国家自然科学基金(81270725)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：南京医科大学第二附属医院南京市妇幼保健院江苏省人民医院更多>>
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- microRNA-296-5p靶基因的预测及在肺发育中的应用
- 2016年
- 目的对rno-micro RNA-296-5p(mi R-296)靶基因预测并进行相关生物信息学分析,为深入研究mi R-296与胎肺发育相关的生物学功能提供理论依据。方法应用Pub Med、Google等信息搜索工具检索mi R-296的现有研究,并通过mi RBase获取其序列特征以及进化的保守性;利用Target Scan数据库进行mi R-296的靶基因预测;并利用DAVID Bioinformatics Resources 6.8数据库对靶基因进行功能富集分析;利用KEGG数据库对靶基因进行信号转导通路分析。结果已有的文献表明mi R-296在许多生物学过程中发挥重要作用,序列在多物种间高度保守。mi R-296调控的靶基因参与分子功能、细胞组分和生物学过程等方面,靶基因集合的信号转导通路显著富集于MAPK信号通路、Wnt信号通路、TGF-β信号通路等(均P<0.05)。结论通过对mi R-296靶基因的生物信息学分析,为研究mi R-296在肺发育中的作用提供了功能与机制的线索。
- 张颖慧杨洋张存孙祎璠朱雯马程玲周晓玉
- 关键词：靶基因生物信息学肺发育
- microRNA-379在胚胎心脏发育及P19细胞分化过程中的表达规律被引量：2
- 2014年
- 目的 观察microRNA （miR）-379在正常小鼠胚胎心脏发育过程中表达水平的变化,结合其在P19细胞向心肌细胞分化过程中的表达情况,探讨其在心脏发育中可能存在的作用.方法 取孕第8.5、11.5、14.5、18.5天小鼠胚胎的心脏组织,采用实时荧光定量PCR （RT-PCR）技术检测基因miR-379的表达变化.应用10 mL/L二甲基亚砜诱导P19细胞向心肌细胞方向分化,细菌培养皿中悬浮诱导至第4天,形成细胞聚集体后转移至6孑板培养,采用RT-PCR技术分别检测诱导第0、4、6、10天P19细胞中miR-379基因的表达水平.结果 miR-379在小鼠胚胎心脏发育过程中表达量逐渐减低,各时间点之间比较差异有统计学意义（F=21.13,P＜0.05）.另一方面,在P19细胞诱导分化过程中心肌标志物肌钙蛋白T呈递增趋势,证明P19细胞被成功诱导为心肌样细胞.在P19细胞向心肌细胞分化的第0天表达量较低,第4天表达量最高,随后表达量又逐渐减低.结论 miR-379参与心脏发育过程,且可能与先天性心脏病的发生发展有关,但是具体机制还需要进一步的研究。
- 王丽华宋桂仙朱金改余章斌刘明陈斌周晓玉
- 关键词：心脏发育心肌组织P19细胞
- 沉默表达miR-26a A549细胞株的构建
- 2013年
- 目的构建稳定沉默表达miR-26a的人肺腺癌细胞株（A549）。方法体外合成成熟的人miR．26a-5p（Hsa—miR-26a-5p）特异性互补序列，在片段两侧添加AgeI、EcoRI酶切位点，与经双酶切后的GV280载体连接，构建GV280-miR一26a—down慢病毒载体。应用DNA测序对此重组载体进行鉴定。将GV280-miR-26a．down慢病毒载体与病毒包装质粒pGC—LV载体、pHelper1．0载体和pHelper2．0载体共转染293T细胞，包装产生慢病毒。依据293T细胞绿色荧光蛋白的表达量确定病毒滴度。将沉默表达miR-26a的慢病毒转染A549细胞，嘌呤霉素筛选后获得稳定细胞株。应用Westernblot法检测miR-26a一个靶基因SMADl的表达情况，验证此细胞株的功能。结果经DNA测序鉴定，成功构建了GV280-miR-26a—down慢病毒载体。在293T细胞中将该载体包装成慢病毒，测定病毒滴度为2×10^12TU／L。重组慢病毒转染A549细胞的效率高达95％，用2．5mg／L嘌呤霉素筛选2周后几乎100％的A549细胞表达GFP。Westernblot结果显示miR-26a的靶基因SMADl的表达量在miR-26a沉默组比空载病毒组和空白对照组明显上调。结论成功构建了GV280．miR．26a—down慢病毒载体，并构建稳定沉默表达miR-26a的A549细胞株，为后续研究奠定了基础。
- 梁宏露张盼张晓群杨洋邱洁阚清周晓光周晓玉
- 关键词：A549细胞株慢病毒载体
- 无创经皮监测在氧疗新生儿中的应用被引量：5
- 2016年
- 目的 :评价氧疗患儿经皮氧分压(TcPO_2)及二氧化碳分压(TcPCO_2)与动脉血氧分压(PaO_2)及二氧化碳分压(PaCO_2)的一致性及其影响因素,为无创监测在氧疗新生儿中的应用提供初步的指导依据。方法:收集氧疗新生儿的动脉血气值,并记录采集前后5 min内TcPO_2及TcPCO_2的平均值、体重、胎龄、脉搏(P)、吸入氧浓度、动脉血氧饱和度(SaO_2)、pH等,进行Pearson相关分析并运用受试者工作曲线(ROC)判断诊断价值。结果 :体重、吸入氧浓度等对TcPCO_2与PaCO_2在氧疗患儿中的相关性及一致性影响较小,循环障碍组TcPCO_2明显高于PaCO_2;TcPO_2与PaO_2的相关性稍差,在氧合指数较低及较高组两者无统计学相关,两者的差值随着出生体重的增大及动脉氧分压的增大而增加。结论:TcPCO_2与PaCO_2具有较好的相关性及一致性,尤其在极低出生体重儿,而TcPO_2与PaO_2相关性及一致性稍差,对于氧疗患儿,高氧分压下TcPO_2与PaO_2缺乏很好的相关性,在肺部氧合较差却无呼吸障碍表现时TcPO_2比PaO_2更能反映患儿的动脉氧合,对于指导氧疗新生儿的用氧更有价值。
- 吴立志刘云阚清杨洋周晓玉
- 关键词：血气分析新生儿氧疗一致性
- 胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞生长状况及ABCA3表达变化的初步研究被引量：1
- 2012年
- 目的:观察原代培养胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cell,AECⅡ)的生长状况及AECⅡ特异性蛋白ATP结合盒转运蛋白A3(ATP binding cassette transporter A3,ABCA3)的表达变化,为有关新生儿肺发育及肺部疾病的研究奠定一定基础。方法:采用胰酶联合胶原酶消化肺组织,差速离心及差速贴壁法纯化细胞;电子显微镜鉴定AECⅡ细胞;倒置相差显微镜观察不同时间点细胞生长状态;MTT法绘制细胞生长曲线;免疫荧光技术观察ABCA3动态表达变化。结果:电镜下观察到AECⅡ特征性板层小体,大小及数量不等,胞膜外缘分布有刺状微绒毛;MTT法测得铺板后第24、36、48、72、96、120 h的吸光度值分别为0.177±0.009,0.193±0.011,0.212±0.019,0.253±0.019,0.243±0.012,0.192±0.011。光学显微镜下细胞形态逐渐拉长,变扁平,细胞内颗粒逐渐减少。免疫荧光示ABCA3表达逐渐下降。结论:原代培养的胎鼠AECⅡ在培养早期生长状况最佳,ABCA3表达最丰富,故在早期(即培养72 h以内)进行肺发育疾病相关机制的研究较为理想。
- 张盼张晓群邱洁杨洋周晓玉周晓光
- 关键词：胎鼠原代培养细胞增殖
- Hsa—miR-26a靶基因的预测及其在肺发育中的应用被引量：4
- 2013年
- 目的对hsa—miR-26a进行靶基因预测及相关生物信息学分析，为hsa—miR-26a靶基因的实验验证提供数据支持，并为深入研究hsa—miR-26a在肺发育中的生物学功能及调控机制奠定基础和提供理论依据。方法应用PubMed、Google等信息搜索工具查找miR-26a的所有研究；应用miRBase获取hsa—miR-26a的序列，并分析其序列保守性；利用miRNA靶标基因数据库miRGen2．0进行hsa—miR-26a的靶基因预测，选取PicTar和TargetScanS的交集并合并DIANALAB—TarBase6．0数据库的已验证靶标对靶基因进行功能富集分析（GO-analysis）及信号转导通路分析。结果已有研究提示hsa—miR-26a在肿瘤、细胞分化、器官发育、免疫系统等生物学过程具有重要作用。hsa—miR-26a在多物种间高度保守。miR-26a调控的靶基因生物学功能主要包括转录调控、蛋白质修饰、细胞增殖、凋亡、分化等基本生物学过程和蛋白激酶活性等分子功能上，靶基因存在于细胞各个组分中，包括细胞膜、细胞质、细胞核中；信号转导通路显著富集于Wnt信号通路，丝裂原活化蛋白激酶信号通路，转化生长因子一B信号通路，p53信号通路，细胞周期、黏附功能等信号通路以及前列腺癌、小细胞肺癌、直肠癌、肾癌、神经胶质瘤5个疾病通路中（P均〈0．05）。结论通过对hsa-miR-26a靶基因的生物信息学分析，为研究hsa-miR-26a在肺发育中的作用提供了功能与机制的线索。
- 张晓群张盼杨洋邱洁周晓玉周晓光
- 关键词：靶基因生物信息学肺发育
