广西壮族自治区科技攻关计划(0719004-3G)
- 作品数：14 被引量：31H指数：3
- 相关作者：熊毅付薇易春华潘杰蒋家霞更多>>
- 相关机构：广西大学广西动物疫病预防控制中心广西壮族自治区动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划更多>>
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- 广西山雉新城疫病毒分离株生物学特性测定被引量：3
- 2009年
- 对1株从广西某山雉养殖场发病山雉中分离得到的新城疫病毒进行生物学特性测定。结果显示,分离株的鸡胚平均死亡时间(MDT)为50.4h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.58,F蛋白核苷酸序列与新城疫标准强毒株F48E9株的核苷酸同源性为84.5%,与Lasota的核苷酸同源性为81.8%,推导氨基酸在裂解位点的序列是112G-R-R-Q-K-R-F117。通过MDT、ICPI和推导氨基酸裂解位点分析,确定分离株是一株毒力较强的新城疫病毒强毒株。
- 秦顺华颜健华覃芳芸胡丽萍杨荣付薇熊毅
- 关键词：新城疫病毒生物学特性
- 广西鹅γ干扰素基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2010年
- 为进一步研究鹅干扰素(IFN)的分子生物学特性及抗病毒作用机理,提取经刀豆素(ConA)刺激培养的鹅外周血淋巴细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增获得鹅IFN-γ基因,将其克隆至pMD18-T载体并进行序列测定分析。结果表明,克隆获得的广西鹅IFN-γ基因与GenBank上已公布的鹅IFN-γ基因核苷酸序列的同源性均高于99.2%、氨基酸同源性均高于98.2%;与其他动物的IFN-γ基因核苷酸及氨基酸序列比较,亲缘关系越远,同源性越低。
- 胡丽萍胡晓静付薇徐贤坤何丹刘棋熊毅
- 关键词：Γ干扰素克隆
- 鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2009年
- [目的]克隆鹅副粘病毒GX1株HN基因与F基因，并进行序列分析。[方法]根据Genbank已发表的鹅副粘病毒GPV—SF02株基因组核苷酸序列设计2对引物，对从广西发病鹅分离到的鹅副粘病毒毒GX1株的HN和F基因进行PCR扩增，将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。[结果]该株副粘病毒株的HN基因和F基因核苷酸序列全长分别为1716和1662bp，与GPV—SFO2株的同源性均在97．3％左右，与LaSota株、F48E9株、JS株的同源性为80．3％～97．5％，与Miyadera株的同源性仅84．8％。[结论]分离株GX1株与禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）强毒株特征相符，属于APMV-1基因Ⅶ型。
- 易春华潘杰付薇颜健华徐贤坤熊毅
- 关键词：鹅副粘病毒HN蛋白基因F蛋白基因克隆
- 2株鹅细小病毒的主要结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2008年
- 将鹅细小病毒PJ分离株和XJ分离株接种于13日龄非免疫鸭胚,收集接毒后24～72h死亡的鸭胚尿囊液。根据Genbank已发表的鹅细小病毒B株基因组核苷酸序列设计1对引物,对2株鹅细小病毒毒株主要结构蛋白VP2基因进行PCR扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。结果表明:PJ株和XJ株VP2的核苷酸序列全长分别为2 044bp和2 050bp,PJ株与B株、XJ株、台湾株的同源性均为93.5%～96.7%,与YG株、哈尔滨株、广东株的同源性为88.7%左右,与匈牙利株的同源性仅为80.7%,而与番鸭细小病毒的同源性为74.8%～80.7%。XJ株与匈牙利株的同源性为83.5%,与番鸭细小病毒的同源性为76.8%～80.0%,与其他毒株的同源性为91.6%～98.3%。
- 胡晓静潘杰陈进喜付薇徐贤坤何丹刘棋熊毅
- 关键词：鹅细小病毒VP2基因克隆
- 鹅源H9N2亚型禽流感病毒PB2和PB1基因序列分析被引量：1
- 2011年
- 采用RT-PCR方法对1株鹅源H9N2亚型禽流感病毒(GS/GX/01/07)RNA聚合酶基因PB2和PB1分别进行了扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1开放阅读框(ORF)分别由2 280和2 277个碱基组成,分别编码759和758个氨基酸。经同源性和系统进化树分析,该毒株RNA聚合酶基因PB2和PB1与H9N2亚型欧亚谱系中的第2亚群代表株QA/HK/G1/97的核苷酸和氨基酸同源性在95%以上,亲缘关系较近。
- 付薇覃芳芸马琳徐贤坤黄胜斌易春华孙翔翔何奇松蒋家霞熊毅
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型
- 广西野鸟H9N2亚型流感病毒的分离与鉴定被引量：3
- 2011年
- 【目的】探讨H9N2亚型流感病毒在野鸟中的存在与传播,为广西流感疫情动态监测和防控及人流感预防监测提供重要依据。【方法】采集广西野鸟肺脏组织,将病料接种于9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔进行分离培养,血清学试验鉴定HA和NA亚型,并克隆扩增其HA和NA基因。【结果】该分离株能被H9亚型阳性血清抑制,神经氨酸酶抑制（NI）试验结果将其鉴定为N2亚型,判断该病毒属于H9N2亚型流感病毒,命名为A/wildbird/Guangxi/H2/07,对HA和NA基因进行序列分析,发现与流感病毒H9亚型和N2亚型同源性最高,分别达到82.4%~99.0%和83.1%~99.9%。【结论】H9N2亚型流感病毒已在广西野鸟中存在,该结论为广西流感疫情动态监测和防控提供了重要依据。
- 黄胜斌蒋家霞何奇松付薇孙翔翔马琳熊毅
- 关键词：野鸟HA基因NA基因
- 鹅副粘病毒病免疫程序探讨被引量：3
- 2009年
- 研究先使用商品新城疫Ⅳ系弱毒苗对ND抗体检测为阴性的实验鹅进行首免和二免,再用鹅副粘病毒油乳剂灭活苗进行加强免疫。定期抽取血清用HI试验检测抗体滴度,并抽取部分有抗体滴度的鹅进行攻毒试验。结果表明:在一免后抗体滴度没有变化,而进行二免后,抗体滴度可达到3log2～4log2,加强免疫后达到10log2左右,且能抵抗强毒的攻击。
- 许瑞胜潘杰龙剑明徐贤坤胡晓静冯淑萍何丹熊毅
- 关键词：鹅副粘病毒病免疫效果免疫程序
- 鹅γ-干扰素基因真核表达载体的构建及在幼仓鼠肾细胞中的表达被引量：3
- 2011年
- 将克隆在pMD18-T载体中的鹅IFN-γ基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+),得到真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IFN-γ,经测序鉴定后,在室温条件下,质粒pcDNA3.1(+)-IFN-γ浓度20μg/mL,体积400μL,幼仓鼠肾细胞(BHK-21)细胞密度1×106/mL,电穿孔仪参数设为电压425 V、电容25μF、连续脉冲2次转染BHK-21细胞,待细胞贴壁后经过浓度为600μg/mL的G418连续筛选14 d后,出现抗性细胞克隆,将阳性BHK-21细胞上清液进行Western-blot鉴定,检测结果证明鹅IFN-γ在BHK-21细胞中得到表达。
- 胡晓静刘棋付薇徐贤坤熊毅
- 关键词：Γ-干扰素基因电穿孔真核表达
- 5株H9N2亚型禽流感病毒HA、NA基因的序列分析被引量：1
- 2010年
- 为了从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在广西的遗传变异情况,对5株不同年代的广西H9N2亚型AIV的HA和NA基因进行克隆测序及同源性、遗传进化分析。结果表明,5株分离株均为低致病性AIV(LPAIV),HA、NA基因均属于欧亚谱系中的DK/HK/Y280/97(第I亚群),与我国代表株CK/BJ/1/94HA基因核苷酸、氨基酸同源性为93.5%～95.9%,NA基因核苷酸、氨基酸同源性为93.8%～95.8%。分离株DK/GX/51/05、CK/GX/55/05HA基因第226位氨基酸由谷氨酰胺(Gln)突变为亮氨酸(Leu),具备人类流感病毒的受体特征,而在糖基化位点方面,除了CK/GX/6/00HA基因的第218位发生变异以外,5株分离株HA基因上其余各糖基化位点均未发生变异;分离株DK/GX/51/05、CK/GX/55/05、QA/GX/B1/06NA基因均缺失第63、64、65位3个氨基酸,导致1个糖基化位点缺失,而CK/GX/6/00、WB/GX/A1/06NA基因则未发生缺失。
- 刘科覃伦熊毅刘棋
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型HA基因NA基因
- 鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析被引量：2
- 2009年
- 1材料与方法
1．1病毒来源鹅副粘病毒分离株GX1株由广西壮族自治区动物疫病预防控制中心实验室分离保存。
1．2试剂及仪器各种PCR反应试剂、PMD-18T载体、胶回收试剂盒、限制性内切酶等均购自宝生物工程（大连）公司。仪器：恒温孵化箱、PCR反应仪、超速离心机、移液器等。
- 易春华潘杰付薇颜健华徐贤坤熊毅
- 关键词：鹅副粘病毒F蛋白基因病毒分离株PCR反应
