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分泌抗重金属铜抗体的杂交瘤细胞克隆方法的建立: 2011年; 为了建立有效地克隆分泌抗铜抗体杂交瘤细胞的方法,试验用不同浓度的甲基纤维素半固体培养基法培养杂交瘤细胞。结果表明:培养杂交瘤细胞的甲基纤维素最佳浓度为1.6%;获得多株阳性细胞,其中阳性细胞株3B1-C5的染色体数在100个以上,腹水抗体效价达到1∶102 400,其分泌的抗体属IgM亚类,轻链为Kappa型;经间接ELISA方法检测,连续培养单细胞系93 d,3B1-C5细胞株能较稳定分泌抗体。说明含1.6%甲基纤维素的半固体培养法适合克隆分泌抗铜抗体的杂交瘤细胞。; 赵丽王凤龙杨慧李鹏刘满杏李霞; 关键词：铜杂交瘤细胞甲基纤维素克隆抗体

重金属镉螯合物人工抗原的合成与鉴定被引量：4: 2009年; [目的]合成并鉴定重金属镉螯合物抗原。[方法]以乙二胺四乙酸(EDTA)或二乙烯三胺五乙酸(DTPA)为双功能螯合剂,合成了半抗原,并将半抗原与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)或卵清蛋白(OVA)偶联制备完全抗原,对其进行浓度测定、紫外分光光度计扫描、SDS-PAGE电泳定性鉴定和石墨炉原子吸收光谱法检测。[结果]利用二喹啉甲酸(BCA)法检测分离纯化后的的Cd-DTPA-OVA、Cd-EDTA-KLH、DTPA-OVA和EDTA-KLH中蛋白的实际浓度依次为1.862±0.038、5.121±0.024、25.155±0.014和8.459±0.018mg/m l,紫外扫描和电泳鉴定证明,抗原合成成功;用吸收光谱法检测的上述抗原中的镉离子含量依次为34.6±0.3、96.5±0.5、0和0μg/m l,表明半抗原确实偶联到蛋白质上,进一步证明抗原合成成功。[结论]该研究为重金属螯合物单克隆抗体的制备和建立快速检测方法奠定基础。; 张云显刘发央杨慧赵丽李鹏李霞; 关键词：镉抗原

抗重金属汞离子抗体的制备及鉴定被引量：9: 2010年; 汞、镉、铅等重金属引起的环境污染已在世界范围内造成危害。快速、廉价地监测生境中重金属是减小其对人类及动物危害的先决条件。传统检测方法无法满足高通量的现场检测,建立更快速、更经济的免疫分析法检测汞离子是生产及经济发展的需要。本研究中,报道了汞特异性单克隆抗体的制备与筛选方法和结果。因Hg2+太小以至于不能引起免疫反应,所以用螯合剂(二乙烯三胺五乙酸,DTPA)将金属离子与载体蛋白(匙孔血蓝蛋白,KLH)连接起来。成功合成、鉴定汞复合物抗原后,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合获得了稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。用极限稀释法亚克隆,通过ELISA筛选,获得了2株稳定分泌抗汞离子抗体的细胞株(H2H5,H1H8)。小鼠腹腔注射1×107H2H5、H1H8细胞株制备腹水,腹水抗体效价都在1∶51200以上。经鉴定两株杂交瘤均为IgG1亚类,轻链为kappa型且分泌抗体稳定性较好。实验结果为汞离子残留免疫学检测方法的建立提供了技术基础,对提高风险评估工作的效率和质量,保障食品安全有重要现实意义。; 赵丽王凤龙杨慧李鹏刘满杏李霞; 关键词：汞单克隆抗体酶联免疫吸附法

重金属汞单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3: 2008年; 通过双功能螯合剂（异硫氰基-苯甲基-乙二胺四乙酸，ITCBE）使汞离子与载体蛋白（匙孔血蓝蛋白，KLH）偶联，获得了免疫抗原KLH-ITCBE-Hg（II）。以该抗原免疫BALB／C小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，杂交瘤细胞用ELISA方法筛选及有限稀释法亚克隆化，获得了5株可稳定分泌抗汞单克隆抗体的杂交瘤细胞株（E／H9、E／B2、1／F11、1／H7和B／B11）。杂交瘤细胞染色体数目在97—104之间，所分泌的抗体均为IgM、k型，其中杂交瘤细胞株E／H9、1／F11和B／B11细胞培养上清液效价分别达1：640、1：320、1：160，腹水效价分别达1：6400、1：3200、1：6400。B／B11的亲和常数为2．981×10^8L／mol，特异性试验表明：B／B11与其它金属离子的交叉反应率均小于2％，具有较高的特异性。高亲合力和高特异性的抗汞单克隆抗体在该研究中的成功制备，为建立农产品和环境中重金属汞的快速免疫检测方法奠定了基础。; 杨凤丽朱晓霞胡白石徐丽娜娄旸刘凤权; 关键词：汞单克隆抗体 ELISA

免疫测定法检测重金属技术的进展被引量：5: 2009年; 作为检测重金属的一种新型方法,免疫测定法有其特点和优势。免疫测定法的技术构成包括重金属单克隆抗体的获得、单克隆抗体灵敏性的提高和免疫检测,其中重金属单克隆抗体的获得是基础。我们对该方法进行了简要介绍,并就其所面临的一些问题和发展趋势进行了探讨。; 李兴涛李霞赵艺欣; 关键词：免疫测定法重金属单克隆抗体金属螯合物

重金属锌螯合物人工抗原的合成与鉴定被引量：1: 2009年; [目的]合成并鉴定重金属锌螯合物抗原,为制备重金属锌螯合物抗原特异性单克隆抗体和建立快速检测方法奠定基础。[方法]用二喹啉甲酸(BCA)法测定抗原浓度,利用SDS-PAGE电泳定性鉴定半抗原、抗原、KLH和OVA,用石墨炉原子吸收光谱法检测抗原中Zn2+离子的含量。[结果]利用BCA法检测得分离纯化后的Zn-DTPA-OVA、Zn-DTPA-KLH、DTPA-OVA、DTPA-KLH中蛋白的实际浓度依次为:25.155±0.038、4.195±0.014、9.242±0.015、6.609±0.025 mg/m l。最佳反应条件是A液中含有的Zn2+物质的量是B液中含有的DTPA物质的量的5倍;螯合剂物质的量与蛋白中赖氨酸物质的量的比例为2∶1。通过石墨炉原子吸收光谱法检测得Zn-DTPA-OVA、Zn-DTPA-KLH、DTPA-OVA、DTPA-KLH、HEPES中全Zn2+的含量依次为:295.0±0.3、49.5±0.5、0、0、0μg/m l。[结论]抗原合成是成功的。; 刘丹赵丽刘荣堂李霞杨慧张云显; 关键词：锌抗原

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国家高技术研究发展计划(2007AA10Z439)