江苏省自然科学基金(BK2010317)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 相关作者：宋成义高波吴晗周辉云毛九德更多>>
- 相关机构：扬州大学密苏里大学哥伦比亚大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家科技重大专项江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
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- 猪POU1F1基因启动子区多态分析及其与生长性状的关联被引量：6
- 2011年
- 【目的】获得猪POU1F1基因启动子区的多态信息,揭示其在不同品种中的分布特点,阐明其与生长性状的关联性。【方法】采用PCR克隆、DNA测序和PCR-RFLP技术进行POU1F1基因启动子区多态分析,利用一般线形模型分析其与生长性状的关联性。【结果】在POU1F1基因1.5 kb的启动子区域内发现5个多态位点;其中,5 bp短片段插入或缺失突变的A等位基因频率在引入品种猪中最高,在培育品种中中等,在中国地方品种最低。一般线形模型分析表明,该多态位点与猪的生长性状存在显著相关。多重比较分析发现,AA基因型个体的体高、体长、胸围和体重显著高于AB和BB基因型个体(P<0.05),而AB和BB基因型个体的体高、胸围和体重差异不显著(P>0.05),但AB基因型个体的体长显著高于BB基因型个体(P<0.05)。【结论】5 bp短片段插入或缺失突变的A等位基因是生长性状的优势等位基因,是生长性状可能的分子标记。
- 宋成义赵芹高波王宵燕吴晗周辉云经荣斌毛九德
- 关键词：POU1F1基因多态生长性状
- 猪CatSperB和CatSperG基因的克隆、表达及生物信息学被引量：2
- 2012年
- 【目的】揭示猪CatSperB和CatSperG基因的存在、蛋白的结构特征、进化关系及时空表达特性。【方法】利用电子和分子克隆技术鉴定猪CatSperB和CatSperG基因全长cDNA,并利用定性RT-PCR和荧光定量RT-PCR进行CatSperB和CatSperG基因的时空表达研究。【结果】①分别获得了3 508 bp CatSperB和3 715 bp CatSperG电子转录子,分别包含3 330和3 483 bp开放阅读框,并经TA克隆测序验证,其CDS序列与人、牛、马和狗等的CatSperB和CatSperG基因的序列相似性在80%以上;②CatSperB分子质量为125.79 kD,为稳定蛋白;CatSperG分子质量为133.40 kD,为不稳定蛋白;③CatSperB和CatSperG都包含7个通道蛋白保守的跨膜结构域,CatSperG蛋白C端含一个超螺旋结构,而CatSperB蛋白无明显的超螺旋结构信号;猪CatSperB和CatSperG与牛、狗和马的CatSperB和CatSperG蛋白同源关系较近,与人和小鼠的同源关系较远;④RT-PCR分析表明,CatSperB和CatSperG基因主要在睾丸中表达,但CatSperB在其它组织也有表达信号;⑤CatSperB和CatSperG基因mRNA表达水平在猪性发育的重要阶段,精子发生(60日龄)、初情期(90日龄)和性成熟(150日龄)前后都有显著提高(P<0.05)。【结论】获得了猪CatSperB和CatSperG基因的cDNA克隆及其一系列生物信息学参数,揭示了CatSperB和CatSperG蛋白含7个保守的跨膜结构域及不同物种间的进化关系,证实CatSperB和CatSperG基因主要在睾丸表达,且其mRNA表达变化与公猪的性发育相一致。
- 宋成义周家庆冯晓军谢雨琇李庆平吴晗高波王霄燕
- 关键词：克隆
- 精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的表达特性被引量：4
- 2010年
- 【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利用半定量RT-PCR分析其在初生至150d梅山公猪睾丸中的发育性表达特性。【结果】5个基因在梅山公母猪生殖道组织中呈现不同的表达特性。其中SPAG1在睾丸中表达丰度最高,在精囊腺、前列腺、附睾体、子宫角和输卵管呈现中等丰度表达,而在附睾尾、子宫颈和卵巢的表达信号较弱。SPAG5在睾丸中表达丰度最高,在前列腺、附睾体和子宫颈中表达信号较弱。而SPAG6在睾丸中高丰度表达,在输卵管中呈现中等丰度表达,在子宫角的表达信号很弱。SPAG11C在附睾体和睾丸中高水平表达,而SPAG11E则在附睾体和附睾尾中低水平表达。在成熟精子中只有SPAG11E有mRNA表达。SPAG1、SPAG5、SPAG6和SPAG11C基因在公猪睾丸中发育性表达分析表明,总体上所检测的4个精子抗原基因的表达水平都随着日龄增加而提高,但存在一些差异。其中SPAG1和SPAG11C呈现相似的表达规律,在初生和30日龄时表达相对较低,但在60、90、150日龄都有显著提高(P<0.05)。而SPAG5在初生和30日龄时表达也相对较低,在60和90日龄时均有显著提高(P<0.05),但150日龄时略有下降,但差异不显著。SPAG6在初生和30日龄时表达水平很低,至60日龄有显著提高(P<0.05),90日龄时维持这一水平,而到150日龄时则有显著下降(P<0.05)。【结论】SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E在梅山公母猪生殖道组织广泛表达,在睾丸组织中其mRNA表达水平变化与性发育相一致,SPAG11E在精子中存在低丰度mRNA表达。
- 宋成义高波吴晗王霄燕王升智周辉云陈国宏毛九德
- 关键词：精子抗原生殖道精子
- 猪卵泡抑素基因接拼形式克隆、表达及分析
- 2013年
- 猪卵泡抑素基因(Follistatin,FS)具有调控动物生殖活动和肌肉生长的生物功能,但对猪的研究报道很少。本研究克隆了猪卵泡抑素基因两种接拼形式、比较分析其蛋白结构特征、进化关系和组织表达特性。研究结果表明,通过两对引物成功克隆了猪卵泡抑素基因的1045bp(FS-L)和964bp(FS-S)的两种接拼形式;与Genbank中的序列比对表明FS-L和FS-S的CDS序列与人、牛、家鼠、沟鼠、斑马鱼的卵泡抑素基因序列相似性在80%以上。对两种蛋白质结构域的比较发现,FS-S蛋白相比FS-L蛋白而言缺失了一个FS结构域。同源性分析表明,猪与牛的亲缘关系较近,与人、小鼠、沟鼠和斑马鱼的关系相对较远。组织表达分析表明,两种拼接形式在梅山猪不同组织中的表达存在差异,FS-L基因在梅山猪肌肉及生殖系统等组织中均有表达,而FS-S基因则主要在生殖系统中表达。表明FS-L在肌肉生长中发挥作用,而FS-S主要调控动物的生殖功能。
- 谢雨琇宋成义何庆玲周家庆冯晓军李庆平高波王霄燕
- 关键词：卵泡抑素克隆生物信息学
- 梅山猪UBE2b基因的克隆及组织表达特征的研究
- 2013年
- UBE2b基因编码的泛素结合酶参与的泛素-蛋白酶通路(UPP)在哺乳动物精子发生中起着重要作用。本研究根据相关ESTs拼接的序列采用PCR扩增鉴定的方法获得梅山猪UBE2b基因cDNA全序列,对其序列进行生物信息学分析,利用半定量RT-PCR的方法研究150日龄梅山公猪UBE2b基因的组织表达特征和不同日龄(2、30、60、90、150日龄)公猪睾丸的表达规律。结果表明:梅山猪UBE2b基因cDNA全长1 329 bp,编码153个氨基酸,具有UBCc家族的保守结构域。该基因编码氨基酸序列在不同物种间具有较高的保守性,根据编码氨基酸序列构建的分子进化树显示猪与牛的亲缘关系最近,与斑马鱼的关系最远。UBE2b基因在梅山公猪各组织中广泛表达,其中睾丸为高丰度表达。该基因在梅山猪睾丸中的表达随日龄增加呈显著上升趋势,与睾丸发育显著相关(r=0.82,P<0.01),推测UBE2b可能在梅山猪精子发育和性发育中起重要作用。
- 王宵燕何庆玲陈庭锋宋成义高波李碧春
- 关键词：梅山猪
- SPMI基因在公母猪生殖道的时空表达特性研究
- 2011年
- 为揭示猪精子运动抑制因子(Seminal plasma motility inhibitor,SPMI)基因在公母猪生殖道的时空表达特性,本研究运用定性RT-PCR分析了SPMI在生殖道的组织表达谱,利用半定量RT-PCR技术分析了SPMI在公猪精囊腺和尿道球腺组织的发育性表达。定性RT-PCR分析结果发现,SPMI基因在精囊腺中的表达丰度最高,在尿道球腺和子宫角中呈中等丰度表达,在前列腺、子宫颈和卵巢中的表达较弱,在其它生殖道组织未检测到mR-NA表达。半定量RT-PCR分析结果显示,SPMI基因在公猪精囊腺和尿道球腺中的发育性表达规律相似,都在初生时即启动,表达水平随着日龄的增加不断提高,直至性成熟(150日龄)。其中SPMI基因在精囊腺中的表达在60、90和150日龄均有显著提高(P<0.05);而在尿道球腺中,SPMI基因的表达在30、90和150日龄均有显著提高(P<0.05),而60日龄的表达较30日龄时有所提高,但差异不显著(P>0.05)。这些结果提示SPMI基因在公母猪生殖道呈广泛表达,其发育性表达呈日龄依赖性特点,表达水平在初情期至性成熟期有显著提高。
- 宋成义高波王宵燕吴晗周辉云李碧春陈国宏毛九德
- 关键词：生殖道RT-PCR
- 精浆浓度对17℃保存下猪精子活率和活力的影响被引量：2
- 2011年
- 为了解精浆浓度对精子常温保存的影响,对含不同浓度精浆的商业化CXM稀释剂和自制稀释剂的精液于17℃下的保存效果进行比较。结果表明:当稀释剂为CXM时,25%精浆获得了最好的保存效果,含0、5%精浆也有较好的保存效果;而使用自制稀释剂时,含50%、75%精浆获得了较好的保存效果,其次是含25%精浆。说明在常温保存中一定浓度的精浆有利于维持精子的活力和活率,但这与稀释剂组成有关。在实际生产应用中,在稀释剂中约添加25%精浆对维持精子在常温保存中的活力和活率可能有较好效果。
- 宋成义周辉云查丽莉黄继荣吴晗
- 关键词：精浆精子活率
