国家自然科学基金(3107185)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：罗佳章金刚孙宇马玉媛更多>>
- 相关机构：解放军第305医院广西大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalyticpolypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法分离4头21周龄,体质量25～30kg的雌性健康五指山猪的外周血单个核细胞,Trizol法提取细胞总RNA,RT-PCR特异性扩增目的基因,目的基因插入真核表达载体pDsRed1-N1及改造的pCDNA3-Flage载体构建表达质粒并在PK-15细胞中进行表达。激光共聚焦显微镜及Western blot鉴定目的基因的表达。结果克隆的目的基因与公布的基因序列同源性达99%;激光共聚焦显微镜显示目的基因在PK-15细胞表达,且表达产物定位于细胞质内;Western blot检测示表达的目的蛋白大小与预期相符。结论成功构建了猪APOBEC3F真核表达载体。
- 孙宇罗佳马玉媛章金刚
- 关键词：克隆真核表达载体
- 应用RNA干扰沉默猪内源性反转录病毒被引量：1
- 2012年
- 目的:尝试应用RNA干扰(RNAi)沉默猪源PK-15细胞中的猪内源性反转录病毒(PERV),并通过反转录酶活性及pol基因相对荧光定量PCR检测沉默效果。方法:依据GenBank公布的PERV pol基因序列,采用Invitro-gen公司的BLOCK-iT RNAi Designer软件设计Stealth小干扰RNA(siRNA)序列;将合成的siRNA转染PK-15细胞,72 h后检测细胞上清PERV反转录酶活性及细胞内pol基因拷贝数并评价沉默效果。结果:反转录酶活性及pol基因拷贝数检测结果表明,设计的3条Stealth siRNA序列中,位于pol基因3272～3296 bp的序列能有效沉默PERV。结论:RNAi方法可有效使猪源PK-15细胞中的PERV沉默,为进一步研究天然抗病毒分子与PERV的相互作用提供了实验基础,同时也为猪源异种移植研究中去除PERV提供了一种可供尝试的方法。
- 孙宇马玉媛罗佳章金刚
- 关键词：RNA干扰基因沉默猪内源性反转录病毒
