博士科研启动基金(2007XQD26)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- Chk1 siRNA转染对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响
- 目的:观察Chk1 miRNA转染对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响。方法:本研究采用RNAi技术抑制BGC823细胞中Chk1表达,运用Western blot验证,然后采用MTT实验、流式细胞术分析Chk1基因...
- 凌晖文玲刘芳李艳兰陈真伟李振丰苏琦
- 关键词：RNA干扰
- 文献传递
- 二烯丙基二硫对人胃癌SGC7901细胞Au-rora-A、Aurora-B表达的影响
- 2011年
- 目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌SGC7901细胞中Aurora-A、Aurora-B表达的影响。方法体外培养SGC7901细胞,采用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学分析DADS对SGC7901细胞中Aurora-A、Aurora-B表达的影响。结果 RT-PCR显示用15 mg/L DADS处理SGC7901细胞24、48 h后,Aurora-A、Aurora-B mRNA表达明显下调(P<0.05);Western blot显示用15 mg/L DADS处理SGC7901细胞24、48 h后,Aurora-A、Aurora-B蛋白表达水平呈时间依赖性下降(P<0.05);免疫细胞化学显示用15 mg/L DADS处理SGC7901细胞24、48 h后,Aurora-A和Aurora-B蛋白表达明显降低。结论 DADS可从基因和蛋白水平抑制SGC7901细胞Aurora-A、Aurora-B的表达。
- 李振丰凌晖陈真伟段海瑞文玲胡程
- 关键词：胃癌二烯丙基二硫AURORA-AAURORA-B
- Chk1/2基因沉默对人胃癌MGC803细胞增殖及周期的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:观察Chk1/2基因沉默对人胃癌MGC803细胞增殖及周期的影响。方法:采用RNAi技术在MGC803细胞中分别将Chk1和Chk2基因沉默,运用蛋白质印变法验证,然后采用MTT实验、流式细胞术分析Chk1和Chk2基因沉默对人胃癌MGC803细胞增殖及周期的影响。结果:蛋白质印迹法结果显示,转染靶向Chk1和Chk2siRNA24h的Chk1、Chk2蛋白相对灰度值分别为0.09±0.04和0.12±0.01,明显弱于未转染对照组(0.39±0.09)和脂质体转染组(0.38±0.17),P均<0.05,而未转染对照组和脂质体转染组之间比较差异无统计学意义,P=0.458。转染Chk1、Chk2siRNA的MGC803细胞Chk1和Chk2蛋白表达分别下降85.0%和83.4%。MTT实验证明,Chk1蛋白表达缺失导致MGC803细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为38.0%(t=26.797,P<0.05);Chk2蛋白表达缺失对细胞增殖无明显抑制作用(t=6.098,P>0.05)。Chk1基因沉默后细胞周期在G0/G1期发生停滞,但并不引发凋亡,而Chk2基因沉默后对细胞周期影响不明显。结论:Chk1基因沉默可明显抑制人胃癌细胞增殖,且其抑制增殖作用与诱导G0/G1期阻滞有关。
- 凌晖文玲陈真伟李振丰夏红苏琦
- 关键词：胃肿瘤RNA干扰细胞周期
- 二烯丙基二硫对人胶质瘤U251细胞增殖及RORα表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胶质瘤U251细胞增殖及维甲酸相关孤核受体α(RORα)蛋白表达的影响。方法采用MTT比色实验、群体倍增时间分析DADS对人胶质瘤U251细胞的生长抑制效应;Western blot技术分析RORα蛋白在DADS处理U251细胞前后的表达改变。结果DADS浓度从15、22.5、30、37.5到45mg/L处理U251细胞,其吸光值比对照组低,而且随浓度增加逐渐降低(P<0.05);相反,随着浓度增加,DADS对细胞增殖的抑制率从32.88%、41.83%、49.50%、59.42%到68.53%逐渐增强(P<0.05);未处理的U251细胞群体倍增时间为21.86h,而DADS处理后的细胞,细胞群体倍增时间延长至36.69h(P<0.05);Western blot结果发现,DADS处理U251细胞24、48h后,RORα蛋白表达(0.69±0.13、1.37±0.25)较未处理组(0.22±0.16)明显上调(P<0.05),且48h处理组高于24h处理组(P<0.05)。结论DADS可抑制人胶质瘤U251细胞增殖,其抑制增殖作用可能与诱导RORα蛋白表达上调有关。
- 凌晖曾铁兵文玲张峰华刘芳彭娟张杨
- 关键词：胶质瘤二烯丙基二硫细胞增殖
- RNA干扰Chk1/2调控二烯丙基二硫诱导的G2/M期阻滞作用及相关周期蛋白表达被引量：9
- 2010年
- 在细胞周期检测点信号传导通路中,Chkl和Chk2起着重要作用,主要参与G2/M期细胞周期检测点信号传导.首先采用RNAi技术在BGC823细胞中将Chk1、Chk2基因沉默,Chk1、Chk2 siRNA转染BGC823细胞后24h加入15mg/L二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS),接着通过Real-timePCR、Western blot分析Chk1、Chk2基因在转染前后的表达差异,然后运用流式细胞术和Western blot分析Chk1、Chk2基因沉默后对DADS诱导的细胞周期G2/M期阻滞作用及相关周期蛋白CDC25C和cyclinB1表达的影响.实验结果表明,与未转染对照组相比,转染Chk1、Chk2siRNA后BGC823细胞中Chk1、Chk2表达明显被抑制,二者的mRNA表达分别下降84.7%和69.0%,蛋白质水平分别下降73.4%和78.5%.流式细胞术分析结果发现,ChklsiRNA转染的BGC823细胞在15mg/LDADS处理24h后,G2/M期比例由单纯DADS处理组的58.1%降至10.4%(P<0.05).但Chk2 siRNA转染后加入15mg/LDADS,与单独15mg/LDADS作用相比,细胞周期G2/M期比例差异不明显(P>0.05).Chk1和Chk2下游分子的改变显示,DADS可抑制BGC823细胞中CDC25C和cyclinB1表达(P<0.05),但Chk1基因沉默后加入DADS,CDC25C和cyclinB1表达却不被抑制(P>0.05),Chk2基因沉默后对DADS抑制CDC25C和cyclinB1表达的作用无影响.由此得出结论,Chkl基因沉默可消除DADS诱导BGC823细胞G2/M期阻滞作用,DADS阻滞G2/M期可能是通过Chk1/CDC25C/cyclinB1信号通路起作用.
- 凌晖陆丽峰文玲何洁谭晖夏红苏琦
- 关键词：RNA干扰细胞周期二烯丙基二硫CYCLINB1
- microRNA靶向抑制RORa表达对DADS诱导人胃癌细胞增殖的影响
- 目的:观察RORαmiRNA干扰对DADS处理前后人胃癌细胞增殖的影响。探讨RORα在DADS抑制人胃癌细胞增殖中的作用,寻找DADS抑制人胃癌细胞的新靶点。方法:根据GenBank提供的RORα基因序列设计4条RNA干...
- 凌晖文玲曾铁兵朱亚平苏琦
- 关键词：胃癌DADS微小RNA
- 文献传递
- RORα基因沉默对二烯丙基二硫诱导人胶质瘤细胞U251增殖的影响
- 目的:本课题研究二烯丙基二硫(DADS)对胶质瘤U251细胞增殖的作用,并观察其对RORα蛋白表达的影响,进一步分析RORαmiRNA干扰对DADS处理前后U251细胞增殖的影响。方法:1.采用MTT比色实验、群体倍增时...
- 凌晖文玲张峰华夏红董琳周建国
- 关键词：胶质瘤DADS增殖
- 文献传递
- 二烯丙基二硫对人胃癌SGC7901细胞增殖及周期的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌SGC7901细胞增殖及周期分布的影响。方法体外培养SGC7901细胞,采用MTT比色实验、细胞计数法和流式细胞术分析DADS对SGC7901细胞增殖的抑制作用与对细胞周期分布的影响。结果MTT法显示,不同浓度DADS(50、100、150、200、250μmol/L)处理SGC7901细胞96 h后,生长抑制率分别为21.07%、49.96%、59.73%、67.64%、70.49%,DADS抑制作用随浓度增加逐渐增强(P<0.05)。细胞计数法表明:常规培养的SGC7901细胞群体倍增时间分别为24.35 h,当DADS浓度由50μmol/L增加到200μmol/L时,其细胞群体倍增时间由27.28 h增加到71.98 h(P<0.05)。流式细胞仪分析发现,50、100和200μmol/L DADS呈浓度依赖性将SGC7901细胞阻滞在G2/M期。结论DADS具有抑制人胃癌SGC7901细胞增殖的作用,且其抑制增殖作用与G2/M期阻滞有关。
- 凌晖文玲李振丰陈真伟吉晓霞朱亚平
- 关键词：胃癌二烯丙基二硫SGC7901细胞细胞增殖细胞周期
