安徽省自然科学基金(070411019)
- 作品数：5 被引量：39H指数：4
- 相关作者：李槿年余为一李小飞张传亮祖国掌更多>>
- 相关机构：安徽农业大学安徽中医学院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金安徽省教育厅项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 拟态弧菌外膜蛋白OmpU基因的原核表达及其免疫保护性研究被引量：9
- 2008年
- 自行构建的pMD18T-OmpU重组克隆质粒经BamHI/EcoRI双酶切后,定向插入原核表达质粒pGEX-4T-1中构建重组表达质粒pGEX-4T-1-OmpU。将重组表达质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21进行IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,以包涵体形式表达的GST-OmpU融合蛋白的分子量约为62.9kD,可与鼠抗拟态弧菌外膜蛋白(Omps)免疫血清发生特异性反应,提示重组OmpU保留了天然Omps的抗原性。用纯化的融合蛋白免疫昆明系小鼠,以50LD50拟态弧菌(5×108CFU/mL)攻击,小鼠的免疫保护率为60%(9/15)。表明OmpU是拟态弧菌的保护性抗原之一,具有研发成为外膜蛋白基因工程亚单位苗的潜在价值。
- 李小飞李槿年季晶晶余为一
- 关键词：拟态弧菌原核表达免疫保护性
- 拟态弧菌安徽分离株外膜蛋白基因OmpU的克隆测序与生物信息学分析被引量：6
- 2007年
- 测序结果显示4株拟态弧菌OmpU基因片段长为849～876bp,编码283～292个氨基酸;拟态弧菌HX4分离株OmpU基因ORF长1 038 bp,编码346个氨基酸。生物信息学分析结果显示,OmpU基因在拟态弧菌安徽分离株之间及其与霍乱弧菌参考株间均具有较高保守性,彼此间核苷酸同源性和氨基酸同源性分别介于82.8%～99.6%和83.3%～100%;拟态弧菌OmpU蛋白N端前22个氨基酸组成信号肽,N末端有1个明显疏水区,并含有多个蛋白激酶磷酸化位点和糖基化位点;OmpU蛋白含有2个明显跨膜域,二级结构中富含β-折叠结构,在蛋白的53～66 aa、185～192 aa、215～219 aa和275～281 aa之间可能存在抗原表位。
- 李小飞李槿年张传亮余为一
- 关键词：拟态弧菌克隆测序生物信息学分析
- 中草药复方对拟态弧菌的体内外抗菌和拮抗外毒素的作用被引量：4
- 2008年
- 目的探明拟态弧菌外毒素的致病性,筛选出对拟态弧菌具有良好抗菌和拮抗外毒素作用的中草药复方。方法培养拟态弧菌安徽分离株,采用蛋白分离技术提取其外毒素,测定其对实验草鱼的致病性。以黄连、大黄、金银花、夏枯草、丹皮、地锦草、连翘、茯苓、车前子、黄芪和甘草组成3个复方,采用改良微量稀释法测定不同中草药复方对拟态弧菌的体外抑菌作用。同时使用动物模型测定不同中草药复方拮抗外毒素作用和对拟态弧菌感染草鱼的保护作用。结果4株拟态弧菌产生的外毒素对实验鱼均具有较强的致死性。复方3的体外抑菌作用最强,对4株拟态弧菌的MIC值均为1.96g/L;其次为复方1,其MIC值介于3.92～7.84g/L;复方2的抑菌作用最差,其MIC值介于62.72～125g/L。复方3拮抗外毒素作用最强,其次为复方2,复方1不具有抗毒素作用。复方3对拟态弧菌感染草鱼具有最好的保护作用,保护率为100%;其次为复方2,保护率为23.81%;复方1的保护率最低,仅为19.05%。结论拟态弧菌外毒素在腹水病发生过程中起着重要致病作用。复方3具有良好的抗菌和拮抗外毒素作用,为筛选出的最佳复方,可进一步研制成为治疗腹水病的中草药复方制剂。
- 张传亮李槿年祖国掌
- 关键词：中草药复方拟态弧菌抗菌作用
- 水产动物常见病原菌的耐药性分析及中草药体外抑菌活性的检测被引量：20
- 2007年
- 目的了解安徽省水产动物常见病原菌的耐药现状和耐药机制，探讨27种单味中草药和5个中草药复方配伍对耐药菌株的体外抑菌活性。方法分别采用K—B纸片琼脂扩散法和双纸片增效法检测常见病原菌的耐药性和ESBLs，同时使用平板打孔法和改良微量稀释法检测中草药的体外抑菌活性。结果4种常见病原菌的23个分离株对常用的5类抗生素均呈现不同程度的耐药性，其中铜绿假单胞菌的耐药谱最广，对14种抗生素的耐药率均为100％。供试菌中仅检出2株铜绿假单胞菌为产ESBLs株，检出率为8．69％。黄连、大黄、金银花、夏枯草、地锦草、丹皮、马齿苋和连翘8种中草药对供试耐药株均有较强的抑制活性，其中黄连、大黄和金银花的抑菌活性尤为明显，其MIC值分别介于1．96～125g／L、7．84～125g／L和15．68～250g／L。5个复方配伍中以复方5的配伍效果最好，其MIC值为1．96～15．68g／L，抑菌活性显著优于单味药；其次是复方1和复方3，其MIC值为1．96～62．72吕／L；复方2和复方4的配伍效果差，其MIC值为31．36～125g／L。结论4种23株常见病原菌均为耐药菌株，产生ESBLs是铜绿假单胞菌高度多重耐药的主要机制之一。黄连、大黄、金银花和复方5配伍对常见病原菌耐药株具有良好的抑菌活性。
- 张传亮李槿年汪兴生祖国掌李小飞余为一
- 关键词：水产动物病原菌耐药性中草药抑菌活性
- 拟态弧菌OmpU抗原表位的预测与多表位疫苗分子的设计被引量：4
- 2008年
- 以拟态弧菌安徽分离株OmpU基因序列为基础,应用DNAStar Protean软件联合采用多种方法对OmpU的二级结构、柔性、亲水性、表面可能性和抗原指数等方面进行分析,预测OmpU的抗原表位,并以此设计多表位疫苗分子序列。结果表明,拟态弧菌OmpU至少含有9个B细胞表位,其中第24～31、56～66、93～111、123～129、183～198、253～258和275～287共7个区段的平均抗原指数较高。使用AAY接头以epitope5-epitope7-epitope2-epitope6-epitope3-epitope4-epitope1排列方式串联的多表位序列最接近原蛋白构象,各表位间相对独立,抗原性参数也较好,可作为研制多表位疫苗的候选分子序列。
- 季晶晶李槿年
- 关键词：拟态弧菌抗原表位多表位疫苗分子设计
