国家自然科学基金(30771797)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
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- 体外缺氧条件下新生鼠神经干细胞pERK1/2表达与叶酸的影响
- 2010年
- 背景:课题组前期实验已经证实,神经干细胞在正常培养条件下,叶酸可通过丝裂原活化蛋白激酶通路激活ERK1/2的磷酸化,进而促进神经干细胞的增殖。目的:探讨叶酸在体外缺氧条件下对神经干细胞外信号调节蛋白激酶pERK1/2表达的影响。方法:采用无血清培养法体外分离培养新生鼠神经干细胞,以1×108L-1接种于培养瓶,设立4组,除正常对照组外,缺氧模型组、叶酸缺乏组、叶酸添加组细胞均于第3天放入自制缺氧装置,37℃恒温箱中缺氧培养6h,4组的叶酸含量分别为4mg/L,4mg/L,0.65mg/L,8mg/L。收集增殖6d的细胞,锥虫蓝计数细胞密度,RT-PCR法检测pERK1/2 mRNA的表达,Westernblot法检测pERK1/2蛋白的表达。结果与结论:与正常对照组比较,缺氧模型组神经干细胞增殖能力、pERK1/2 mRNA及蛋白的表达均明显降低。与缺氧模型组比较,叶酸添加组能促进缺氧条件下神经干细胞增殖以及pERK1/2 mRNA、蛋白的表达,而叶酸缺乏组则抑制缺氧条件下神经干细胞的增殖以及pERK1/2 mRNA、蛋白的表达,各组间比较差异有显著性意义(P<0.001)。证实添加叶酸后可激活ERK1/2磷酸化,进而促进缺氧条件下神经干细胞的增殖。
- 杨阳黄国伟张绪梅赵琳尤清菊刘佳杰
- 关键词：缺氧培养神经干细胞
- 胚胎大鼠神经干细胞双向凝胶电泳方法的建立被引量：2
- 2010年
- 背景:神经干细胞是当今研究热点,双向电泳是蛋白质组学研究的技术基础,有必要建立稳定的神经干细胞蛋白质组双向凝胶电泳技术体系。目的:通过对神经干细胞双向凝胶电泳几个关键步骤的分析,建立稳定、重复性好的神经干细胞双向凝胶电泳的分离方法。方法:采用无血清体外细胞培养方法,培养胚胎大鼠神经干细胞并进行鉴定。提取样品蛋白并裂解,被动水化,采用不同IEF 参数,使用 PDQuest8.0 软件对图谱进行分析和比较。观察不同等点聚焦参数下双向电泳图谱质量,蛋白质点的数目及重复性。结果与结论:不同 IEF 参数条件下的双向电泳图谱的质量有所不同,增加低电压的除盐步骤有助于去除电泳胶图上的横纹。在 80 000 Vh 聚焦总能量下,获得较理想的电泳图。通过选用适当的 IEF 参数,建立了适当的神经干细胞双向凝胶电泳方法。
- 刘欢黄国伟何冰杨阳赵琳
- 关键词：胚胎大鼠神经干细胞蛋白质组学双向凝胶电泳神经退行性疾病
- 叶酸对体外缺氧新生大鼠神经干细胞Hes5基因表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨叶酸对体外缺氧新生大鼠神经干细胞Hes5mRNA、蛋白表达的影响。方法:分离培养24h新生SD大鼠脑神经干细胞;将细胞分为4组:正常对照组、缺氧模型组、缺氧叶酸添加组、缺氧叶酸缺乏组;于增殖第3天将除正常对照组外的其他3组细胞进行缺氧培养,6h后取出,继续培养至第6天收集细胞;用台盼蓝染色计数缺氧损伤后的各组细胞密度;RT-PCR方法检测Hes5mRNA表达;Westernblot方法检测Hes5蛋白表达。结果:缺氧叶酸添加组细胞密度高于其他各组,缺氧叶酸缺乏组最低,差异均有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,缺氧叶酸添加组的Hes5mRNA表达量高于其余3组,缺氧叶酸缺乏组表达最少,各组间差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot检测表明,缺氧叶酸添加组Hes5蛋白表达高于其他各组,缺氧叶酸缺乏组Hes5蛋白表达量最低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:体外神经干细胞缺氧损伤造模成功;叶酸对缺氧损伤的神经干细胞增殖有促进作用,可为预防和治疗脑缺血缺氧损伤提供依据。
- 赵琳张绪梅刘欢杨阳尤清菊刘佳杰黄国伟
- 关键词：叶酸缺氧神经干细胞
- 双向电泳分析叶酸对神经干细胞蛋白表达的影响
- 2011年
- 目的:探讨叶酸缺乏对胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)蛋白质表达的影响。方法:采用无血清体外细胞培养方法,培养胚胎大鼠NSCs并进行鉴定,采用叶酸缺乏培养基培养NSCs,根据叶酸添加终浓度将细胞分为对照(Con?trol)组、叶酸缺乏(Folate-D)组、叶酸补充(Folate-L)组,各组叶酸终浓度分别为4、0.6、8mg/L。应用双向电泳(2-DE)技术分析各组蛋白质表达的差异。结果:建立了稳定可重复的NSCs2-DE图谱,与Control组相比,Folate-D组2个蛋白点表达量降低,4个蛋白点表达量升高;Folate-L组2个蛋白点表达量降低,1个蛋白点表达量升高。结论:叶酸缺乏或补充叶酸影响NSCs蛋白表达,差异蛋白分离为进一步研究叶酸对NSCs增殖分化调控机制奠定了基础。
- 刘欢黄国伟何冰杨阳赵琳
- 关键词：电泳叶酸干细胞蛋白质组学SPRAGUE-DAWLEY
- 叶酸对体外缺氧神经干细胞保护作用的研究被引量：1
- 2010年
- 目的研究叶酸(folate,Fol)对体外培养缺氧神经干细胞(neural stem cell,NSCs)增殖、凋亡和抗氧化能力的影响。方法采用无血清体外细胞培养方法,培养新生大鼠NSCs。将其分为4组,即正常对照(normal control,NC)、缺氧模型(hypoxia,Hyp)、缺氧叶酸缺乏(Hpy+Fol-D)和缺氧叶酸添加(Hpy+Fol)组。除NC组以外,其余三组放入缺氧环境中6h,造成缺氧损伤。采用MTT法检测缺氧后细胞增殖能力的变化;收集增殖6d的细胞,测定缺氧后NSCs超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性;采用Western blot方法检测caspase-3的活性表达水平。结果与NC组比较,缺氧干预后NSCs增殖明显下降,SOD和GSH-PX活性降低,caspase-3的活性表达增加;Hpy组细胞增殖能力、SOD和GSH-PX活性均显著高于Hpy+Fol-D组,低于Hpy+Fol组(P<0.05),caspase-3的活性表达显著高于Hpy+Fol组,低于Hpy+Fol-D组(P<0.05)。结论缺氧可造成NSCs损伤,叶酸缺乏能使缺氧后NSCs的损伤加重,补充叶酸能促进缺氧后NSCs增殖,提高其抗氧化能力,抑制NSCs凋亡,对体外大鼠NSCs的缺氧损伤恢复有促进作用。
- 刘佳杰刘欢张绪梅杨阳尤清菊黄国伟
- 关键词：叶酸神经干细胞缺氧增殖凋亡
