重庆市自然科学基金(2008BB5209)
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 相关作者：文明李少林谭书德欧阳羽李梦雅更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学重庆市第九人民医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNAi技术应用于恶性肿瘤的分子影像学研究被引量：1
- 2010年
- RNA干扰(RNAi)作为一种高效的序列特异性基因剔除技术,在恶性肿瘤基因治疗领域发展极为迅速,具有广阔的应用前景。分子影像学是一种直接研究活体内对疾病的产生、发展具有重要作用的基因或分子传导途径的成像方法。利用RNAi理论制备用于分子影像学的成像探针,可望同时对恶性肿瘤做出早期特异性诊断及靶向基因治疗。
- 李梦雅文明
- 关键词：RNA干扰恶性肿瘤分子影像学
- 不同质量浓度磁性c-erbB-2反义探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨不同质量浓度磁性c-erbB-2反义探针转染乳腺癌SK-Br-3细胞株后,对其形态及表达的影响。方法将反义探针含铁质量浓度分别定为5、10、25、50、100 mg/L,转染乳腺癌SK-Br-3细胞24 h。采用普鲁士蓝染色并在光学显微镜及透射电镜下直接观察细胞铁颗粒,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,台盼蓝排除实验、CCK-8试剂盒观察细胞活性,Western blot法检测蛋白质表达,磁共振成像研究信号强度的变化。结果 SK-Br-3细胞对反义探针在一定质量浓度范围内(5、10、25 mg/L)呈依赖式摄取。当探针质量浓度为25 mg/L时,细胞内铁含量为(18.38±0.28)pg,细胞活力、存活率及细胞内c-erbB-2蛋白表达量明显降低(P均<0.05),磁共振扫描图像显示该组细胞T2值出现明显降低(P<0.05)。50及100 mg/L组各项结果与25 mg/L组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论当磁性c-erbB-2反义探针质量浓度为25 mg/L时,可有效转染并特异性抑制SK-Br-3细胞株的表达,并被磁共振成像所检测。
- 刘海燕温志鹏文明贺海容谭书德李少林
- 关键词：反义寡脱氧核苷酸超顺磁性氧化铁分子探针
- 超顺磁性氧化铁标记反义寡脱氧核苷酸探针在转染细胞磁共振成像中的应用被引量：6
- 2008年
- 目的制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性。方法采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检测联接率和生物活性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测稳定性。将ASODN探针转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株,普鲁士蓝染色后于光学显微镜下观察细胞内铁分布,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,MR扫描观察细胞信号强度变化情况。结果制备的ASODN探针近似球形,粒径在25～40nm间,分散均匀,联接率为100%,仍保持原有生物活性,稳定性好。转染ASODN探针后的SK-Br3细胞胞浆内可见多少不等的蓝色铁颗粒,细胞内铁含量明显高于未转染ASODN探针的其他各组细胞(P均<0.01);MR扫描显示其信号强度最弱,信噪比值明显低于其他各组细胞(P均<0.05)。结论成功制备SPIO标记ASODN探针,该探针能有效进入SK-Br3细胞内,明显降低MR扫描下的转染细胞信号强度。
- 文明李必波欧阳羽蒋明东罗弋李少林
- 关键词：磁共振成像超顺磁氧化铁反义寡脱氧核苷酸靶向对比剂
- 磁性反义探针在不同转染时间点对SK-Br3肿瘤细胞株c-erbB-2蛋白表达及生长的影响
- 2013年
- 目的探讨磁性c-erbB-2反义探针转染SK-Br3细胞株后,在不同时间点对其形态及表达的影响。方法选择磁性c-erbB-2反义探针的含铁终浓度为25μg/mL,分别孵育SK-Br3细胞6、12、24、36及48h。采用普鲁士蓝染色并在光学显微镜及透射电镜下直接观察细胞铁颗粒,用原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,锥虫蓝排除实验、CCK8实验观察细胞活性,Western blot检测蛋白质表达,MR成像研究信号强度的变化。结果 SK-Br3细胞在一定范围内(6、12、24h)按时间依赖性摄取磁性c-erbB-2反义探针,当孵育时间为24h时,细胞内铁含量为(18.38±0.28)pg,细胞活力、存活率及细胞内c-erbB-2蛋白表达量明显降低(均P<0.05),MR成像显示细胞T2信号强度明显降低(P<0.05)。36h及48h组各项观察结果与24h组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论磁性c-erbB-2反义探针转染SK-Br3肿瘤细胞24h时,MR成像可以达到最佳显示且明显抑制c-erbB-2癌基因表达。
- 刘海燕温志鹏文明贺海容谭书德李少林
- 关键词：反义寡脱氧核苷酸超顺磁性氧化铁分子探针
- 超顺磁性氧化铁标记的反义探针在动物体内的药动学及主要脏器分布研究被引量：4
- 2011年
- 目的探讨超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针在新西兰大白兔及BALB/c小鼠体内的药动学及主要脏器分布。方法 18只新西兰大白兔随机分为高、中、低剂量3组,选择注射前30 min、注射后1、3、5、10、20、40、60、120、180、360、720 min等时间点,从对侧耳缘静脉采血,测定铁含量以了解探针的药动学;BALB/c小鼠60只随机分为MR扫描组及取脏器组,在注射反义探针后10、30、60、180、360 min这5个时间点,同步进行MR扫描及取肝、脾、心、肾、肌肉标本,测定观察脏器的信噪比及铁含量,观察反义探针在BALB/c小鼠的主要脏器分布。结果高、中、低剂量的反义探针注射后的药动学符合二室模型,半衰期长;反义探针在脾脏富集量最高,以下依次为肝脏、肌肉、心脏及肾脏。结论了解反义探针在活体内的药动学及主要脏器分布,可以为进一步的活体MR成像时间及剂量选择等提供依据。
- 谭书德欧阳羽文明李梦雅
- 关键词：反义寡脱氧核苷酸超顺磁性氧化铁药动学
- 磁性c-erbB2反义探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨磁性c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响,阐明该探针是否同时具有诊断与治疗功能。方法:磁性c-erbB2反义探针转染高表达c-erbB2的SK-Br-3肿瘤细胞作为实验组,磁性c-erbB2反义探针转染Fuda肿瘤细胞株、SPIO及ASODN转染SK-Br-3肿瘤细胞、未转染的SK-Br-3肿瘤细胞设置为4个对照组,普鲁士蓝染色光镜观察细胞内铁的分布,透射电镜观察其超微结构,并检测细胞cerbB2蛋白表达变化及铁含量,行体外MR成像。结果:光镜显示SK-Br-3肿瘤细胞胞浆内散在分布铁颗粒,透射电镜观察到SK-Br-3肿瘤细胞胞浆内铁颗粒、团状吞饮体,细胞出现胞膜空泡化、细胞固缩、核固缩及凋亡小体,而对照组细胞无上述改变;与对照组比较,实验组SK-Br3细胞蛋白的表达抑制率明显升高,细胞铁含量增加(P<0.01),MR扫描显示信号减低(P<0.05)。结论:磁性c-erbB2反义探针能够顺利进入SK-Br-3肿瘤细胞,不仅能导致SK-Br-3细胞的凋亡,还能够被体外MR成像所检测,可能成为一种具有治疗与诊断意义的双功能探针。
- 贺海容谭书德文明温志鹏刘海燕李少林
- 关键词：反义寡脱氧核苷酸超顺磁性氧化铁分子探针
- 探讨不同浓度SPIO对人成纤维细胞标记率和细胞活力影响及其MRI的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨不同浓度超顺磁性氧化铁纳米粒子(Super-paramagnetic iron oxide,SPIO)体外标记人成纤维细胞(Human fibroblast cells,Hfbs)的磁性标记率、对细胞生长活力的影响,以及体外磁共振成像(Magnetic resonance imaging,MRI)成像的特征。方法:将单纯SPIO(铁浓度为200μg/ml)、不同浓度的SPIO-多聚赖氨酸复合物分别与培养基混合(铁的终浓度分别为150、100、50、25μg/ml,PLL终浓度为7.5μg/ml),加入Hfbs共同培养12、24、48、72h后收集细胞。采用台盼蓝排除试验检测细胞活性和普鲁士蓝染色法检测细胞铁分布。运用光学显微镜、透射电镜观察铁颗粒在细胞内的位置、计算其标记率;MR扫描观察细胞信号强度变化情况。结果:SPIO-多聚赖氨酸复合物组细胞标记率显著高于单纯SPIO标记组(P<0.05),台盼蓝排除试验显示,100μgFe/ml及其以下浓度组细胞活力与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。普鲁士蓝染色显示每个标记细胞胞质内可见多少不等的蓝染铁颗粒,电镜显示铁颗粒集中于内涵体和溶酶体中;含量在25～50μgFe/ml的培养液是SPIO标记干细胞的安全浓度,在此浓度阈值标记后孵育18～24h即可有效标记细胞95%～100%;MR扫描显示标记细胞信号强度明显降低。结论:自制合成的SPIO-多聚赖氨酸复合物可以简便、安全的标记人成纤维细胞。并且在适当浓度25μgFe/ml标记细胞不仅标记效率高,而且对细胞活力无明显影响,SPIO标记细胞明显降低MR扫描下的细胞信号强度。
- 郑娟王顺和文明黄铀新李必波李晗宇
- 关键词：人成纤维细胞超顺磁性氧化铁
- 葡聚糖修饰的纳米级超顺磁性氧化铁稳定性检测被引量：3
- 2010年
- 目的:研究共沉淀法制备葡聚糖修饰的纳米级超顺磁性氧化铁的稳定性。方法:参照一般注射试剂的基本要求,对采用共沉淀法制备葡聚糖修饰的纳米级超顺磁性氧化铁液体,分别进行强化实验和长期实验,观察或测定样品的性状、pH值、铁浓度、粒径、饱和磁化强度及T2磁豫率等参数。结果:与实验前所检测的数据比较,实验后各项数据无统计学差异。结论:葡聚糖修饰的纳米级超顺磁性氧化铁稳定性好,为进一步将其作为磁共振成像对比剂及靶向基因载体研究奠定了基础。
- 李梦雅文明李少林
- 关键词：超顺磁性氧化铁稳定性
- 高精度原子力显微镜显示磁性反义探针与SK-Br-3肿瘤细胞mRNA核苷酸连接
- 2011年
- 为了将高精度原子力显微镜(AFM)用于显示超顺磁性氧化铁标记的c-erbB2癌基因反义寡脱氧核苷酸探针(磁性反义探针)与SK-Br-3肿瘤细胞mRNA核苷酸的连接,我们在磁性反义探针转染SK-Br-3肿瘤细胞基础上,用AFM对转染后的肿瘤细胞进行观察,并同时对转染后的肿瘤细胞进行蛋白表达检测及MRI成像,以进一步证实AFM的观察结果。从AFM显示的磁性反义探针转染SK-Br-3肿瘤细胞后单个细胞的全貌图及局部放大图发现,探针中反义寡脱氧核苷酸中的脱氧胞嘧啶核苷酸闭环与肿瘤细胞mRNA嘌呤核苷酸环相连接;此外,磁性反义探针能特异性抑制SK-Br3细胞c-erbB2的蛋白表达,MRI显示磁性反义探针转染SK-Br-3肿瘤细胞的信号强度最低(P<0.05)。实验表明,AFM可以清楚显示磁性反义探针与SK-Br-3肿瘤细胞核mRNA核苷酸的连接。
- 谭书德欧阳羽欧阳羽李信友文明
- 关键词：原子力显微镜反义寡脱氧核苷酸超顺磁性氧化铁
