fosC2。6株fosA_3阳性菌均表现出多重耐药,且同时携带blaCTX-M-9G(均为blaCTX-M-14)基因和floR基因,血清型检测均为印第安纳型。6株菌均为MLST(ST)17型,PFGE结果显示其图谱相似。质粒分析结果显示,fosA_3能通过IncN或IncA/C型质粒与blaCTX-M基因发生共同转移。本研究首次从国内不同地区采集的鸡粪便拭子样本中分离得到的沙门菌中检测到fosA_3基因,菌株的克隆传播和fosA_3与blaCTX-M随质粒的水平传播都加速了耐药性的散播,对公共卫生构成潜在威胁。
- 谷茜茜张文慧张莉娟杨玲傅嘉莉蒋红霞
- 关键词：沙门菌
- RamR突变协同靶位基因GyrA突变调控RamA表达水平的研究被引量：1
- 2013年
- 为了探讨RamR突变类型及对RamA表达调控的影响,靶位突变与外排泵过表达之间的关联,从临床分离的34株沙门菌中筛选不同RamR突变类型菌株,通过外排泵能量抑制(CCCP)试验和有机溶剂耐受试验(OST)验证外排泵的活性,构建不同RamR突变类型的质粒,互补到RamR野生型突变菌株中,采用RT-PCR方法检测各菌株RamA的表达水平。结果表明,15株ramR存在4种突变类型:M83T(n=6),A37S(n=3),T18P(n=3)和氨基酸的缺失(n=3)。CCCP抑制试验和OST试验证实,15株菌株中有10株存在明显的有活力的外排泵作用,4株存在活力微弱的外排泵。RamR三种氨基酸突变类型都上调了RamA的表达水平。靶位基因GyrA第83位的突变协同RamR的A37S或M83T突变均可引起RamA的表达显著增强,而T18P突变没有明显影响。相反,GyrA第87位的突变协同RamR的A37S或M83T突变则下调RamA的表达水平。本研究表明,所有的RamR的突变都可引起RamA表达水平增高,RamR与靶位基因突变协同调控RamA的表达水平,协同GyrA第83位突变可明显促进RamA的表达,而协同GyrA第87位突变则下调RamA的表达。
- 付晓平刘志杰褚富鑫杨玲颜欣蒋红霞
- 关键词：沙门菌外排泵反转录-聚合酶链反应
- 动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行传播机制研究
- 【目的】研究动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行及传播分子特征。【方法】2014年2-9月,从河南,山东,湖北,广东四省共采集3850份猪和鸡直肠拭子和粪便拭子,共分离鉴定得到159株沙门氏菌,其中包括猪源90株...
- 张文慧任思琪林香燕曾振灵蒋红霞
- 关键词：ESBLS沙门菌CTX-M
- 文献传递
