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国家自然科学基金(81071314)

作品数:6 被引量:15H指数:2
相关作者:张茂俊张建中何利华顾一心乔博更多>>
相关机构:中国疾病预防控制中心传染病预防控制所中国疾病预防控制中心南开大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国疾病预防控制中心青年科研基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 4篇弯曲菌
  • 4篇空肠
  • 4篇空肠弯曲菌
  • 3篇蛋白
  • 2篇抗原
  • 2篇抗原性
  • 2篇抗原性分析
  • 2篇克隆表达
  • 1篇电泳
  • 1篇乙酰转移酶
  • 1篇抑菌
  • 1篇抑菌浓度
  • 1篇质谱
  • 1篇质谱技术
  • 1篇实时PCR
  • 1篇凝胶
  • 1篇凝胶电泳
  • 1篇琼脂稀释法
  • 1篇染色
  • 1篇转移酶

机构

  • 3篇中国疾病预防...
  • 1篇南开大学
  • 1篇中国医学科学...
  • 1篇中国疾病预防...

作者

  • 4篇张茂俊
  • 3篇张建中
  • 2篇乔博
  • 2篇曹芳芳
  • 2篇顾一心
  • 2篇何利华
  • 1篇孟凡亮
  • 1篇谈娟
  • 1篇刘夏阳
  • 1篇王荣敏
  • 1篇耿运琪
  • 1篇刘国栋
  • 1篇乔文涛
  • 1篇常锐
  • 1篇肖迪
  • 1篇陈启民
  • 1篇陶晓霞
  • 1篇刘红莹
  • 1篇赵飞
  • 1篇宫亚楠

传媒

  • 3篇中国人兽共患...
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇Biomed...
  • 1篇中国病原生物...

年份

  • 3篇2013
  • 1篇2012
  • 2篇2011
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
In Vitro Protein Expression Profile of Campylobacter jejuni Strain NCTC11168 by Two-dimensional Gel Electrophoresis and Mass Spectrometry被引量:2
2013年
Objective To investigate the protein expression profiles of the major food‐borne pathogen Campylobacter jejuni NCTC11168.Methods Membrane and soluble cellular proteins were extracted from the genome‐sequenced C.jejuni strain NCTC11168.Protein expression profiles were determined using two‐dimensional gel electrophoresis(2‐DE).All the detected spots on the 2‐DE map were subjected to matrix‐assisted laser desorption/ionization time‐of‐flight mass spectrometry(MALDI‐TOF/TOF) analysis.Results A total of 537 and 333 spots were detected from the whole cell and membrane‐associated proteins of C.jejuni NCTC11168 cultured on Columbia agar medium at 42 ℃ by 2‐DE and Coomassie Brilliant Blue staining,respectively.Analyses of whole cell and membrane‐associated proteins included 399 and 133 spots,respectively,which included 182 and 53 functional proteins identified by MALDI‐TOF/TOF analysis.Conclusion The comprehensive expression protein profiles of C.jeuni NCTC11168 obtained in this study will be useful for elucidating the roles of these proteins in further pathogenesis investigation.
ZHANG Mao JunGU Yi XinDI XiaoZHAO FeiYOU Yuan HaiMENG Fan LiangZHANG Jian Zhong
关键词:空肠弯曲菌二维凝胶电泳表达谱质谱技术考马斯亮蓝染色
重组p300组蛋白乙酰转移酶结构域的表达及应用被引量:2
2011年
组蛋白乙酰化修饰是基因起始转录的关键步骤.p300等组蛋白乙酰转移酶(HATs)催化组蛋白和非组蛋白的乙酰化.HATs具有多种细胞功能,而且乙酰化对底物蛋白的功能改变也具有重要功能.组蛋白乙酰转移酶p300可乙酰化多种细胞内蛋白,某些病毒蛋白与p300有相互作用并促进病毒复制.因此,p300是细胞内具有广泛功能的转录激活因子.组蛋白乙酰转移酶结构域(HAT区)是p300乙酰化酶活性的最小中心功能域,在p300乙酰化底物中具有重要功能.本文重组表达了对应p300 HAT区的GST-p300 HAT蛋白,对其乙酰化酶的活性进行检测.结果证实,p300 HAT蛋白在体外可高效乙酰化组蛋白H3.随后,对体外乙酰化反应的条件进行优化.总之,本文构建了一种简单高效、非放射性体外乙酰化体系,适用于对潜在底物蛋白的乙酰化水平和机制进行分析,以及乙酰化蛋白的相关功能的研究.
常锐谈娟王荣敏陈启民耿运琪乔文涛
关键词:P300
结肠弯曲菌Real-time PCR检测方法的建立被引量:8
2012年
目的建立结肠弯曲菌实时PCR检测方法并评价该方法的可行性。方法BLAST与Vector NTI Suite 6.0筛选出结肠弯曲菌的特异基因ceuE作为检测靶基因,Primer 5.0和Oligo6.0设计引物和探针,优化实时PCR反应体系并评价其最低检测限、特异性、可重复性。结果与结论在结肠弯曲菌的ceuE特异基因上设计引物和探针,经优化了的实时PCR反应体系最低检测限为5.62CFU,特异度为100%,变异系数为0.15%~1.30%,本研究为结肠弯曲菌的快速检测提供了一种参考方法。
乔博许学斌顾一心刘国栋赵飞何利华张建中张茂俊
关键词:实时PCR
空肠弯曲菌cj0069蛋白的克隆表达及抗原性分析
2013年
目的构建空肠弯曲菌cj0069基因原核表达系统,克隆表达cj0069蛋白,根据cj0069的氨基酸序列进行抗原性结构预测分析,并验证其抗原性特征。方法利用在线软件对cj0069蛋白进行抗原性结构预测分析;用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的基因组DNA中扩增cj0069基因,连接入pMD18-T载体,将重组质粒pMD18-T/cj0069和表达载体pGEX-4T-1双酶切,回收cj0069和pGEX-4T-1酶切产物后连接,连接产物转化入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),对重组质粒pGEX-4T-1/cj0069进行测序及酶切鉴定,IPTG诱导其表达,表达产物进行SDS-PAGE分析及飞行质谱鉴定;利用空肠弯曲菌兔免疫血清,采用Western blot分析cj0069蛋白的抗原反应性。结果 PCR扩增、DNA测序及酶切鉴定证实重组质粒pGEX-4T-1/cj0069构建成功,重组表达蛋白rGST-cj0069经飞行质谱鉴定为保守空肠弯曲菌蛋白。结构预测获得cj0069蛋白的抗原性肽段及线性表位等抗原性结构特征。Western blot检测显示该蛋白不能被空肠弯曲菌免疫兔血清识别。结论成功构建cj0069基因重组表达载体pGEX-4T-1/cj0069,并在大肠埃希菌中高效表达,获得的空肠弯曲菌cj0069蛋白具有抗原性结构特征,但针对免疫血清不具有抗原反应性。
刘红莹曹芳芳宫亚楠肖迪张茂俊
关键词:空肠弯曲菌克隆抗原性
空肠弯曲菌琼脂稀释法和E-test法抗生素敏感性检测结果差异分析被引量:2
2013年
目的利用琼脂稀释法和E-test法检测空肠弯曲菌对10种常用抗生素的敏感性,并对检测结果进行比较,为空肠弯曲菌抗生素敏感性检测方法的确定及检测结果的分析提供科学依据。方法应用世界卫生组织(WHO)全球食源性病原菌感染网络(GFN)推荐的弯曲菌的琼脂稀释法与E-test法同时测定100株空肠弯曲菌对10种抗生素最小抑菌浓度(mini-mum inhibitory concentration,MIC)。结果应用相同的判断标准,100株细菌使用琼脂稀释法获得甲硝唑、左氧氟沙星、链霉素、庆大霉素、环丙沙星、四环素、红霉素、氯霉素、氨苄青霉素以及萘啶酸的耐药率分别为:91%、51%、6%、6%、81%、84%、0、12%,、38%、86%。而E-test法的耐药率分别为:84%、57%、5%、7%、84%、86%、0、11%,、45%、87%。配对卡方检验分析结果显示,除甲硝唑及氨苄青霉素外,其余8种抗生素两种检测方法获得针对抗生素的耐药率没有显著差异。针对每种抗生素,E-test法获得的MIC50和MIC90值均高于琼脂稀释法。两种方法获得的MIC值的一致率硝唑最低,为71%。结论使用琼脂稀释法以及E-test法均得到:大于80%的空肠弯曲菌对萘啶酸、甲硝唑、环丙沙星以及四环素的耐药;红霉素、庆大霉素以及链霉素对其生长仍然有较强的抑制作用。E-test法分析空肠弯曲菌对甲硝唑及氨苄青霉素的MIC值及判断耐药结果时,应结合使用琼脂稀释法。
顾一心何利华陶晓霞刘夏阳张建中张茂俊
关键词:空肠弯曲菌琼脂稀释法最小抑菌浓度
空肠弯曲菌AhpC蛋白的克隆表达及抗原性分析被引量:1
2011年
目的构建空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶(ahpC)基因的原核表达系统,克隆表达AhpC蛋白,用Western blot以及ELISA方法检测表达蛋白的抗原性,为筛选空肠弯曲菌感染后特异性抗体检测试剂的制备奠定基础。方法用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的染色体DNA中扩增出ahpC基因,将目的基因插入表达载体pGEX-4T-1后转化入大肠杆菌E.coliBL21(DE3),IPTG诱导重组质粒pGEX-ahpC的表达。SDS-PAGE分析表达产物,采用GST标签亲和层析柱纯化表达蛋白。应用兔免疫血清、临床感染者血清以及健康无感染者血清,利用Western blot以及ELISA的方法分析AhpC蛋白的抗原性并初步评价其在ELISA检测方法中的应用。结果 PCR扩增及双酶切鉴定证实重组质粒构建成功。重组表达蛋白经飞行质谱鉴定为空肠弯曲菌AhpC蛋白,Western blot及ELISA检测结果显示AhpC具有特异抗原性。结论成功构建了ahpC重组表达载体pGEX-4T-1/ahpC,并在大肠杆菌中高效表达。空肠弯曲菌AhpC蛋白具有抗原性,可以作为空肠弯曲菌感染后血清抗体检测的特异抗原。
曹芳芳孟凡亮乔博张茂俊张建中
关键词:空肠弯曲菌克隆表达AHPC抗原性
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