国家自然科学基金(30771409)
- 作品数：4 被引量：15H指数：1
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- 基于CRISPR/Cas9系统的番茄LeMYB330突变体制作及突变位点分析
- 2022年
- 植物MYB转录因子在植物防卫反应过程中发挥重要作用,番茄LeMYB330是与根结线虫效应蛋白MiPDCD6互作的靶标蛋白。本研究利用在线软件CRISPR-GE (http://skl.scau.edu.cn/)设计了番茄LeMYB330基因编辑双靶点,在番茄LeMYB330基因第3外显子区域找到彼此相距124 bp的2个靶点,分别为TG1:5’-ATGCAACAGTGGTACAACTGAGG-3’和TG2:5’-GGTGGTCAAGAAGTTGTATGAGG-3’。将靶点T1和靶点T2的sg RNA表达盒进行Golden Gate克隆连接到pYLCRISPR/Cas9Pubi-H双元表达载体,成功获得CRISPR/Cas9重组双元载体(pCas9-MYB330T1T2)。利用农杆菌介导的遗传转化将重组载体转入‘新金丰一号’番茄愈伤组织,经潮霉素抗性筛选获得共计50株CRISPR/Cas9突变番茄植株。番茄转基因后代测序结果表明,有3株阳性植株发生突变,由此成功构建了番茄LeMYB330突变体。试验结果可为加快番茄LeMYB330功能基因资源的开发利用提供有力的理论与方法支持。
- 康志强邓小大袁永强蔡书静郑礼军赵利锋叶雯华王燕王新荣
- 关键词：番茄
- 南方根结线虫MiPDCD6基因多克隆抗体的制备
- 2023年
- 【目的】制备针对南方根结线虫食道腺蛋白MiPDCD6多克隆抗体,为进一步研究南方根结线虫MiPDCD6蛋白的致病机制提供技术支持和材料准备。【方法】将扩增MiPDCD6基因的功能片段,与原核表达质粒pET-32a(+)构建重组质粒pET-32a-MiPDCD6,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞进行诱导表达;将纯化的根结线虫Mi PDCD6融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔,获得高效价高纯度的多克隆抗体。【结果】构建的重组质粒pET-32a-MiPDCD6转化大肠杆菌BL21细胞后,在诱导剂IPTG浓度1.0 mmol·L^(-1)、摇床温度37℃、转速150r·min^(-1)和振荡培养5 h条件下,成功表达MiPDCD6融合蛋白。ELISA和SDS-PAGE检测表明:将纯化的根结线虫Mi PDCD6融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔,获得高效价高纯度的多克隆抗体,效价约为1∶50 000。【结论】明确了MiPDCD6基因原核表达条件;制备获得的根结线虫MiPDCD6蛋白的多克隆抗体效价和纯度较高,可用于后续研究MiPDCD6蛋白在南方根结线虫致病机理中发挥的功能。
- 陈晨高永峰王新荣袁永强蔡书静刘松松叶雯华王燕
- 关键词：多克隆抗体南方根结线虫效价
- 基于RNA-seq的番茄响应根结线虫MiPDCD6蛋白的SA信号通路基因鉴定与表达分析
- 2023年
- 为了揭示南方根结线虫MiPDCD6蛋白抑制番茄PTI免疫的分子机理,以番茄品种新金丰1号MiPDCD6超表达苗为试验材料,以番茄品种新金丰1号组培苗为对照,通过转录组测序技术分别对番茄MiPDCD6超表达苗和对照苗进行转录组测序。以番茄栽培品种Heinz 1706基因组作为参考基因组进行对比,利用FPKM法计算基因表达量,设定参数(|log_(2)FC|>1且P<0.05)筛选差异表达基因。利用Gene Ontology(GO)数据库进行差异表达基因GO功能富集分析,统计每个GO term中的差异表达基因数目,计算出基因富集的显著性,找出富集显著的功能条目。利用KEGG数据库对差异表达基因进行Pathway富集分析,超几何分布检验方法计算每个Pathway中差异表达基因富集的显著性。以FDR和基因数量来衡量KEGG的富集程度。结合基因差异表达分析和功能富集分析,研究MiPDCD6蛋白对番茄PTI免疫相关通路基因的影响。结果发现:在超表达MiPDCD6番茄植株中,与野生型番茄相比,MiPDCD6过表达番茄植株中有2366个差异表达基因(DEGs),其中1354个上调基因,1012个下调基因。这些DEGs中,通过GO和KEGG注释,植物激素信号转导(sly04075)、植物-病原互作(sly04626)、植物MAPK信号通路(sly04016)和丙环素生物合成(sly00940)等KEGG通路中富集到大量的差异表达基因。SA生物合成途径包括ICS和PAL,MiPDCD6过表达番茄植株中SA合成通路PAL1和PAL-like基因以及SA信号转导途径TGA9、TGA10-like和PR1a2基因均显著下调,表明MiPDCD6基因可能抑制SA合成,从而抑制植物PTI免疫。
- 邓小大袁永强蔡书静郑礼军徐春玲王新荣
- 关键词：番茄根结线虫
- 南方根结线虫程序性死亡基因MiPDCD6的RNAi效应分析
- 根结线虫(Meloidogyne spp.)是一类重要的植物病原线虫,给农业生产造成巨大的经济损失.其2龄幼虫侵入寄主根系,食道腺分泌物经口针注入植物细胞,从而刺激寄主植物形成巨型细胞并产生根结.根结线虫食道腺蛋白在线虫...
- 祝乐天陈晨陈芳妮张劲蔼孙思廖美德王新荣
- 关键词：南方根结线虫RNAIRT-PCR
- 根结线虫引起的植物根结形态与形成机理研究进展被引量：15
- 2010年
- 植物根结形态和根结内巨型细胞的数目以及大小由植物-根结线虫互作体系共同决定。通过比较常见的感染根结线虫的植物根结结构及其形成过程,可将根结分成单根结和重根结2种类型,并将根结线虫引起寄主植物形成根结的发展过程分为诱导、发展、成熟和衰败4个阶段。根结内含物成分与正常根尖细胞的内含物有较大的差异。植物细胞分裂周期基因、细胞有丝分裂激酶、细胞壁裂解酶基因以及水通道蛋白基因等与根结的结构及内含物密切相关。笔者以根结线虫引起的植物根结为线索,将过去的根结形态结构方面的研究成果与目前取得的分子生物学研究成果结合起来,对根结的形态及形成机理进行了评述。
- 王新荣马超任路路王磊
- 关键词：根结线虫内含物
- 雌根结线虫抑制其寄主免疫研究进展
- 根结线虫病的危害来自于重复侵染,雌根结线虫产卵是完成根结线虫重复侵染的必要条件.由于雌根结线虫寄生在植物体内,防治雌根结线虫一直是难题.根据植物免疫学理论,雌根结线虫必须持续抑制寄主免疫反应,才能成功寄生.抑制了雌根结线...
- 贾宁祝乐天陈晨孙思陈芳妮廖美德赵利锋王新荣
- 关键词：免疫
