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化学发光间接竞争ELISA检测伏马毒素B1方法的建立被引量：1: 2012年; 采用自制的抗伏马毒素B1(FB1)多克隆抗体,建立定量检测玉米中FB1的化学发光间接竞争ELISA方法。通过化学偶联分别获得免疫抗原钥孔血蓝蛋白(KLH)-FB1和包被抗原卵清蛋白(OVA)-FB1。用KLH-FB1免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。以OVA-FB1为包被抗原,FB1为竞争抗原,建立检测FB1的间接竞争化学发光ELISA方法,并对该方法进行了条件优化。该方法对FB1标品进行检测,得到回归方程为Y=0.602 5-0.370 7 X,相关系数R2为0.986 2,检测限为0.14ng/mL,线性关系良好的检测范围为0.14～33.3ng/mL,玉米样品加标回收率83.5%～102%。表明建立的化学发光ELISA法敏感性好、特异性高,能用于玉米中FB1毒素的检测。; 王君王元凯严亚贤

2种不同方法制备玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的ssDNA文库的比较被引量：2: 2013年; 体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选。通过对比不对称PCR法和生物素-链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链霉亲和素磁珠分离方法制备ssDNA为优选方法。ssDNA文库扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件为:退火温度50℃,循环数20次。不对称PCR退火温度为50℃,最佳循环数为30次,引物Ⅰ与引物Ⅱ的比例为80∶1。此反应条件下,ssDNA文库PCR扩增的条带清晰、稳定、特异性高。生物素-链霉亲和素磁珠法为有效筛选特异性强的玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的优选技术方案,为适配子SELEX筛选奠定基础。; 邹绮王元凯毛紫微杜斌王恒安孙建和严亚贤; 关键词：适配子 SELEX

伏马毒素B_1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA方法的建立被引量：15: 2011年; 采用戊二醛法将半抗原伏马毒素B1分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）和蛋白卵清白蛋白（OVA）偶联成为完全抗原KLH-FB1和OVA-FB1。OVA-FB1作为包被抗原建立ELISA方法;KLH-FB1作为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体。经三次亚克隆后,筛选出两株（6H3,6H11）能特异、稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。选择其中一株杂交瘤细胞通过体内诱生腹水的方法制备单克隆抗体,经检测表明单克隆抗体的亚型为IgG1,轻链为κ型。采用间接ELISA测得腹水纯化后效价达l∶16 000,抗体对伏马毒素的半数阻断浓度（IC50）为8.26 ng/mL,对玉米赤霉烯酮、黄曲霉素B1等结构类似物几乎不存在交叉反应,与其他结构的氯丙嗪、链霉素等无交叉反应。利用获得的抗FB1单克隆抗体,建立了间接竞争ELISA检测方法,检测灵敏度为0.44 ng/mL,检测线性范围为0.93~73.06 ng/mL,加标回收率在线性范围内达到回收率可达78.4%~102%。; 王雨晨王君王元凯严亚贤; 关键词：半抗原单克隆抗体间接竞争ELISA

真菌毒素的污染状况及毒性研究被引量：8: 2012年; 介绍了近期不同国家报道的真菌毒素污染状况,并对危害较大的几个主要真菌毒素的毒性进行分析,以此为我国真菌毒素的防控和毒性研究提供参考。; 陈志飞王元凯严亚贤李树清于翠杨翠云孙建和; 关键词：真菌毒素污染毒性

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：19: 2011年; 玉米赤霉烯酮具有较强的生物毒性,检测谷物中的玉米赤霉烯酮在食品和饲料安全中具有重要的作用。将玉米赤霉烯酮与牛血清白蛋白的偶联物免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,并建立基于单克隆抗体的酶联免疫法作为检测玉米赤霉烯酮的方法。结果共筛选到4株抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体,3株抗体亚类为IgG1,1株为IgG2b。选择其中的一株杂交瘤细胞2C9制备小鼠腹水,纯化后测定了抗体效价为1/40 000。以此单抗建立的间接竞争ELISA方法,其半数抑制率(IC50)为1.90 ng/mL,检测限(IC10)为0.051 ng/mL,检测区间(IC20-IC80)为0.115-13.900 ng/mL;且对玉米赤霉烯酮有很好的特异性。回收率检测在样品含1.46-93.80μg/kg时回收率为96.5%-113.0%。本实验建立的检测方法可用于多种谷物及饲料样本中玉米赤霉烯酮的检测。; 王元凯王君王雨晨陈志飞严亚贤郝倩雯李树清于翠杨翠云孙建和; 关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体酶联免疫法

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国家高技术研究发展计划(2007AA10Z424)