河南省基础与前沿技术研究计划项目(082300453204)
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 相关作者：周玉冰韩立王庆端王宁江金花更多>>
- 相关机构：郑州大学学研究院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 1.3倍体HBV YIDD变异株真核表达载体构建及鉴定
- 2009年
- 构建HBV YIDD拉米夫定耐药株1.3倍全基因真核表达载体,为进一步探讨乙肝病毒变异株的生物学特性及筛选抗病毒药物奠定基础。参考GenBank HBV序列设计并合成一系列引物,以临床证实为拉米夫定耐药的病人HBV DNA为模板,通过PCR扩增得到HBV全基因组并克隆至pGEM-T Easy载体中,经测序证实聚合酶基因存在YIDD变异,然后以该病人的HBV全基因组为模板构建1.3倍全基因HBV-YIDD变异真核表达载体pcDNA3.1(+)-1.3HBV。通过PCR扩增,酶切及测序证明pcDNA3.1(+)-1.3HBV表达载体构建成功,该表达载体的构建为后期建立稳定表达HBV-YIDD变异的细胞模型提供材料。
- 郑立运周玉冰杨小昂江金花王宁张艳王庆端
- 关键词：乙型肝炎病毒拉米夫定耐药真核表达载体
- 盐酸千金藤碱逆转肝癌多药耐药性与P-gpATP酶活性的关系研究被引量：11
- 2011年
- 目的观察盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochlo-ride,CH)联合FAP对肝癌多药耐药性的逆转作用及其机制。方法 MTT法检测CH和维拉帕米对耐药细胞的无毒剂量;MTT法检测H22/FAP肝癌细胞对多柔比星、顺铂、5-氟尿嘧啶的耐药倍数;生命延长率评价CH联合FAP的药效;定磷法检测P-gp ATP酶活性。结果细胞毒性检测结果提示,CH和VER剂量分别为1.0、0.15 g.L-1时,对H22/FAP细胞的抑制率<10%;MTT检测显示,H22/FAP瘤细胞对多柔比星、顺铂、5-氟尿嘧啶的耐药倍数分别为27.75、10.20、11.20;生命延长率结果显示CH 10、5 mg.kg-1联合FAP组能有效延长小鼠生存时间;动力学分析提示CH能够提高ATP酶活性,Vmax值约为184 nmol.min-1.mg-1,与阳性对照药维拉帕米相近。结论 CH联合FAP能够逆转肝癌多药耐药性,其机制之一可能为CH能够提高P-gpATP酶活性,抑制P-gp外排功能。
- 臧彩红张艳江金花王宁韩立马方王庆端
- 关键词：盐酸千金藤碱肝癌多药耐药ATP酶活性
- 盐酸千金藤碱逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制被引量：11
- 2012年
- 研究盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制。采用MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADR)单用及分别与CH、维拉帕米(verapamil,VER)合用的细胞毒作用;采用流式细胞仪,测定CH对细胞内ADR蓄积、罗丹明123(Rho123)蓄积和泵出及P糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果表明,CH(4μmol.L1)使K562/ADR细胞对ADR的敏感性增加7.43倍,逆转活性是VER的3.19倍,但对K562敏感株基本无影响。同时CH浓度依赖性地增加K562/ADR细胞内ADR和Rho123的蓄积,减少Rho123的泵出,抑制P糖蛋白的表达,但对K562细胞均无明显影响。CH在体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的作用可能与其抑制P糖蛋白的功能和表达有关。
- 彭有梅王宁王亚峰韩立张艳江金花周玉冰王庆端
- 关键词：多药耐药性P糖蛋白盐酸千金藤碱
- 盐酸千金藤碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨盐酸千金藤碱(CH)对乙型肝炎病毒的体外抑制作用。方法 MTT法检测CH对HepG2.2.15的细胞毒性;酶联免疫吸咐(ELISA)法检测不同浓度CH对细胞上清液中HBsAg和HBeAg的影响;荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测CH在用药后第9天对细胞内外HBV DNA拷贝数的影响。结果 CH对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为10.24μmol/L;对HBsAg和HBeAg分泌的半数抑制浓度(IC50)分别为7.01,6.64μmol.L-1,治疗指数(TI)分别为1.46,1.54;对细胞上清液中HBV DNA拷贝数的IC50为3.49μmol.L-1,对细胞内HBV DNA拷贝数的IC50为4.25μmol.L-1,TI值分别为2.93,2.41。结论 CH在体外对HBsAg和HBeAg的分泌和对细胞内外HBV DNA的复制均有明显的抑制作用。
- 王晓郑立运赵志鸿张艳周玉冰江金花王庆端
- 关键词：盐酸千金藤碱抗乙型肝炎病毒荧光定量聚合酶链反应体外抑制作用半数抑制浓度IC50
- 乙型肝炎病毒耐药细胞模型的研究进展被引量：1
- 2009年
- 治疗乙型肝炎的核苷(酸)类似物容易导致HBV的变异,从而产生耐药。由于乙型肝炎病毒具有高度的种族特异性而缺少理想的动物模型,因此细胞模型的建立和应用已成为HBV感染防治研究的必要条件。本文重点介绍了HBVDNA转染细胞模型的建立和核苷(酸)类似物耐药细胞模型的建立与应用方法。
- 周玉冰郑立运
- 关键词：乙型肝炎病毒耐药细胞模型
