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国家自然科学基金(30200318): 作品数：6 被引量：59H指数：4; 相关作者：陈希哲林云锋田卫东乔鞠李声伟更多>>; 相关机构：四川大学昆明医学院四川大学华西口腔医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

大鼠脂肪源性血管内皮细胞的培养及其形态特征: 目的:分离培养SD大鼠皮下脂肪基质细胞,经过定向诱导获得脂肪源性微血管内皮细胞并进行生物学鉴定。方法:切取四只雄性SD大鼠鼠蹊部皮下脂肪,通过机械分割和组织消化法获得脂肪基质细胞,用内皮细胞培养基进行定向诱导,倒置显微镜...; 林云锋陈希哲田卫东郑晓辉杨橙; 关键词：脂肪基质细胞内皮细胞细胞培养; 文献传递

大鼠脂肪源性内皮细胞成脂潜能的研究: 2006年; 目的:研究脂肪源性内皮细胞向脂肪细胞的分化潜力和过程。方法:获取4只雄性SD大鼠鼠蹊部皮下脂肪,通过机械分割和组织消化法获取脂肪基质细胞,在内皮细胞培养液中培养7d后,经免疫细胞化学及透射电镜鉴定证实95%以上细胞已具内皮细胞表型特征,再将这些细胞进行成脂(DMEM/F-12培养基内加入0.5mmol/L1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤,1μmol/L地塞米松,10μmol/L胰岛素,200μmol/L吲哚美星)定向诱导7d,形态学观察和油红O特殊染色鉴定诱导后的细胞。结果:SD大鼠脂肪源性内皮细胞呈典型的铺路石样单层融合贴壁生长;Ⅷ因子、W-P小体阳性;在此基础上经成脂诱导,发现约85%内皮细胞转化为脂肪细胞,油红O染色可见细胞质中有大量脂滴形成。结论:从SD大鼠皮下脂肪获取的脂肪源性内皮细胞经过成脂诱导后可转化为脂肪细胞,这对研究脂肪细胞的来源和形成以及脂肪组织工程研究具有重要的意义。; 林云锋田卫东陈希哲阎征斌乔鞠李智勇; 关键词：脂肪基质细胞内皮细胞脂肪细胞细胞培养

人体脂肪基质细胞成肌潜能研究被引量：9: 2004年; 目的　研究分离的人体脂肪基质细胞经过诱导培养后向骨骼肌细胞分化的潜能。方法　通过脂肪抽吸术获取健康成人脂肪 ,机械分割后用Ⅰ型胶原酶消化 ,得到脂肪基质细胞。将脂肪基质细胞在BGJb 培养基中原代培养 10d ,在DMEM/F12培养基中进行成肌诱导培养 2 0d ,获得细胞爬片。细胞爬片经 4 %多聚甲醛固定后 ,用甲苯胺蓝、Mallory磷钨酸苏木素染色观察细胞形态 ;Myosin单克隆抗体免疫细胞化学染色观察肌球蛋白表达情况。结果　经过成肌诱导培养的细胞与常规培养的脂肪基质细胞在形态上有明显的差异 ,表现为细胞体积增大 ,单个核的细胞融合形成多核的肌管样结构 ,胞浆内细胞器发达 ,肌浆网扩张并形成肌原纤维骨骼肌特异性的Myosin表达阳性。未经诱导的脂肪基质细胞在相同时间点无此现象。结论　人类脂肪基质细胞中存在着成体干细胞 ,在成肌诱导培养条件下具有向骨骼肌细胞分化的潜能。; 陈希平陈希哲林云锋田卫东唐尤超李声伟; 关键词：脂肪组织基质细胞细胞培养成肌分化

大鼠脂肪源性血管内皮细胞的培养及其形态特征: 目的:分离培养SD大鼠皮下脂肪基质细胞,经过定向诱导获得脂肪源性微血管内皮细胞并进行生物学鉴定。方法:切取四只雄性SD大鼠鼠蹊部皮下脂肪,通过机械分割和组织消化法获得脂肪基质细胞,用内皮细胞培养基进行定向诱导,倒置显微镜...; 林云锋陈希哲田卫东郑晓辉杨橙; 文献传递

人体脂肪基质细胞分离培养及其成骨潜能被引量：38: 2004年; 目的 :分离人体脂肪基质细胞并诱导培养其成骨表型。方法 :将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行机械分割 ,通过Ⅰ型胶原酶消化后得到脂肪基质细胞 ,在BGJb 培养基中原代培养 10d ,消化传代后用含体积分数 10 %FBS及 10 - 8mol/L地塞米松 ,50mg/L左旋抗坏血酸 ,10nmol/L维生素D3 ,10mmol/Lβ 磷酸甘油钠的DMEM /F12培养基中诱导培养 14d ,观察细胞形态 ,绘制细胞生长曲线并对其成骨表型进行鉴定。结果 :脂肪基质细胞呈成纤维细胞样贴壁生长 ,其中的成体干细胞经诱导培养后体积明显增大 ,胞核大面圆 ,胞浆丰富 ,群体倍增时间为 66h。Gomori萘酚磷酸酯法染色显示其胞浆内富含碱性磷酸酶颗粒 ,vonKossa染色表明聚集的细胞团能形成矿化结节。结论 :脂肪基质细胞中的成体干细胞经过矿化诱导培养后可向成骨细胞分化。; 陈希哲林云锋乔鞠田卫东闫征斌李声伟; 关键词：脂肪基质细胞成骨表型成体干细胞

人体脂肪基质细胞复合藻酸盐异位软骨生成的研究被引量：13: 2004年; 目的分离培养人体脂肪基质细胞,经成软骨定向诱导后复合藻酸盐凝胶,研究其异位软骨生成能力。方法将脂肪抽吸术获取的人体脂肪机械分割,通过Ⅰ型胶原酶消化后得到脂肪基质细胞,在BGJb培养基中原代培养10 d,消化传代后在含体积分数10％FBS及6.25 mg/L胰岛素,10μg/LTGF-β1,50 mg/L维生素C的DMEM/F12培养基中诱导培养14 d,获取的细胞按1×1010/L的细胞密度与质量分数为1.2％的藻酸钠复合,加入102mmol/L CaCl2充分混匀,使之交联,将细胞-藻酸盐凝胶1 ml注入每只体重为25 g的BALB/C裸小鼠背部皮下(共4只),同时在裸小鼠臀部两侧皮下各注入相同量的无细胞藻酸盐及单纯细胞作为自身对照。术后4、8周各处死2只动物,取材固定、脱钙、包埋后切片染色,镜下观察。结果经连续诱导培养14 d的脂肪基质细胞已具明显成骨表型(细胞基质中富含硫酸软骨素及Ⅱ型胶原)。4、8周时,注射细胞-藻酸盐凝胶标本均显示明显的软骨形成,肥大的软骨细胞位于富含硫酸蛋白多糖的基质中,而自身对照注射的无细胞藻酸盐及单纯细胞在术后3-4周已完全吸收。结论脂肪基质细胞经过诱导培养后具有向软骨细胞表型分化的潜能。; 陈希哲林云锋乔鞠田卫东陈润良李声伟; 关键词：人体脂肪藻酸盐脂肪基质细胞

人体脂肪基质细胞多向分化潜能研究: 目的:分离培养人体脂肪基质细胞并研究其成骨、成软骨、成肌、成脂及成神经等多向分化潜能。方法:通过脂肪抽吸术获取健康人体脂肪,机械分割后用Ⅰ型胶原酶消化,得到脂肪基质细胞在BGJ; 陈希哲林云锋田卫东陈润良李声伟; 关键词：脂肪组织基质细胞成体干细胞; 文献传递

人体脂肪基质细胞多向分化潜能研究: 目的:分离培养人体脂肪基质细胞并研究其成骨、成软骨、成肌、成脂及成神经等多向分化潜能。方法:通过脂肪抽吸术获取健康人体脂肪,机械分割后用Ⅰ型胶原酶消化,得到脂肪基质细胞在BGJb培养基中原代培养10d,传代细胞在含有10...; 陈希哲林云锋田卫东陈润良李声伟; 文献传递

绿色荧光蛋白标记人脂肪基质细胞成骨分化能力体外实验研究被引量：1: 2006年; 目的研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能。方法体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况。结果重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16h即有GFP表达,7d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率最高为11.4%)。感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0.05);诱导21d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性。结论重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法。; 林云锋敬伟陈希哲乔鞠李志勇严征斌吴凌田卫东; 关键词：人脂肪基质细胞绿色荧光蛋白基因转染分化

大鼠脂肪源性血管内皮细胞的培养及其形态特征被引量：5: 2006年; 切取4只雄性SD大鼠鼠蹊部皮下脂肪,通过机械分割和组织消化法获得脂肪基质细胞,用人内皮细胞培养基进行定向诱导,倒置显微镜下观察细胞生长状况,并以透射电镜及Ⅷ因子免疫细胞化学方法对诱导后的细胞进行鉴定。SD大鼠脂肪基质细胞经过定向诱导后呈典型的铺路石样单层融合贴壁生长;细胞浆中Ⅷ因子免疫细胞化学染色阳性;透射电镜显示细胞内具有内皮细胞特征性的W e ibe l-Pa lade氏小体,细胞边缘可见较多指状突起,胞浆内可见溶酶体等结构。结果证实从SD大鼠皮下脂肪获取得基质细胞经过定向诱导后,可以分化成为内皮细胞,该细胞具有与其它来源的血管内皮细胞相同的特征。皮下脂肪可以成为内源性血管内皮细胞的又一细胞来源。; 林云锋陈希哲田卫东阎征斌郑晓辉; 关键词：脂肪基质细胞内皮细胞细胞培养

国家自然科学基金(30200318)

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