海南省教育厅高等学校科学研究项目(Hjkj200510)
- 作品数：9 被引量：39H指数：4
- 相关作者：李东栋范永梅林艳青柳晓磊汤华更多>>
- 相关机构：海南大学汕头大学更多>>
- 发文基金：海南省教育厅高等学校科学研究项目海南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 椰子果肉组织中总RNA的提取及质量分析被引量：4
- 2007年
- 本研究以椰子(Cocos nucifera L.)果肉组织为材料,应用改良CTAB法对不同成熟度的椰肉组织总RNA进行提取分析。结果表明:改良CTAB法能有效去除椰肉组织中不同种类杂质的干扰,从两种不同成熟度的椰肉组织中获得了高质量的总RNA;应用琼脂糖凝胶电泳检测得到两条清晰的谱带,分别为28S和18S。通过紫外分光光度计检测含量和纯度显示:OD_(260)/OD_(280)值介于1.6～1.9之间,不同成熟度的椰肉组织提取的总RNA的浓度分别为0.070μg/μL和0.053μg/μL。本研究使用的方法适用椰肉组织总RNA的提取,能够获得质量好、产率高、完整性强的总RNA,为进行椰子果实发育相关基因的克隆和分析奠定了一定的研究基础。
- 李东栋范永梅
- 关键词：椰子总RNA
- 中国武汉地区葎草花粉变应原蛋白质组分的双向电泳分析被引量：6
- 2006年
- 应用蛋白质双向电泳的分析技术对武汉地区生长的主要过敏原———葎草(Humulus scandensLour.)花粉的蛋白质组分进行了分析。应用三氯乙酸法提取葎草花粉总蛋白质,通过等电聚焦和第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得了完整的葎草花粉全蛋白质图谱。应用专业分析软件(Im ageM aster 2D)对电泳图谱分析表明:通过等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳,有122个不同的蛋白质组分被检测出来,并进一步确定每个蛋白质相应的分子量、等电点和相对含量。研究中获得的高分辨率的双向电泳图谱是我国葎草花粉变应原蛋白质第一张完整的蛋白质图谱,将为今后葎草花粉中致敏蛋白质的检测、分离、基因克隆和变应原的标准化奠定基础。
- 李东栋何韶衡陶爱林
- 关键词：葎草花粉变应原蛋白质组分双向电泳
- 基因工程重组过敏性蛋白(变应原)研究进展被引量：2
- 2005年
- 目前,全球大约有25%的人口受到I型变态反应疾病的影响,而对此惟一有效的办法是应用特异性变应原进行免疫治疗(脱敏治疗).在应用天然变应原提取物进行传统免疫治疗的过程中,由于天然提取物应用时的计量很难标准化,因而影响了治疗的效果.而通过基因工程的方法所合成的修饰后高纯度特异变应原在保持过敏性蛋白完整的免疫活性的同时可降低其本身的过敏性,这种修饰后的过敏性蛋白的应用将使免疫治疗更趋于标准化,操作更加安全,最终可达到提高免疫治疗效果的目的.目前,重组修饰过敏性蛋白已经成为过敏性疾病研究的新热点.
- 李东栋范永梅
- 关键词：基因工程
- 植物类过敏性蛋白(变应原)研究进展被引量：3
- 2006年
- 据相关资料最新统计表明,全球大约有25%的人口受到I型变态反应疾病的影响。植物中的花粉、汁液和果实可以分别作为吸入性、接触性和食入性过敏原影响过敏体质的人群。目前,惟一有效的办法是应用特异性变应原进行脱敏治疗(脱敏治疗)。而在应用天然变应原提取物进行传统免疫治疗过程中存在一定的危险性。通过基因工程的方法合成的修饰后的高纯度特异变应原在保持过敏性蛋白完整的免疫活性的同时可降低其本身的过敏原性。这种修饰后的过敏性蛋白的应用将使免疫治疗更趋于标准化操作同时避免应用天然过敏性蛋白天然提取物时的危险性,最终可达到提高治疗的效果的目的。目前,重组这种新的过敏性蛋白已经成为过敏性疾病研究的新的热点。
- 李东栋范永梅
- 关键词：植物变应原变态反应疾病
- 不同诱导方式对6-methylsalicylic acid在酿酒酵母(S.cerevisiae)中表达的影响被引量：1
- 2008年
- 聚酮类化合物(Polyketids,PKS)是自然界广泛存在的由真菌或放线菌等微生物产生的,具有一系列复杂结构的微生物次生代谢产物,其中很多种类已经被开发成为具有抗菌、抗癌、抗肿瘤活性的药物.来源于Penicillium patulum中的6-MSAS(6-methylsalicylic acid synthase)是为数不多的几类从基因水平到合成酶体系都已被完全阐明的真菌类PKS种类之一.本研究通过对摇瓶发酵的突变型菌株(S.cerevisiae 334)在表达过程中诱导剂添加的时间和剂量对6-MSA合成的影响进行分析,结果表明:除24 h和48 h之间没有差异之外,在其他不同的诱导时间之间均为极显著差异.其中24 h时加入诱导剂可以获得最高的6-MSA合成产量,为104.51 mg.L-1.在不同的诱导剂剂量的处理中,不同诱导剂剂量对最终产物的表达产量有极显著差异.其中添加w=10%的β-半乳糖诱导获得了最高的表达产量,为121.61 mg.L-1.不同的诱导方式在组合会对6-MSA的表达产生极其显著的差异.
- 李东栋郑育声
- 关键词：酿酒酵母
- 木麻黄花粉变应原蛋白质组分的双向电泳分析被引量：4
- 2006年
- 木麻黄(CasuarinaequisetifoliaLinn)为广东和华南沿海防护林及用材的优良树种。在最近的植物花粉过敏原调查中发现,木麻黄的花粉为中国东南沿海地区主要吸入性过敏原之一,开花季节会引起过敏人群产生哮喘、过敏性鼻炎等变态反应性疾病。目前,大约40%的过敏反应症状是由于接触特定的花粉后产生的,因此,当前有关花粉过敏原的研究都主要集中在花粉中特定致敏因子鉴定和分析上。为了解木麻黄花粉中的主要致敏因子,为今后花粉过敏反应的免疫治疗提供研究基础,本研究通过三氯乙酸(TCA)法提取木麻黄花粉总蛋白质,应用等电聚焦和第二向SDS-PAGE分析法获得完整的木麻黄花粉总蛋白图谱。结果表明:木麻黄花粉变应原中有85个不同的蛋白质组分,通过ImageMaster2D分析软件对获得的蛋白质图谱进行详细的全量蛋白质组分的量化分析,进一步确定木麻黄花粉蛋白质的等电点分布主要集中在4.5￣5.5之间,分子量分布集中在10￣30kD之间,各种蛋白质的相对含量差别很大,其中所有蛋白质种类等电点和各自所对应的分子量之间存在显著的相关性。相对国内外相关报道,本研究首次应用双向电泳技术获得木麻黄花粉高分辨率的蛋白质图谱,并通过相应软件获得详细的量化信息。本研究结果将为今后进一步确定木麻黄花粉变应原中的致敏蛋白并应用与相关临床研究奠定基础。
- 李东栋何韶衡
- 海南椰子栽培品种的SSR标记分析被引量：6
- 2008年
- 应用简单重复序列（SSR）标记方法，对海南的11个椰子（Cocos nucifera L．）栽培品种进行了遗传多样性分析。选取30对引物用于PCR扩增，有23对引物扩增出有效多态性片段136条，平均多态性百分率为95．77％，每对引物扩增出的带数2-12条不等，平均为6．17条，每个SSR位点的多态信息量（PIC）在0．173～0．896之间，平均为0．561。11份材料之间遗传相似系数变化范围0．061—0．861，说明海南椰子栽培品种之间存在丰富的遗传多样性。UPGMA聚类分析结果表明，11个椰子栽培品种分为4个类群和两个亚群。SSR标记反映出的品种问亲缘关系与形态学研究的分类结果并不完全吻合。
- 柳晓磊汤华李东栋王茜林艳青周蓉
- 关键词：椰子SSR
- 椰子SSR反应体系的建立和优化被引量：9
- 2007年
- 为摸索适宜椰子的SSR反应体系,分析了PCR反应体系中的Mg2＋浓度、引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度对扩增结果的影响,建立了适合椰子的SSR反应体系。研究结果表明：在20μL反应体系中,Mg^2＋、引物和dNTP的最适浓度分别为2.5 mmol/L、0.3μmol/L、0.2 mmol/L;TaqDNA聚合酶的最佳使用量为1 U,模板DNA应加入50 ng,引物最佳退火温度比Tm值较小者低2-3℃。在参数优化的基础上,应用标记分析该反应体系对24个海南不同地区高种椰子样品进行SSR分析,不同样品间DNA谱带多态性丰富,本研究建立的分析体系将为今后椰子资源的SSR分析奠定良好的研究基础。
- 柳晓磊汤华李东栋王茜周蓉林艳青
- 关键词：SSR反应体系
- 椰子不同组织基因组DNA的提取及质量分析被引量：5
- 2007年
- 以椰子植物的叶片和花序组织为材料,探索了应用CTAB微量法分离高质量椰子基因组DNA的方法.结果表明,采用CTAB的缓冲液裂解材料,以及在提取过程中用φ=4%的β-巯基乙醇的改良CTAB法,可有效地控制椰子这种高纤维、易褐变材料和多糖在DNA提取过程中的污染和影响.应用本研究建立的分离方法,可从椰子的叶片和花序2种不同材料中分离得到高质量的基因组DNA,产量分别达0.75 g.L-1和0.65 g.L-1.通过Hind III酶切实验证明,分离出的基因组DNA适用于限制性酶切反应的分析和操作;该方法的建立可有效地应用于椰子和其他棕榈科植物基于DNA的分子生物学研究.
- 郑育声李东栋王哲魁
- 关键词：基因组DNA椰子
