上海市教育委员会重点学科基金(B990802)
- 作品数：9 被引量：68H指数：5
- 相关作者：郭慕依张志刚陈琦王慧君刘学光更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院复旦大学昆明医学院更多>>
- 发文基金：上海市教育委员会重点学科基金国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转化生长因子β1及其信号转导分子Smad2在病变肾小球中的表达及其意义被引量：28
- 2002年
- 目的 探讨转化生长因子 β1(TGF β1)及其信号转导分子Smad 2在肾小球肾炎中的表达及其意义。方法 以 11例肾小球轻微病变为对照组 ,对各种不同组织学类型的IgA肾病 4 0例、膜性肾炎 10例、硬化性肾炎 11例的肾穿刺活检标本 ,分别行原位分子杂交检测肾小球Smad 2mRNA的表达和免疫组织化学ABC方法观察TGF β1、Ⅳ型胶原及纤连蛋白在肾小球中的染色强度 ,并对其检测结果作图像分析处理。结果 除轻微病变型IgA肾病的Smad 2mRNA表达外 ,其他病理类型肾炎中病变肾小球TGF β1蛋白和Smad 2mRNA的表达均高于对照组 ,且两者在肾小球中的表达与Ⅳ型胶原、纤连蛋白在肾小球中的沉积呈正相关。结论 TGF β1及其信号转导分子Smad 2可能参与了病变肾小球细胞外基质的过量积聚 。
- 阮永华张志刚张秀荣刘琛郭慕依
- 关键词：转化生长因子-Β反式作用因子原位分子杂交
- IL-6、IL-1和PDGF对大鼠肾小球系膜细胞生长的影响被引量：4
- 2000年
- 目的 :探讨白细胞介素 - 6 (IL- 6 )、白细胞介素 - 1(IL- 1)和血小板源生长因子 (PDGF)对大鼠肾小球系膜细胞 (Ms C)增殖的影响。方法 :采用改良的 MTT法和 Brd U掺入法检测 SD大鼠体外 Ms C悬液中加入 IL- 6、IL- 1及 PDGF后 12 h及 2 4h的增殖情况 ,分 7组进行观察。结果 :IL- 6组、IL- 1组和 PDGF组 12 h及 2 4h的光密度 (OD值 )与标记指数 (L I)均比 2 % FCS组高 ;IL - 6加 IL - 1组或 IL - 6加 PDGF组 12 h及 2 4h的 OD值与 L I也均比 2 % FCS组高 ,但所有实验组均不能达到 2 0 % FCS组的细胞增殖水平。联合应用双因子刺激 12 h及 2 4h均未见明显的协同促增殖作用。结论 :IL - 6、IL - 1及 PDGF均能在一定程度上刺激大鼠肾小球 Ms C增生 ,联合应用双因子刺激无明显的协同效应。
- 王慧君张志刚张农张悦张秀荣陈琦郭慕依
- 关键词：肾小球系膜细胞IL-6IL-1PDGF
- 肾上腺髓质素单克隆抗体制备和在人体器官组织中的表达
- 2002年
- 目的 自制特异性肾上腺髓质素 (AM)单克隆抗体 ,观察AM在人正常组织中的表达。方法 以AM为抗原免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞株融合 ,建立阳性杂交瘤细胞克隆 ,制备AM单克隆抗体 ;以此为第一抗体 ,采用ABC免疫组化法检测其在人体心、肾、肝、肺和脾组织的表达。结果 AM在上述器官中的分布较广泛 ,表达于这些组织中的血管平滑肌细胞和内皮细胞 ,以及心肌细胞、肾小球上皮细胞和内皮细胞 ,肾小管和集合管上皮细胞 ,肝胆管上皮细胞 ,肺支气管及其黏液腺上皮细胞、平滑肌细胞和肺泡Ⅱ型上皮细胞胞质。结论 AM在人器官组织中分布广泛 ,提示其生物学作用可能是多方面的。
- 刘学光张秀荣赵仲华张志刚陈琦郭慕依
- 关键词：肾上腺髓质素单克隆抗体
- DCN基因转染对大鼠肾系膜细胞生长及表型改变的影响被引量：7
- 2003年
- 目的 通过观察转染DCN基因的大鼠系膜细胞 (MsC)生长及其一些表型的改变 ,为其用作细胞载体回输入大鼠肾病模型体内进行基因治疗奠定实验基础。方法 采用MTT比色法和流式细胞仪技术 ,检测该MsC株生长情况 ;Northernblot和Westernblot法检测其TGF β1mRNA、ColⅣmRNA和TGF β1蛋白表达水平 ;半定量RT PCR法检测其TIMP 2mRNA表达的改变。结果 与未转染MsC相比 ,转染DCN基因的MsC株的生长受到明显抑制 (5d时P <0 .0 5 ,6d时P <0 .0 1) ;G0 /G1期比例增加 ,S期比例降低 ,提示其生长缓慢 ;TGF β1和ColⅣmRNA表达明显降低 ,TGF β1蛋白分泌减少 ;TIMP 2mRNA表达明显下调。 结论 转染DCN基因的MsC可被用作载体开展对大鼠系膜增生性肾炎的实验治疗。
- 王慧君张志刚刘学光陈广平陈琦郭慕依
- 关键词：肾系膜细胞基因表型流式细胞仪技术系膜增生性肾炎
- 转化生长因子β1对大鼠系膜细胞醛糖还原酶表达的影响被引量：2
- 2001年
- 目的 对转染人转化生长因子 (TGF) β1基因的大鼠系膜细胞 (MsC)进行相关反应性基因的筛选 ,并观察TGF β1对其中之一的醛糖还原酶表达的影响。 方法 采用SSH PCR和反向杂交法对转染人TGF β1基因的MsC筛选其相关反应性基因 ,并进行测序及与GenBank资料作同源性序列比较 ;又分别应用半定量RT PCR、Westernblot法观察其在动物体内和培养的MsC中表达的变化。结果 经筛选获得的 2 8个反应性基因cDNA片段 ,1个长度为 337bp的cDNA片段与已知醛糖还原酶同源性完全一致 ;体外培养的MsC经TGF β1作用 ,该酶mRNA和蛋白表达增强 ;在大鼠抗Thy1系膜增生性肾小球肾炎病变肾组织中 ,该酶mRNA和蛋白的表达随TGF β1表达上调而明显增强。结论 醛糖还原酶是一个与TGF β1基因表达密切相关的多元醇代谢通路的关键酶 ,可能参与TGF
- 林文生张农秦蓉刘琛郭慕依
- 关键词：转化生长因子Β1肾小球肾炎
- TGF-β1对大鼠系膜细胞增殖和纤溶酶原激活物及其抑制剂表达的影响被引量：15
- 2001年
- 目的 通过对大鼠系膜细胞转染TGF β1基因和反义TGF β1基因 ,观察该细胞增殖和纤溶酶原激活物及其抑制剂表达的影响。方法 采用MTT、细胞计数和流式细胞仪检测细胞增殖 ;Northernblot和Westernblot法检测其纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)的表达 ;酶谱分析法检测其纤溶酶原激活物 (tPA)活性。结果 过表达TGF β1的系膜细胞生长受抑制 ,其PAI 1mRNA和蛋白表达增强 ,而tPA酶活性则降低 ;而低表达TGF β1的系膜细胞增殖加速 ,其PAI 1mRNA和蛋白表达降低 ,tPA酶活性增强。结论 TGF β1可通过对大鼠系膜细胞增殖、纤溶酶原激活物及其抑制因子表达的影响 。
- 林文生张农张颂文顾建新郭慕依
- 关键词：肾小球系膜细胞转化生长因子-Β1细胞增殖纤溶酶原激活物抑制剂-1
- 稳定表达饰胶蛋白聚糖基因的大鼠肾小球系膜细胞株的建立被引量：8
- 2001年
- 目的 研究将饰胶蛋白聚糖 (decorin ,DCN)基因转染大鼠肾小球系膜细胞的可行性。方法 RT PCR法扩增大鼠DCN基因 ,构建重组真核表达质粒 pcDNA3.1A DCN ,采用脂质体将其转入大鼠MsC ,经G418筛选阳性克隆 ,Westernblot及RT PCR法鉴定。结果 成功构建重组真核表达质粒 pcDNA3 .1A DCN ,转染MsC并筛选出 2个阳性克隆株。结论 构建载有DCN基因的MsC载体 。
- 王慧君张志刚陈广平林文生陈琦郭慕依
- 关键词：肾小球系膜细胞饰胶蛋白聚糖基因转染DCN
- 回输转染饰胶蛋白聚糖基因的肾系膜细胞对大鼠抗thy-1血清性肾炎的拮抗作用被引量：7
- 2003年
- 目的 以转染饰胶蛋白聚糖 (decorin)基因的肾系膜细胞 (MsC)为载体 ,经肾动脉回输入抗thy 1血清性肾炎大鼠肾小球 ,观察其存活情况及对模型大鼠肾小球病变的影响及意义。方法 用脂质体介导法将载有目的基因 (decorin)片段转入正常MsC株而获得阳性表达之细胞克隆 ;经尾静脉注射兔抗大鼠thy 1血清 (ATS)复制其抗thy 1系膜增生性肾炎模型 ;经左肾动脉将转基因MsC回输入thy 1肾炎大鼠肾小球 ,并经该鼠MsC原代培养、BrdU和decorin蛋白免疫组织化学染色结合图像分析观察其生存情况 ;应用转化生长因子 β1(TGF β1)、纤连蛋白和Ⅳ型胶原免疫组织化学结合图像分析研究对thy 1系膜增生性肾炎动物模型肾小球病变的影响。 结果 经制备兔抗大鼠ATS ,将其从尾静脉注入大鼠体内成功复制thy 1系膜增生性肾炎模型。经左肾动脉直接注入转染decorin基因的MsC克隆 (D A6) ,经原代培养证实其生长活跃 ,用免疫组织化学法发现其细胞核和细胞质均可分别表达BrdU和decorin蛋白。与未经注射对侧肾相比 ,回输侧肾的肾小球TGF β1、纤连蛋白和Ⅳ型胶原的表达均降低 ,分别为TGF β14d时P <0 .0 5和纤连蛋白、Ⅳ型胶原 1～ 2d时P <0 0 1。结论 通过肾动脉直接输入法将转染decorin基因的细胞克隆回输入大鼠抗thy 1血清性肾炎肾小?
- 王慧君张志刚刘学光张秀荣陈琦郭慕依
- 关键词：回输转染细胞克隆
- 肾小球上皮细胞分泌肾上腺髓质素抑制系膜细胞增殖被引量：3
- 2001年
- 目的 探讨肾上腺髓质素 (AM)及其受体CRLR在培养的大鼠肾小球上皮细胞 (GEC)和系膜细胞(MsC)的表达 ,以及AM对MsC生长的影响。方法 采用RT PCR法分别制备AM及CRLR探针 ,Northernblot法检测其在GEC和MsC的表达 ,[3H]胸腺嘧啶掺入法测定MsC增殖情况。结果 AM仅表达于GEC ,不表达于MsC ,而其受体CRLR的表达则相反。含有AM的GEC培养上清可抑制MsC生长 ,而CRLR阻断剂CGRP8-37可部分消除此抑制作用。结论 GEC可通过合成和分泌AM抑制MsC增殖 ,提示AM作为一种重要的旁分泌因子 ,以保持肾小球微环境稳定 。
- 刘学光陈广平张志刚郭慕依
- 关键词：肾小球上皮细胞肾小球系膜细胞肾上腺髓质素NORTHERNBLOT法
