湖北省自然科学基金(2003ABA149)
- 作品数：6 被引量：24H指数：4
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- 西地那非抑制低氧肺血管内皮向平滑肌样细胞的转分化及其机制被引量：1
- 2007年
- 目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAECs)向平滑肌样细胞的转分化及西地那非(sildenafil)对其的作用和可能机制。方法经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1做免疫分选标记)纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,分为常氧组(含21%O2,5%CO2和74%N2)、低氧组(含1%O2,5%CO2,94%N2)、常氧+sildenafil组和低氧+sildenafil组。分别培养1d和7d。免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化;用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测myocardin mRNA的表达。结果(1)免疫荧光结果显示低氧7d组PAECs中α-SM-actin阳性率(2.07‰±0.06)(P<0.05)明显增高,阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1d组均未见α-SM-actin的阳性表达;(2)RT-PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧7d组(0.23±0.03)(P<0.05)明显增高,常氧各组和低氧1d组均未检测出其表达。(3)用sildenafil后,平滑肌样细胞的转分化率明显低于对应低氧7d组(1.02‰±0.05;P<0.05);Myocardin mRNA水平也明显降低(0.09±0.02)(P<0.05)。结论低氧可促进PAECs向平滑肌样细胞的转分化,sildenafil在一定程度上可抑制其转分化,其可能机制是通过抑制myocardin基因的表达而实现的。
- 何惠华黄磊卢玮朱朋成葛晓娜杜惠扬敖启林
- 关键词：MYOCARDIN平滑肌样细胞转分化低氧西地那非
- 低氧诱导肺动脉内皮细胞间质细胞衍生因子-1的表达及其调控机制被引量：6
- 2006年
- 肺血管重塑（PVR）是低氧性肺动脉高压持续且难以逆转的主要原因，其主要病变表现为肺动脉壁细胞增多，但其来源和机制仍不清楚。研究表明骨髓和外周血中存在血管壁细胞的祖细胞，并且参与了PVR的形成。间质细胞衍生因子-1（SDF-1）是特异性介导干细胞归巢至骨髓，介导祖细胞归巢至损伤或缺血组织的关键因子。SDF-1表达在这些部位的血管内皮细胞，而低氧是这些部位的微环境特征，也是诱导SDF-1表达的主要原因。低氧诱导因子-1α（HIF-1α）是特异性介导细胞低氧反应的关键因子，直接调控脐静脉内皮细胞SDF-1基因的表达㈨。我们旨在探讨低氧对肺动脉内皮细胞SDF-1表达的影响及HIF-1α对其表达的调控作用。
- 敖启林朱朋成葛小娜卢玮何惠华
- 关键词：肺动脉内皮细胞细胞衍生细胞间质低氧性肺动脉高压
- 脂多糖活化的大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生的新机制被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨脂多糖(LPS)活化的肺泡巨噬细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其在肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)中的作用。方法:应用HIF-1α诱骗法(HIF-1αdecoy)抑制其作用,并用Westernblotting、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。结果:HIF-1α蛋白含量在LPS组(1.95±0.57)和HIF-1αdecoy组(1.89±0.59)均明显高于对照组(0.41±0.14,P<0.05);HIF-1αmRNA的表达在对照组(0.7838±0.3183)、LPS组(0.7622±0.3387)和HIF-1αdecoy组(0.8155±0.3594)之间无显著差异(P>0.05);LPS刺激24h后,大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生明显高于对照组(61ng/Lvs156ng/L,P<0.05),抑制HIF-1α后TNF-α的产生明显低于LPS刺激组(90ng/Lvs156ng/L,P<0.05),但HIF-1αdecoy组TNF-α的产生仍然高于对照组(61ng/Lvs94ng/L,P<0.05)。结论:大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的刺激下HIF-1α蛋白的稳定性增强使其表达明显上调,并且促进TNF-α的产生,提示HIF-1α在肺部慢性炎症性疾病如COPD的发病机制中可能有重要作用。
- 敖启林黄磊朱朋成王伟王迪浔
- 关键词：脂多糖类缺氧诱导因子1肿瘤坏死因子肺泡
- Myocardin在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用
- 目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAECs）向平滑肌样细胞的转分化及 myocardin在其转分化过程中的作用。方法经免疫磁珠法（用血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1 做免疫分选标记）纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,用...
- 何惠华黄磊卢玮朱朋成葛晓娜杜惠杨敖启林
- 关键词：MYOCARDIN平滑肌样细胞转分化低氧
- 文献传递
- TGF-β1在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用
- 目的研究低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAEC）向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1（TGFβ1）在此转分化过程中的作用。方法将经免疫磁珠法（用血小板-内皮细胞粘附分子PECAM-1做免疫分选标记）纯化后的原代肺动脉内皮...
- 卢玮黄磊何惠华朱朋成葛晓娜杜惠扬敖启林孙红蕾
- 关键词：低氧平滑肌样细胞转分化转化生长因子Β1
- 文献传递
- 低氧诱导大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF-α的机制被引量：5
- 2005年
- 目的:研究低氧诱导肺泡巨噬细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及HIF-1α对肺泡巨噬细胞 产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:应用HIF-1α诱骗法(HIF-1α decoy)抑制低氧(3％O2,5％CO2,92％ N2)培养的肺泡巨噬细胞中HIF-1α的作用,并用免疫组织化学、Western blot、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法 (ELISA)分别检测HIF-α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。结果:HIF-1α在常氧对照组肺泡巨噬细胞核中表 达呈阴性,在低氧组和HIF-1α decoy组表达呈阳性;低氧组和HIF-1α decoy组中HIF-1α蛋白的含量显著高于常氧 对照组(P<0．05)。HIF-1α mRNA的含量在低氧组和HIF-1α decoy组明显高于常氧对照组(P<0．05);培养的巨噬 细胞上清液中TNF-α的含量在低氧组(115±17 ng／L)明显高于常氧对照组(69±13 ng／L,P<0．05)和HIF-1α decoy 组(8l±15 ng/L,P<0．05)。结论:低氧可明显诱导肺泡巨噬细胞HIF-1α的表达和活性增强,后者能促进TNF-α 的产生,提示在可导致肺部低氧的炎症性疾病如COPD中HIF-1α可能发挥重要作用。
- 敖启林黄磊朱朋成王伟王迪浔
- 关键词：低氧肿瘤坏死因子
- TGF-β_1在低氧诱导肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化中的作用被引量：5
- 2006年
- 目的研究低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1(TGF-β1)在此转分化过程中的作用。方法将经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞粘附分子1做免疫分选标记)纯化后的原代肺动脉内皮细胞分别在常氧(含21%O2、5%CO2、74%N2)和低氧(含1%O2、5%CO2、94%N2)条件下培养1、4、7 d,用核酸干扰法(RNAi)阻断TGF-β1的表达,用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)和Western blot分别检测各组细胞TGF-β1mRNA和蛋白的表达,并用免疫细胞化学法检测平滑肌细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,结合形态学观察从而判定有无平滑肌样细胞的转分化。结果低氧可增加肺动脉内皮细胞TGF-β1mRNA和蛋白的表达(P<0.05),RNAi沉默TGF-β1基因表达后可明显降低其mRNA和蛋白含量(P<0.05),随着低氧培养时间的延长,肺动脉内皮细胞转分化为平滑肌样细胞的比率逐渐增加(P<0.05);阻断TGFβ-1表达后,平滑肌样细胞的转化率明显降低(P<0.05)。结论肺动脉内皮中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞;低氧可明显促进转分化,TGF-β1在此转分化过程中起重要作用。
- 卢玮黄磊何惠华朱朋成葛晓娜杜惠扬敖启林孙红蕾
- 关键词：低氧内皮细胞平滑肌样细胞转分化转化生长因子Β1
- Sildenafil下调Myocardin基因在低氧诱导的大鼠肺动脉高压中的表达
- Myocardin基因已被证明是平滑肌细胞分化过程中的一个关键调节因子,而平滑肌细胞则在低氧诱导的肺动脉结构重塑和肺动脉高压中扮演重要角色。本研究主要观察myocardin 基因在低氧诱导的重塑肺动脉中的表达情况以及磷酸...
- 朱朋成黄磊葛晓娜晏菲吴人亮敖启林
- 关键词：MYOCARDIN平滑肌细胞肺动脉高压低氧
- 文献传递
- myocardin在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用被引量：5
- 2006年
- 目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及myocardin在其转分化过程中的作用。方法经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞黏附分子1做免疫分选标记)纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,用:RNA干扰(RNAi)技术构建psimyocardin RNA表达载体抑制myocardin基因的表达。细胞分为常氧组(含21％O2,5％CO2和74％N2)、低氧组(含1％O2,5％CO2, 94％N2)、常氧+myocardin抑制组和低氧+myocardin抑制组,分别培养1 d、4 d和7 d。用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测myocardin mRNA的表达;免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌(α-SM)肌动蛋白的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化。结果(1)免疫荧光检测PAEC中α-SM-肌动蛋白阳性率在低氧4 d组(0．96‰±0．08‰)明显低于7 d组(2．07‰±0．06‰,P< 0．01),阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1 d组均未见α-SM-肌动蛋白的阳性表达;(2)RT- PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧4 d组(0．14±0．01)明显低于低氧7 d组(0．23±0．03, P<0．01),常氧组和低氧1 d组均未检测出其表达。(3)RNAi沉默myocardin基因表达后,其mRNA水平明显低于对应的低氧4 d组(0．03±0．02)和低氧7 d组(0．05±0．01,P<0．01);平滑肌样细胞的转分化率也明显降低(0．19‰±0．07‰,0．21‰±0．04‰,P<0．01)。以上每组重复3次。结论PAEC中存在少数细胞具有转分化为平滑肌样细胞的潜能,低氧可明显促进其转分化,myocardin在此转分化过程中起重要作用。
- 何惠华黄磊卢玮朱朋成葛晓娜杜惠杨敖启林
- 关键词：内皮低氧MYOCARDIN
