国家自然科学基金(30200300)
- 作品数：12 被引量：65H指数：5
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- 应用连接酶链反应检测沙眼衣原体DNA被引量：1
- 2003年
- 目的 建立检测沙眼衣原体感染的具有高度敏感性和特异性的缺口 连接酶链反应 酶联免疫吸附测定法。方法 根据CT主要外膜蛋白稳定区设计 2对互补探针并分别对其两端标记生物素和地高辛 ,对 6种CT标准株、鹦鹉热衣原体标准株和其他细菌进行Gap LCR反应并以ELISA和EB染色电泳检测扩增产物以比较两者的检测限度。 结果 Gap LCR可检出 6种CT标准株并不与其他细菌发生交叉反应 ,ELISA可检出 1 0fgDNA模板的扩增产物 ,较EB电泳法敏感 1 0倍。结论 Gap LCR ELISA是一高度敏感特异的检测CT感染的核酸扩增技术 。
- 韦红刘官信
- 关键词：沙眼衣原体核酸扩增技术
- 双歧杆菌通过Zonulin影响坏死性小肠结肠炎新生大鼠模型肠道通透性被引量：12
- 2016年
- 目的探讨双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)新生大鼠模型肠道通透性及血清Zonulin表达的影响,分析双歧杆菌保护NEC可能的机制。方法将60只新生1 d的SD大鼠按随机数字表法分为3组(n=20):对照组、坏死性小肠结肠炎新生大鼠组(NEC组)及双歧杆菌干预坏死性小肠结肠炎新生大鼠组(NEC+BIF组)。3组于第1、2、3天固定时间点测量体质量;第4天处死大鼠,HE染色观察回盲部肠组织病理学变化并行病理学评分,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITCDextran)示踪法检测肠黏膜通透性,ELISA检测血清Zonulin的水平,Western blot及免疫组化检测肠组织紧密连接蛋白的表达及分布,将3组大鼠血清Zonulin水平与肠道通透性及紧密连接蛋白表达量行相关性分析。结果与NEC组相比,双歧杆菌干预后大鼠肠上皮损伤明显改善;而与对照组相比,NEC组肠道通透性显著增高(P<0.05),血清Zonulin表达明显增加(P<0.05),肠上皮紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1的表达明显减少(P<0.05),且分布不连续;与NEC组相比,NEC+BIF组肠道通透性降低(P<0.05),血清Zonulin表达降低(P<0.05),肠上皮紧密连接蛋白的表达增加(P<0.05)。相关性分析显示,3组大鼠血清Zonulin水平与肠道通透性呈正相关(r=0.923,P<0.01),而血清Zonulin水平与肠组织紧密连接Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达量均呈负相关(r=-0.779,P<0.01;r=-0.920,P<0.01;r=-0.619,P<0.01)。结论双歧杆菌可明显改善NEC大鼠的肠道通透性,其机制可能与抑制Zonulin的表达有关。
- 向玲杜维霞刘依枫彭玲珑韦红
- 关键词：坏死性小肠结肠炎双歧杆菌ZONULIN肠道通透性
- Zonulin介导的肠道微生物对肠上皮细胞屏障功能的调节被引量：10
- 2014年
- 利用Caco-2肠上皮细胞单层屏障模型研究四种肠道微生物对肠道屏障的影响。实验设置空白对照组(control)、大肠埃希菌组(Eco)、肺炎克雷伯菌组(Kpn)、粪肠球菌组(Efa)、乳酸杆菌组(Lac)。加入各组细菌共培养,结果表明大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌均引起单层细胞跨膜电阻值(transepithelial electrical resistance,TEER)明显下降(P<0.001);Eco组、Kpn组作用后细胞释放zonulin蛋白增加(P<0.01),Efa组作用于Caco-2细胞单层后,zonulin释放量较对照组升高,但差异无统计学意义(P>0.05);Eco组、Kpn组三种紧密连接蛋白occludin、claudin-1、ZO-1表达明显减少,Efa组、Lac组occludin、claudin-1表达与空白对照组相比无明显变化,胞浆蛋白ZO-1表达降低;细菌与细胞共培养6 h后免疫荧光观察紧密连接蛋白分布情况,Eco组、Kpn组可见荧光强度减弱,荧光不连续,甚至有缺口及裂隙,Efa组、Lac组荧光强度稍减弱,但仍沿胞膜分布,条带较清晰,与空白对照组差异不明显。肠道四种微生物中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌可能通过zonulin途径降低紧密连接蛋白表达、改变蛋白分布,最终导致肠道屏障功能受损,益生菌对肠道屏障无损伤作用。
- 杜维霞沈名扬艾青韦红
- 关键词：CACO-2细胞ZONULIN肠道屏障
- 用质粒Gap-LCR-ELISA法检测孕妇尿中沙眼衣原体被引量：3
- 2004年
- 目的:研究孕妇尿液中对质粒缺口-连接酶链反应(Gap-LCR)-ELISA法检测沙眼衣原体(CT)产生抑制作用的物质及其去除方法,以提高该方法检测无症状孕妇CT感染的灵敏度。方法:对181份孕妇首段尿(FVU)进行全面尿化学分析后,采用CT标准株“Spike”法(铆钉法),对出现Gap—LCR—ELISA抑制的标本用多因素非条件Logistic回归分析与抑制作用相关的成分,在进行一系列去抑制处理后比较各方法的转阳率。结果:孕妇FVU对质粒Gap-LCR-ELISA检测CT的抑制率为6.08％(11/181),其中白细胞和磷酸盐结晶与抑制作用相关;对FVU作-70℃～37℃快速冻融2次的预处理可使90.91％的假阴性转为阳性,并对模板无明显降解作用。结论:孕妇尿液中确有对Gap—LCR—ELISA产生抑制作用的物质存在,可通过改良标本预处理的方法降低其所致的假阴性。
- 伍金林韦红吴仕孝钟晓云余加林
- 关键词：沙眼衣原体抑制物
- 新生儿坏死性小肠结肠炎动物模型建立方法改进与比较被引量：25
- 2009年
- 目的:在国内外坏死性小肠结肠炎(Necrotizing enterocolitis,NEC)动物模型建立现状基础上提出缺氧复氧冷刺激+LPS灌胃+人工喂养三因素联合造模的新方法(B组),并与国内外常见的四种方法进行比较。方法:采用出生当日SD新生大鼠为研究对象,按不同造模方式随机分为6组,每组8只。A组大鼠采取人工喂养+缺氧复氧冷刺激,B组大鼠为人工喂养+缺氧复氧冷刺激+LPS灌胃,C组大鼠仅接受缺氧复氧冷刺激,D组大鼠仅接受LPS灌胃,E组为人工喂养组,F为正常对照组。每日定时称量体重,实验结束取肠组织HE染色后观察肠道组织病理损伤情况,采用Nandle评分法对病变程度进行评价。结果:实验过程中,各模型组新生鼠相继出现活动减少,倦怠,进而可见腹胀及大便颜色性状发生改变。实验结束A、B、E组体重下降,C、D、F组体重上升,各组与F组比较有统计差异(P<0.05)。Kruskal-wallis检验发现:体重改变F组>D组>C组>E组>A组>B组。各组病理评分分别为A:3.0±0.53、B:3.63±0.52、C:1.75±0.71、D:1.75±0.46、E:2.38±0.52、F:0.5±0.53,各组与B组比较均有统计差异(P<0.05)。缺氧复氧冷刺激、LPS灌胃、人工喂养均为NEC发病危险因素,三项联合法造模所致肠道病理损伤明显重于其他方法。结论:新生大鼠在缺氧复氧冷刺激+LPS灌胃+人工喂养三因素联合干预下可诱导严重肠道损伤,接近人类新生儿坏死性小肠结肠炎病理改变,可广泛应用于建立新生儿坏死性小肠结肠炎模型。
- 李金纯韦红贾盛华魏小娣
- 关键词：新生儿坏死性小肠结肠炎肠道损伤动物模型
- 缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染被引量：2
- 2005年
- 目的:用缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附(Gap-LCR-ELISA)法检测重庆地区孕妇沙眼衣原体感染,以了解围生期沙眼衣原体(CT)的感染现状。方法:以512名孕妇首段尿(FVU)及配对宫颈刮片为研究对象,按照扩大金标准,采用质粒探针和外膜蛋白探针Gap-LCR-ELISA法用于不同类型临床标本检测CT感染。结果:①孕妇的CT感染呈很强的隐匿性,由扩大金标准所确证的CT真阳性共42例,所检重庆地区孕妇的CT感染率为8.2%(42/512),其中88.1%(37/42)可同时从尿道和生殖道检出CT,而另9.5%(4/42)和2.4%(1/42)仅能单独分别从生殖道或尿道检出。②Gap-LCR-ELISA用质粒与外膜蛋白作为探针检测FVU中CT的敏感性分别为90.48%和71.43%(P<0.05),质粒Gap-LCR-ELISA用于宫颈刮片和FVU两种标本的敏感性分别为97.62%和90.48%(P>0.05),特异性均为100%。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法用于孕妇FVU以检测围生期无症状CT感染患者,是一种非侵袭性的、高度敏感特异的、适合于发展中国家和地区进行大规模流行病学调查的方法。
- 伍金林韦红吴仕孝钟晓云余加林
- 关键词：沙眼衣原体孕妇
- 连接酶链反应-酶联免疫吸附试验诊断沙眼衣原体感染的初步应用被引量：5
- 2004年
- 目的 建立连接酶链反应-酶联免疫吸附试验(LCR-ELISA)检测沙眼衣原体DNA的方法,并初步应用于检测新生儿沙眼衣原体感染。方法 针对沙眼衣原体外膜蛋白基因设计4条引物,并分别在其两端标记地高辛和生物素。用此4条引物进行LCR扩增沙眼衣原体DNA。带有生物素和地高辛双标记的扩增产物以ELISA方法显色判断结果。采集328份肺炎新生儿鼻咽标本,分别对其进行培养和LCR扩增,应用ELISA检测有无沙眼衣原体感染。结果 LCR-ELISA方法可以检测出6种沙眼衣原体标准株,而对2种肺炎衣原体和其他细菌DNA无反应,显示出较强的特异性;可检测出10fg的DNA,较传统电泳法敏感10倍,且避免了溴化乙啶的污染。328份标本中,LCR-ELISA检测出68份阳性,培养仅检测出60份,两者相比差异有显著性。以扩大的金标准判断,LCR-ELISA的特异性、敏感性分别为100％和98.6％;而培养的特异性、敏感性分别为100％和、86.9％。结论LCR-ELISA是一种特异而敏感的基因扩增方法,避免了溴化乙啶污染,判断结果客观,检测方便。经临床初步应用,取得良好结果,值得进一步研究和完善。
- 韦红吴仕孝余加林伍金林刘官信
- 关键词：连接酶链反应酶联免疫吸附试验沙眼衣原体感染
- 混合尿液质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染被引量：1
- 2007年
- 目的建立高效的围生期沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)流行病学调查批处理方法--混合尿液(pooling urine)质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(gap-ligase chain reaction-en-zyme linked immunoabsorbent assay,gap-LCR-ELISA)。方法比较质粒gap-LCR-ELISA对不同体积孕妇尿液混合库(4×,6×,8×,10×)及单份样本(1×)检出CT感染的灵敏度和特异度。结果质粒gap-LCR-ELISA检测4,6,8,10人份混合尿样中的CT感染均可达到100%的特异度,灵敏度分别为95%,85%,70%和65%,各组实验成本下降的比例均超过40%。结论4人份孕妇混合尿液质粒gap-LCR-ELISA的检测效能,等同于对单份标本的独立检测,为该法最适宜的标本混合策略,在大规模流行病学调查中具有应用价值。
- 伍金林韦红吴仕孝
- 关键词：沙眼衣原体质粒
- 质粒缺口-连接酶链反应-ELISA法检测重庆地区围生期孕妇沙眼衣原体感染及基因分型被引量：3
- 2006年
- 目的:用质粒缺口-连接酶链反应(Gap-LCR)-ELISA法研究重庆地区围生期孕妇沙眼衣原体(CT)感染的现状及流行的主要基因型别,为其疫苗的研制提供分子流行病学依据。方法:以512例孕妇的首段尿(FVU)及其配对新生儿的鼻咽拭子为标本,用质粒Gap-LCR-ELISA法检测CT感染者,对阳性母、婴配对标本DNA行omp1-VS4-PCR扩增,产物行双链DNA直接测序并作基因分型。结果:所检重庆地区孕妇CT感染率为7.42%,母婴垂直传播率为15.79%,以阴道分娩为主要传播途径。6对阳性母婴配对标本的CT基因序列一致,其中5对为E型,1对为H型,再次证实了CT的垂直传播途径。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法可用于围生期无症状CT感染孕妇的大规模流行病学调查。重庆地区围生期CT流行型别仍以E型为主。
- 伍金林韦红吴仕孝钟晓云
- 关键词：沙眼衣原体基因分型
- 质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测沙眼衣原体被引量：7
- 2004年
- 目的:建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamy-diatrachomatisCT)。方法:根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针,对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病原菌行Gap-LCR-ELISA。结果:质粒Gap-LCR-ELISA可检测出6型CT,并与其他病原体无交叉反应,其最低检测限为2.5个原体(elementarybodiesEB)比PCR敏感10倍。结论:质粒Gap-LCR-ELISA对检测CT感染具有极高的灵敏度和特异度,适宜于我国进行大规模CT流行病学调查。
- 伍金林韦红吴仕孝刘官信
- 关键词：质粒
