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粉尘螨Der f5克隆表达、纯化和免疫原性鉴定被引量：1: 2013年; 目的克隆表达粉尘螨第5组变应原(dermatophagoides farinae,Der f5)基因,并鉴定纯化蛋白免疫原性。方法根据Der f5基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出Der f5基因片段,PCR产物克隆入pMD18-T载体,转化大肠埃希菌Top10,经PCR和酶切鉴定并测序。将上述所得阳性克隆菌株扩大培养,碱裂解法提取质粒,所得重组质粒pMD18-T-Der f5和空质粒pET-32a同时用限制性内切酶Bam HⅠ与HindⅢ双酶切,经纯化后连接并转化至大肠埃希菌Top10。构建的重组质粒pET32a-Der f5,经PCR、酶切和测序鉴定后,再转化至大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化重组质粒pET32a-Der f5表达产生的组氨酸重组蛋白。结果构建了重组质粒pMD18-T-Der f5和pET32a-Der f5。SDS-PAGE结果表明Der f5基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中获得良好的表达,经亲和层析纯化后,SDS-PAGE结果显示单一条带。该蛋白以尘螨过敏患者血清进行Western blotting,结果表明具有良好的IgE结合活性。结论克隆、表达并纯化了具有良好尘螨致敏患者IgE结合活性的Der f5,为粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了基础。; 袁小惠高安健邬玉兰刘志刚; 关键词：粉尘螨 F5 蛋白表达纯化免疫印迹

粉尘螨在空气净化器作用下扫描电镜形态观察被引量：3: 2013年; 目的用扫描电镜观察粉尘螨经空气净化器等离子静电高压场强作用后其形态学变化,为除螨空气净化器的研制提供依据。方法取粉尘螨成虫放置在空气净化器中,按不同时间段(0、12、24、48、72和84h)分组,每组200只粉尘螨,取出后于解剖显微镜下观察粉尘螨的死亡状况;用扫描电镜观察实验前粉尘螨和死亡粉尘螨的形态学变化,用扫描电镜进行扫描、拍照。结果用扫描电镜能清楚地观察到粉尘螨颚体、躯体、足和外生殖器的超微结构。经空气净化器高压场强作用死亡后的粉尘螨,整个躯体呈现干扁皱缩状,四肢向躯体卷曲,表面刚毛凌乱,外形明显改变,雌、雄外生殖器变形,结构不清晰。结论当空气净化器将空气中的大量水分电离成为离子状态时,造成局部相对干燥的环境而使粉尘螨脱水死亡,故空气净化器具有杀灭粉尘螨的作用。; 刘晓宇马忠校赵莹颖林枫刘志刚; 关键词：空气净化器粉尘螨等离子扫描电镜

热休克蛋白70及其在支气管哮喘中的研究进展: 2014年; 热休克蛋白为一类广泛存在于各种生物体的应激蛋白，其高度的保守性及“分子伴侣”功能已为人们所认识。热休克蛋白70为热休克蛋白家族在细胞内含量最多且最保守的一类。近年来，越来越多的研究表明热休克蛋白70在支气管哮喘的免疫及炎症中发挥重要作用，但确切机制尚未明了，仍待进一步的研究探索。; 王月明肖小军黄礼年; 关键词：热休克蛋白70 支气管哮喘

谷跗线螨扫描电镜的形态学观察: 2013年; 目的用扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察谷跗线螨(Tarsonemus granarius)的体表形态特征。方法从空调滤网灰尘中采集谷跗线螨,在连续变倍体视镜下清洗处理活螨后,用SEM观察其外部形态特征。结果用SEM观察谷跗线螨的体表形态结构,明确了谷跗线螨颚体、背板、基节板、表皮内突、刚毛等外部形态结构特点。结论用SEM清晰地观察到谷跗线螨的体表形态,对螨类鉴别及其变应原等的研究有重要的意义。; 赵学影赵振富孙新刘志刚; 关键词：跗线螨科扫描电镜形态学

谷跗线螨交叉反应性变应原的定位被引量：2: 2011年; 为明确谷跗线螨Tarsonemus granarius交叉反应性变应原在体内的定位,制作谷跗线螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构;选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,免疫组织化学染色分析其交叉反应性抗原存在位置。HE染色显示谷跗线螨的消化系统占据其体腔的大部分,包括口咽部、中肠、后肠、肛门和唾液腺等结构。免疫组织化学染色显示谷跗线螨的口咽部、中肠、肠内容物、肠壁及生殖腺等均有阳性反应。谷跗线螨体内存在可诱发人体IgE抗体的变应原,变应原在其体内的分布格局与屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus基本一致。; 赵学影赵振富孙新刘志刚吕艳思; 关键词：跗线螨科变应原抗原定位 HE染色交叉反应性

粉尘螨Der f15的基因克隆与其表达载体的构建被引量：4: 2013年; 先挑取纯培养的粉尘螨,提取总的RNA,后采用RT-PCR方法进行反转录出cDNA.由cDNA提取出目的基因进行片段扩增,产物连接入T载体(pMD18-T).经扩增后,用EcoR I和Xho I双酶切,将目的基因分别连接到pET28和pET32的表达载体上,得到重组质粒pET28和pET32,即粉尘螨的基因克隆与表达载体构建成功.; 李钟鸣邬玉兰刘志刚; 关键词：粉尘螨克隆

谷跗线螨精氨酸激酶基因的克隆及序列分析: 2016年; 目的揭示谷跗线螨Tarsonemus granarius体内存在泛变应原精氨酸激酶(arginine kinase,AK)。方法从空调滤网灰尘中采集谷跗线螨(约6 000只)并提取总RNA,反转录为cDNA,设计简并引物,PCR克隆谷跗线螨AK片段,采用生物信息学软件分析克隆基因的编码蛋白特性。结果测序和序列分析结果表明,谷跗线螨AK基因的开放阅读框由724个碱基组成,其编码的蛋白相对分子质量约为26 019,等电点为10.10。结论成功克隆了谷跗线螨AK基因,为进一步谷跗线螨AK蛋白的重组表达以及过敏原性分析奠定基础。; 赵学影杨小迪邬玉兰刘志刚孙新; 关键词：精氨酸激酶基因克隆

粉尘螨第十六类变应原的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定被引量：2: 2013年; 目的获得大量具有良好IgE结合活性的粉尘螨第十六类变应原(Der f16)的重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,根据已知Der f16基因序列设计引物,经RT-PCR扩增Der f16基因片段,产物连入pMD32-T载体中。扩增后,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切将目的基因片段连接到pET32a表达载体上,转化到大肠杆菌(E.coli BL21)中经IPTG诱导表达。表达载体经亲和层析纯化,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western bolt检测变应原免疫学活性。结果以粉尘螨总RNA为模板成功克隆出Der f16基因,与数据库中Der f16基因同源性为100%;经IPTG诱导后,大肠杆菌大量表达Der f16蛋白,所获得的重组蛋白分子质量为73ku,上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物。重组Der f16能够与螨过敏患者血清中的IgE反应,而不与健康者血清中的IgE反应。结论成功构建了Der f16的原核表达载体,并高效表达和纯化出具有免疫原性的Der f16重组蛋白。; 李维中王月明吴莹莹邬玉兰刘志刚; 关键词：粉尘螨克隆纯化

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