国家重点基础研究发展计划(2001CB510303)
- 作品数：17 被引量：56H指数：4
- 相关作者：郭静竹梁蓉郁卫东杨丽君尚美更多>>
- 相关机构：北京大学北京大学第一医院山东大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 受体相互作用蛋白140敲低对小鼠小胶质瘤细胞增殖的影响被引量：3
- 2008年
- 目的探讨受体相互作用蛋白（RIP）140基因敲低对小鼠小胶质瘤细胞（BV-2）增殖的影响。方法用脂质体转染方法将RIP140-短发夹RNA（shRNA）质粒导入BV-2细胞，用嘌呤霉素筛选稳定表达RIP140-shRNA的细胞系，用实时定量PCR和Western印迹法检测RIP140敲低的效果，用四甲基偶氮唑蓝（MTY）法检测RIP140敲低对细胞增殖的影响。结果成功构建稳定表达RIP140-shRNA的BV-2-71674和BV-2-71080；与BV-2细胞相比，BV-2-71674和BV-2-71080细胞中RIP140的表达无论mRNA水平还是蛋白质水平均明显低，下调率（mRNA）分别为73％和75％（均P〈0．01）；MTT法检测显示，BV-2细胞在24、48、72、96h 4个时间点增殖率分别为3．03±0．01、7．36±0．08、14．15±0．25、23．35±0．09，BV-2-71674细胞则分别为2．15±0．03、6．43±0．08、11．77±0．31、18．47±0．04，BV-2-71080细胞分别为1．77±0．03、4．74±0．25、10．03±0．02、17．66±0．21；BV-2-71674和BV-2-71080细胞增殖率均明显低于BV-2细胞，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论RIP140敲低可以抑制BV-2细胞的增殖。
- 晁爽郁卫东杜军保曾超美梁蓉杨丽君陈敏霞赵贺华郭静竹
- 关键词：神经胶质瘤细胞增殖
- 人类21号染色体转录调节相关基因作为早期分子诊断标记物的可行性研究被引量：2
- 2005年
- 目的分析与转录调节相关的人类21号染色体(HC21)基因在小鼠植入前胚胎发育过程中的表达模式,初步阐明这些基因与早期胚胎发育的关系,发现这些基因作为分子诊断标记物的可行性。方法应用植入前胚胎的GlobalRT-PCR方法,对BACH1、RUNX1、SIM-2、ERG、KIAA0136、GCFC、SON、PKNOX1、HSF2BP和NRIP1小鼠同源基因在植入前发育阶段的表达模式进行研究。结果RUNX1、ERG和SON在整个植入前发育过程中都未见表达。其他基因的表达呈现出阶段特异性表达的特点:BACH1几乎在整个发育过程中都有表达,但是存在着胚胎个体之间的差异,不适于作为分子标记物;SIM-2只在1和2细胞期表达;Kiaa0136在2、4细胞期以外的各个阶段均表达;除了1-和2-细胞期,GCFC在其它阶段普遍表达;PKNOX1只在1、8细胞以及桑椹期表达;而HSF2BP和NRIP1的表达仅见于成熟的卵母细胞和1细胞期胚胎。结论与转录相关的小鼠HC21同源基因大部分参与了早期胚胎发育的转录调节,这些基因的阶段特异性表达说明他们参与了早期胚胎发育的不同转录调节环节,对这些基因的深入研究是认识唐氏综合症发生的分子机制和发现早期分子诊断标记的基础。
- 郁卫东梁蓉杨丽君关菁李国华郭静竹
- 关键词：21号染色体转录调节分子诊断相关基因胚胎发育过程植入前胚胎
- Smith-Fineman-Myers综合征的精细定位及候选基因分析被引量：2
- 2004年
- 目的 精细定位 Smith- Fineman- Myers综合征 ( Smith- Fineman- Myers syndrome,SFMS)致病基因 ,缩小致病基因候选区域。方法 从原定位区域中选择了 13个新的多态位点 ,采用聚合酶链反应( polymerase chain reaction,PCR)结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 ,分析 SFMS家系中各成员多态位点基因型。从缩小的区域中根据已知基因的功能 ,从中选择了 GPC3、GPCR2、MST4和 GL UD2作为候选基因 ,设计了扩增全部外显子和内含子外显子接头序列的引物 ,通过直接测序法对家系中的患者进行了突变检测。结果 连锁分析结果将 SFMS定位区域缩小到 10 .18Mb,所有 4个候选基因在患者中未检测到突变。结论 候选区域的缩小 ,为最终分离 SFMS的致病基因奠定了基础 ,GPC3、GPCR2、MST4和 GL UD2不是中国山东地区
- 刘奇迹龚瑶琴李江夏张锡宇高贵敏郭亦寿
- 关键词：基因定位突变分析
- SMARCA1基因组结构鉴定及其在Smith-Fineman-Myers综合征家系中的突变分析被引量：1
- 2004年
- 为探讨SMARCA1基因在中国山东SFMS家系患者发生中的作用 ,采用计算机杂交结合DNA序列分析方法 ,首先确定了SMARCA1基因的基因组结构 ,发现该基因的基因组DNA全长超过 71 7kb ,含有 2 4个外显子和 2 3个内含子 ,所有外显子和内含子接头皆遵循GT AG法则 ,基因组结构的阐明 ,为进行基因突变检测和分析其生物学功能奠定了基础。在以上分析的基础上 ,通过PCR扩增结合测序分析 ,对在山东省发现的 1个SFMS家系患者的SMARCA1基因的全部外显子和外显子内含子接头序列进行了基因突变检测 ,未检测到导致疾病的突变 。
- 刘奇迹龚瑶琴张锡宇高贵敏郭亦寿
- 关键词：基因组结构突变分析
- 受体相互作用相关蛋白140在正常小鼠脑发育过程中的表达被引量：4
- 2007年
- 目的了解受体相互作用相关蛋白(RIP)140在正常小鼠脑发育时期的表达情况。方法应用免疫组化方法研究 RIP140在脑组织中的定位,并应用实时定量 PCR 和 Western 印迹研究RIP140在正常小鼠不同发育时期的动态表达模式。结果免疫组化结果显示 RIP140在正常小鼠脑发育过程中始终存在表达,且在大脑皮质、海马、丘脑等部位有明确的表达。实时定量 PCR 结果显示RIP140 mRNA 在正常小鼠脑不同发育时期的表达呈现动态变化模式,Western 印迹结果示 RIP140蛋白在小鼠脑不同发育时期的表达也呈现动态变化模式,且与 mRNA 的表达具有正相关性(r_s=0.767,P=0.016<双侧>)。结论 RIP140参与了正常小鼠脑发育和脑功能的行使。
- 张晓蕊曾超美杜军保梁蓉杨丽君郁卫东郭静竹
- 关键词：唐氏综合征聚合酶链反应
- ERG甲基化作为无创产前诊断唐氏综合征标记的可行性研究被引量：12
- 2009年
- 目的探讨ERG基因是否可以作为孕早期血浆中检测胎儿DNA的通用标志物。方法随机选择早期妊娠孕妇70例,并以经体检确定为未孕健康妇女70例、分娩过21-三体胎儿的妇女11例和顺产后3 d妇女20例作为对照组。利用甲基化敏感限制性内切酶HpaⅡ、MspⅠ酶切后进行常规PCR的方法,检测血细胞、绒毛和血浆DNA目的基因ERG21-128序列的甲基化模式,并对妊娠组和对照组样本进行统计学分析。结果位于21号染色体上的ERG基因21-128序列在70例孕8、9、10周孕妇绒毛组织中甲基化而在母体血细胞中未甲基化,绒毛甲基化检出率为100%;在血浆中游离胎儿DNA ERG基因21-128序列的甲基化检出率为77.1%,敏感度为77.1%。其中8、9、10周甲基化差异无统计学意义(P>0.05)。在70例未孕健康妇女、11例生产过21三体胎儿的健康妇女和20例产后3 d妇女的对照组的血浆中ERG 21-128序列均未甲基化。结论在母体和胎儿DNA中,ERG基因21-128区的甲基化有显著性差异,实验方法也比较简单,提示了ERG是无创性产前诊断DS的一个潜在标记物。
- 赵贺华郁卫东梁蓉章利琴谢丽娜郭静竹
- 关键词：胎儿DNA孕妇血浆无创性产前诊断ERG
- 叶酸代谢相关酶基因多态性与唐氏综合征发生易感性的关系被引量：20
- 2006年
- 目的:探讨参与叶酸代谢的亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C667T和甲硫氨酸合成还原酶(MTRR)基因A66G基因多态性与中国汉族母亲生育唐氏综合征(Downsyndrome,DS)患儿易感性的关系。方法:生育过DS患儿的母亲30例,对照母亲70例,MTHFR、MTRR基因C667T及A66G基因座多态性采用聚合酶链反应———限制性片段长度多态性的方法检测。结果:携带MTHFR以及MTRR突变基因型的母亲并不增加孕DS的可能性,两个基因的联合作用分析也表明同时携带MTRR突变位点和MTHFR任一突变位点并不增加孕DS的可能性。MTHFR和MTRR突变基因型的分布在病例组和对照组间差异没有显著性(P>0.05)。结论:在本研究的人群中,MTRR基因A66G基因座多态性以及MTHFR基因C667T基因座多态性并不增加母亲孕DS的危险性,MTHFR以及MTRR基因突变位点并不是母亲生育DS患儿的危险因素。
- 梁蓉郁卫东杜军保杨丽君尚美宋眆王林郭静竹
- 关键词：唐氏综合征亚甲基四氢叶酸还原酶叶酸
- Overexpression or knock-down of runt-related transcription factor 1 affects BCR-ABL-induced proliferation and migration in vitro and leukemogenesis in vivo in mice被引量：1
- 2009年
- (Runx1 ) 背景老牛相关的抄写因素 1 在造血作用和它的机能障碍起一个关键作用可以贡献引起白血病。然而， Runx1 的反常表示是否将导致白血病并且 Runx1 表示水平的变化怎么能影响 BCR-ABL-induced 引起白血病，不是清楚的。在现在的学习，如果在 BaF3 房间的 Runx1 的反常表示将独自导致引起白血病，我们瞄准了到分析。并且我们也想要知道在白血病的房间的 Runx1 的反常表示是否将影响引起白血病。而且，我们调查了是否 overexpression 或包含全身的 Runx1 cDNA 的 leukemogenesis.Methods Plasmids 是的在房间将导致的 BaF3 的 Runx1 击倒 transduced 进 BaF3 房间和 BaF3-P185wt 房间(BCR-ABL 转变了 BaF3 房间) 由 electroporation。包含 Runx1 的短发卡 RNA 的 Plasmids 由 electroporation 是进 BaF3 房间和 BaF3-P185wt 房间的 transduced。Runx1 表示水平被西方的弄污和量的即时 PCR 确定。overexpression 的效果或房间的增长， apoptosis 和移植上的 Runx1 击倒在 vitro 被检测。然后，把 MSCV-P185wt-FGFP 用作控制，我们通过尾巴静脉移植了 MSCV-P185wt-Runx1 房间或 MSCV-P185wt-shRNA 房间进 Balb/c 鼠标并且观察到在 vitro 分析的不同 phenotypes.Results 的 tumorgenesis 在 P185wt 房间揭示了 Runx1 的那 overexpression 能禁止房间增长并且减慢房间移植；当击倒时能 Runx1 支持房间增长并且加快房间移植。在 vivo，分析显示与 MSCV-P185wt-Runx1 移植的老鼠比控制长幸存。相反，与 MSCV-P185wt-shRNA 移植的鼠标比控制组突然幸存。粗野病理学的分析表明 MSCV-P185wt-Runx1 组与控制组相比有更少的严重脾大和肝肿大，并且 MSCV-P185wt-shRNA 组有更多的严重脾大和肝肿大。没有脾大或肝肿大在与 MSCV-BaF3-Runx1 房间或 MSCV-BaF3-shRNA 房间移植的老鼠被检测。两 MSCV-BaF3-Runx1 组和 MSCV-BaF3-shRNA 组的老鼠没有为多达三 months.Conclusions Overexpression 的白血病的符号是健康�
- YANG Li-junYU Wei-dongDU Jun-baoCHAO ShuangCHEN Min-xiaZHAO He-huaGUO Jing-zhu
- 关键词：抑制细胞增殖基因诱导C小鼠ABL
- SSH法分离早期发育相关基因片段被引量：5
- 2005年
- 目的 :分离和鉴定与小鼠合子基因组激活 (ZGA)以及母源调控向胚胎调控 (MZT)过渡事件相关的基因片段 ,为进一步认识ZGA和MZT发生的分子机制奠定基础。方法 :利用单个植入前胚胎抑制性消减杂交 (SPE SSH)的方法 ,对单个小鼠MⅡ卵母细胞和 2 细胞期胚胎进行双向消减杂交 ;利用cDNAarray对获得的基因片段作进一步的鉴定。结果 :从构建的消减杂交库中随机挑取得 31个克隆 ,经cDNAarray鉴定发现其中有 5个MⅡ期特异表达的基因片段和 9个 2 细胞期特异表达的基因片段 ,Genbank检索发现其中 1 0个片段是首次报道在植入前发育阶段表达。结论 :这些基因片段具有明显的期特异性表达的特点 ,可能在ZGA、MZT和胚胎植入前发育过程中起着重要的作用。
- 郁卫东梁蓉杨丽君郭静竹
- 关键词：基因片段消减杂交相关基因植入前胚胎细胞期特异表达早期发育
- 小鼠MⅡ卵母细胞中人类21号染色体同源基因的表达分析被引量：1
- 2004年
- 目的 考察人类 2 1号染色体 (HC2 1)同源基因在成熟的小鼠MⅡ卵母细胞中的表达模式 ,探讨其与早期胚胎发育以及唐氏综合征 (DS)表型发生的关系。方法 采用单个卵母细胞cDNAArray和GlobalRT PCR方法 ,对 93个人鼠同源的HC2 1基因在卵母细胞中的表达进行分析和鉴定。结果 93个基因中 ,有 2 6个在成熟的MⅡ卵母细胞成熟表达 ,这些基因涉及转录调节、代谢、离子通道和泛素作用等多个生物学环节。结论 表达模式的考察和验证表明这 2 6个基因直接参与正常胚胎发育的早期过程 ,这种表达模式的建立不仅为系统研究染色体不分离所致的基因表达失衡奠定了坚实的理论基础 。
- 郁卫东梁蓉沈浣田莉杨丽君郭静竹
- 关键词：小鼠同源基因卵母细胞成熟21号染色体人鼠
