国家重点基础研究发展计划(2007CB513108)
- 作品数：16 被引量：37H指数：3
- 相关作者：林矫矫傅志强石耀军彭金彪洪炀更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所中南大学上海师范大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 基因芯片技术及其在寄生虫学研究中的应用被引量：1
- 2011年
- 随着人类基因组计划（human genome project，HGP）和一些模式生物基因组计划的完成，基因序列数据正以前所未有的速度迅速增长，对基因组学的研究已从结构基因组学逐步转向了功能基因组学。由于基因芯片技术操作简便，获得的信息高度特异、稳定，在寄生虫学研究领域已广泛应用。随着寄生虫分子遗传学研究的进展和寄生虫基因芯片检测工具的开发应用，这一技术用于筛选寄生虫功能基因，探索寄生虫与宿主相互作用，研究寄生虫发病机制及筛选寄生虫诊断抗原、药物靶标和疫苗分子等，大大推动了寄生虫学领域的研究步伐，该文主要介绍了基因芯片技术的分类，并就近几年来基因芯片技术在寄生虫学研究方面的应用作一综述。
- 杨健美冯新港林矫矫
- 关键词：基因芯片微阵列功能基因寄生虫学
- 基于转录本组和蛋白质组数据的日本血吸虫候选疫苗分子序列的预测和分析被引量：1
- 2010年
- 预测了可能模拟致弱疫苗免疫保护性效果的日本血吸虫抗原分子,为实验鉴定抗日本血吸虫候选疫苗分子提供基础.实验基于已发表的辐照尾蚴转化的童虫的特征性转录本组(曼氏血吸虫)和蛋白质组(日本血吸虫)序列,用BLASTP算法等搜寻来源于正常日本血吸虫童虫和成虫的转录本组和蛋白质组中的序列;应用在线软件、相关数据库及文献对这些序列进行序列注释分析.结果获得了与辐照尾蚴转化的童虫特征性表达的分子同源或一致的日本血吸虫序列131条,它们较高比例地出现在正常童虫高表达的分子集类中;进一步文献分析预测得到了52个日本血吸虫候选疫苗分子,它们的序列特征与存在于血吸虫体被的一些分子和已知的抗血吸虫疫苗分子的相类似.用数据挖掘技术获得了一批日本血吸虫候选疫苗分子,为进一步实验研究奠定了基础.
- 贾侃赵犇鹏张艳丽邵东华冯新港林矫矫李利珍
- 关键词：日本血吸虫蛋白质组
- 日本血吸虫新基因Sjnanos的克隆、表达及免疫保护效果评估被引量：2
- 2010年
- 目的扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果。方法从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析。将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清特异性抗体效价,蛋白印迹分析检测其抗原性,以看家基因NADH为内参,应用荧光定量PCR技术分析该基因在血吸虫各个阶段的表达状况。结果同源性分析表明,该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的开放阅读框(ORF)为525bp,编码174个氨基酸,理论相对分子量为19.9,PI为8.2。荧光定量PCR技术分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d、42d虫体均有表达,但在18d和13d虫体的表达量明显高于其他天数的虫体,在雄虫的表达量高于雌虫。成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-Sjnanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western-blot分析表明重组蛋白具有较好的免疫原性,动物免疫保护试验获得了31.4%的减虫率和53.8%的肝脏减卵率。结论获得日本血吸虫新的抗原基因Sjnanos,该基因的重组蛋白在小鼠中诱导了部分免疫保护作用。
- 王艳郭凡吉彭金彪李晔洪炀陈实傅志强石耀军林矫矫
- 关键词：日本血吸虫抗原性免疫保护
- 日本血吸虫Sj Cyclophilin B基因的克隆、表达及免疫保护效果分析
- 2010年
- 本研究克隆和表达了日本血吸虫Cyclophilin B(Sj CyPB)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。本研究以日本血吸虫童虫cDNA为模板,RT-PCR扩增其基因全长cDNA,提交序列到NCBI,登录号为GQ403665。荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,构建重组表达质粒,表达纯化重组蛋白。利用Western blotting检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。结果表明,RT-PCR获得了Sj CyPB编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为672bp。经分析确定其为CyPs家族中的CyPB基因,命名为Sj CyPB。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在18d童虫期表达量最高,32d次之。构建了重组表达质粒pGEX-6P-1-SjCyPB,并在大肠杆菌中成功表达,表达产物分子量为49.5kDa。Western blotting试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得31.5%的减虫率和41.01%的肝脏减卵率。本研究获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPB基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPB原核重组表达质粒,并在大肠杆菌中成功表达,证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。
- 彭金彪韩宏晓洪炀王艳郭凡吉石耀军傅志强刘金明程国锋林矫矫
- 关键词：日本血吸虫CYCLOPHILIN免疫保护效果
- 血吸虫基因操作研究进展被引量：3
- 2009年
- 近年来,血吸虫基因组、转录组、蛋白质组和分泌组研究广泛开展,迫切需要针对单个分子功能深入研究。开展血吸虫基因操作研究不仅可在虫体内深入研究基因功能,对进一步理解血吸虫生长发育机理和寄生生活特征具有重要意义,还可建立抗血吸虫候选疫苗和药物靶标筛选的重要平台。为此,本文总结基因操作技术在血吸虫学中的应用并分析其现状。
- 陈晶林矫矫蔡幼民程国锋
- 关键词：血吸虫基因操作疫苗药物靶标
- 日本血吸虫Sj CyclophilinA基因的克隆、表达及其生物学功能研究被引量：1
- 2010年
- 【目的】克隆和表达了日本血吸虫CyclophilinA(Sj CyPA)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,PCR扩增一EST序列的基因全长cDNA,提交到NCBI,登录号为GQ403666。应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达。诱导、表达、纯化和复性重组蛋白,测定其PPIase活性。利用Western blot检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。【结果】PCR获得了Sj CyPA编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为519bp。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在13d童虫表达量最高,为童虫期高表达基因。构建了重组表达质粒pET28a(+)-Sj CyPA,并在大肠杆菌中成功表达。复性重组蛋白具有PPIase活性。Western blot试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得18.72%的减虫率和44.6%的肝脏减卵率。【结论】获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPA基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPA原核重组表达质粒,在大肠杆菌中成功表达,纯化复性得到有PPIase活性的Sj CyPA重组蛋白,并证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。
- 彭金彪韩宏晓洪炀王欣之石耀军傅志强刘金明林矫矫
- 关键词：日本血吸虫CYCLOPHILIN免疫保护效果
- 日本血吸虫鞘脂激活蛋白原T细胞免疫原性研究
- 目的辐照致弱血吸虫尾蚴或童虫(RA)疫苗能够诱导宿主产生以Th1类CD4+T细胞介导的高保护性效应功能,本研究目标是鉴定日本血吸虫鞘脂激活蛋白原(SiPSAP)分子的免疫原性及其T细胞表位,为发现可能模拟血吸虫RA疫苗保...
- 张艳丽赵犇鹏李莹杨健美苑纯秀冯新港
- 文献传递
- 日本血吸虫SjPRMT1基因的克隆、表达及表达产物的免疫保护效果分析
- 2010年
- 【目的】克隆和表达日本血吸虫精氨酸甲基转移酶1(SjPRMT1)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7d童虫消减cDNA文库中,获得一个EST序列,经序列测定和生物信息学分析命名为SjPRMT1,以SjcDNA为模板,获得其全长cDNA。荧光实时定量PCR分析该基因在童虫和成虫的表达情况。以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,Western blotting检测重组蛋白的抗原性与免疫原性,利用重组抗原免疫小鼠评估其免疫保护效果。【结果】获得了SjPRMT1编码基因的全长cDNA,开放阅读框为660bp,编码219个氨基酸。荧光实时定量PCR分析该基因在18d童虫高表达,13和23d次之。获得了SjPRMT1重组蛋白,其具有良好的抗原性和免疫原性。在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得35.07%的减虫率和48.66%的肝脏减卵率。【结论】获得了日本血吸虫童虫期高表达的SjPRMT1基因的全长cDNA,成功构建了pET28a(+)-SjPRMT1重组质粒,该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。
- 韩宏晓彭金彪洪炀王欣之石耀军傅志强刘金明程国锋李祥瑞林矫矫
- 关键词：日本血吸虫克隆免疫保护小鼠
- 日本血吸虫编码基因pcDNA3／SjHGPRT核酸疫苗在免疫宿主体内分布的观察被引量：2
- 2009年
- 目的观察日本血吸虫候选核酸疫苗pcDNA3/SjHGPRT肌肉注射后在小鼠体内的组织分布。方法将昆明小鼠随机分为3组:生理盐水对照组和pcDNA3对照组和pcDNA3/SjHGPRT实验组,实验组免疫接种剂量为150μg,各组于免疫接种后12h、1、3、6周分批处死,留取全血、心、肝、脾、肺、肾及注射部位肌肉,提取各组织总DNA,PCR法检测pcD-NA3/SjHGPRT的分布。结果接种后12h即可在小鼠血液、心、肝、脾、肺、肾组织及注射部位肌肉中检测到质粒分布,接种后3周仍可在注射部位肌肉组织及个别脏器组织中检测出,至接种后6周不再检出。结论肌肉注射pcDNA3/SjH-GPRT后,可在组织中广泛分布,持续分布时间为接种后3周,随后质粒DNA不再被检出,证明其与小鼠基因组DNA整合的可能性极小。
- 蔡胜蓝向选东汪世平刘芬高冬梅余路新
- 关键词：日本血吸虫核酸疫苗聚合酶链反应
- 日本血吸虫童虫期体被蛋白Th细胞表位预测及初步鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的预测并鉴定日本血吸虫童虫体被蛋白分子的Th细胞表位。方法利用在线服务器分别对有关序列进行跨膜区与信号肽的预测分析;采用结合基序扫描与计分矩阵等算法,以及基于多种分子动力学算法的配体受体相互对接的分子建模方法等进行Th细胞表位预测;人工合成肽采用以多聚赖氨酸为核心的含4个表位肽分支臂的复合抗原多肽;表位肽刺激免疫鼠脾淋巴细胞增殖效果的鉴定采用改良的MTT法。结果从373条日本血吸虫肝期童虫体被蛋白序列中筛得14条具有开放阅读框及信号肽结构的序列;预测得到至少与小鼠的1个MHCⅡ类分子结合的5个15肽表位序列;淋巴细胞增殖试验初步鉴定获得了1个SSLVISYSTVDRLVC(AY815893)候选体被蛋白Th细胞表位。结论初步鉴定了1个潜在的体被蛋白Th细胞表位,为进一步筛选抗血吸虫保护性Th细胞表位提供了理论和实验依据。
- 陈雷杨健美陈虹苑纯秀邵东华冯新港林矫矫
- 关键词：日本血吸虫童虫
