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湖北省自然科学基金(2003ABA193): 作品数：16 被引量：18H指数：2; 相关作者：陈珺徐少勇王家宁黄永章邓长生更多>>; 相关机构：郧阳医学院附属人民医院武汉大学郧阳医学院更多>>; 发文基金：湖北省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

人突变p27基因对大肠癌细胞生物学行为的影响被引量：1: 2007年; 目的:观察人突变p27基因(p27mt)对人大肠癌细胞生长的影响,探讨p27mt基因在大肠癌基因治疗中的作用及可能机制。方法:以携带突变p27基因复制缺陷型腺病毒(Ad-p27mt)为载体,转染大肠癌细胞SW480;Western blotting方法检测p27mt蛋白的表达;细胞计数法检测p27mt对SW480细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪检测细胞周期;用DNA片段分析法检测细胞凋亡。结果:Ad-p27mt转染SW480细胞后,p27在细胞中出现了蛋白高表达;77.96%的细胞阻滞于G0/G1期,而Ad-LacZ组及空白对照组分别为27.57%和25.29%;生长曲线显示Ad-p27mt对细胞生长有明显的抑制作用;DNA片段分析示p27mt基因可诱导细胞的凋亡。结论:p27mt对细胞周期有明显的阻滞作用,主要阻滞于G0/G1期;p27mt基因对细胞的生长抑制机制与诱导细胞凋亡和细胞周期的阻滞有关。; 陈珺徐少勇邓长生王家宁黄云章; 关键词：结直肠肿瘤细胞周期

人突变p27基因对大肠癌细胞SW480生长的影响: 2005年; 目的:观察人突变p27基因(p27mt)对人大肠癌细胞生长的影响,探讨p27mt基因在大肠癌基因治疗中的作用机制。方法:以携带突变p27基因复制缺陷型腺病毒(Ad-p27mt)为载体,转染大肠癌细胞SW480;用Westernblot方法检测p27mt蛋白的表达;细胞计数法检测p27mt对SW480细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪检测细胞周期;用DNA片段分析法检测细胞凋亡。结果:通过免疫印迹分析Ad-p27mt转染SW480细胞后,p27在细胞中出现了蛋白高表达。PI染色流式细胞仪检测77.96%的细胞阻滞于G0/G1期,而Ad-LacZ组及空白对照组分别为27.57%和25.29%;生长曲线显示Ad-p27mt对细胞生长就有明显的抑制作用;DNA片段分析示p27mt基因可诱导细胞的凋亡。结论:p27mt对细胞周期有明显的阻滞作用,主要阻滞于G0/G1期;p27mt基因对细胞的生长抑制机制与诱导细胞凋亡和细胞周期的阻滞有关。; 徐少勇陈珺邓长生王家宁黄永章; 关键词：大肠癌凋亡

Influence of human mutant p27 gene on the biological behaviors of colon cancer cells被引量：1: 2009年; 目的将在结肠癌细胞的生长和 apoptosis 上观察人的变异的 p27 基因(p27mt ) 的影响以便为结肠癌在基因治疗调查 p27mt 的功能机制。方法结肠癌房间线 SW480 感染 recombinant 复制有缺陷者侵入人体气管粘膜的病菌 Ad-p27mt，并且 p27mt 蛋白质的表示被西方的污点检测；SW480 房间上的 p27mt 的抑制效果与血细胞计数被检测。房间周期与流动血细胞计数器被决定，并且 DNA 碎裂分析过程识别了 apoptosis 的出现。在有 Ad-p27mt 的 transfected SW480 房间以后的结果， p27 蛋白质的高表示与免疫弄污被识别试金。染色的 PI 和流动血细胞计数器试金证明当在 Ad-LacZ 组和空白控制组时， 77.96% 结肠癌房间在阶段 G ₀/G₁, 被堵住， 27.57% 和 25.29% 房间分别地在一样的阶段被堵住。生长曲线证明 Ad-p27mt 在 SW480 房间的生长上有明显的抑制效果， DNA 碎片试金证明 p27mt 能导致结肠癌房间的 apoptosis。结论 p27mt 在结肠癌房间周期，和大多数房间上有明显的堵住效果在阶段 G ₀/G₁ 被堵住。这阻塞与生长抑制和 p27mt 的 apoptosis 正式就职效果被联系。; Jun ChenGuangxin LuBin WangWuhua Ding; 关键词：突变型 P27基因大肠癌生物学行为

人突变p27基因对大肠癌细胞凋亡的影响被引量：1: 2006年; 目的探讨人突变p27基因对大肠癌细胞凋亡的诱导作用。方法构建重组腺病毒Ad-p27mt,转染大肠癌细胞SW480,用流式细胞仪、DNA片段分析法、TUNEL法观察Ad-p27mt对大肠癌细胞的凋亡的诱导作用。结果成功构建了Ad-p27mt,在感染复数≥50时,可达100%的转导效率。Ad-p27mt转染SW480。24h后流式细胞仪检测在G1期前出现了亚二倍体凋亡峰,细胞DNA提取电泳后出现了凋亡特征性梯带,TUNEL法检测凋亡指数实验组和对照组分别为(82.0±3.2)和(5.0±3.5),差异有显著性(P<0.01)。结论人突变p27基因能有效诱导大肠癌细胞的凋亡。; 徐少勇陈珺熊玲王家宁黄永章; 关键词：大肠癌细胞凋亡

突变型p27基因治疗裸鼠大肠癌移植瘤的研究被引量：2: 2006年; 目的:研究外源性突变型p27(p27 m t)基因对大肠癌的体内抑制作用。方法:应用细胞移植法把人大肠癌SW 480细胞接种于BALB/c裸鼠皮下,构建大肠癌裸鼠模型,将腺病毒介导的突变型p27(Ad-p27 m t)及Lac-Z注射到瘤体内,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率,并进行细胞凋亡及MMP-9的相关检测。结果:Ad-p27 m t基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制,MMP-9的表达也明显较低,与Lac-Z、空白对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论:Ad-p27 m t基因对大肠癌裸鼠的体内肿瘤有明显的抑制作用,并能抑制MMP-9。; 杜勇徐少勇杨建业张丽陈珺王家宁黄永章; 关键词：腺病毒 P27 MT 裸鼠 MMP-9

突变型p27对大肠癌裸鼠模型肿瘤生长及转移的作用: 2006年; 目的研究外源性突变型p27(p27mt)基因对大肠癌体内抑制作用。方法以腺病毒为载体,采用细菌内同源重组方法制备Ad-p27mt,应用细胞移植法把人大肠癌SW480细胞接种于BALB/c裸鼠皮下,构建荷大肠癌裸鼠模型,将已成功构建的Ad-p27mt及Lac-Z采用瘤体内直接注射法注射到瘤体内,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率,进行细胞凋亡及MMP-9检测。结果Ad-p27mt基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制,有更强促凋亡作用,MMP-9表达明显降低,与Lac-Z、对照组比较,有显著性差异。结论Ad-p27mt基因对大肠癌肿瘤生长有明显抑制作用并能减少其转移。; 杜勇徐少勇杨建业张丽陈珺王家宁黄永章; 关键词：大肠癌腺病毒裸鼠模型

人突变p27重组腺病毒的构建及其在结肠癌细胞SW480中的表达: 2003年; 目的 :为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及突变 p2 7的抗肿瘤特性 ,构建复制缺陷型重组hp2 7mt基因腺病毒。方法 :hp2 7mt自载体pORF9-hp2 7mt中切出 ,经 2次亚克隆 ,插入到穿梭质粒 pShuttle -CMV中 ,形成转移质粒 pShuttle -CMV -hp2 7mt;然后再用PmeI线性化的 pShuttle -CMV -hp2 7mt转化含腺病毒骨架质粒 pAdeasy - 1的超感受态BJ5 183,使其在细菌内发生同源重组。重组质粒鉴定正确后经PacⅠ酶切 ,转入Ad2 93细胞 ,包装成重组腺病毒Ad -hp2 7mt。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定 ,用紫外分光光度计进行滴度测定。用重组 p2 7mt的腺病毒Ad - p2 7mt感染大肠癌细胞SW 4 80 ,WesternBlot检测p2 7蛋白的表达。结果 :用含pShuttle -CMV -hp2 7mt转化含 pAdeasy - 1的超感受态BJ5 183后 ,可获得约 30 %的阳性重组质粒。PCR检测表明重组腺病毒DNA中含有目的基因。重组腺病毒滴度为 7.95× 10 15pfu/L。转染大肠癌细胞后 ,p2 7在SW4 80中获得了高表达 ,而未转染细胞和Ad -LacZ转染的细胞中仅有低表达。结论 :腺病毒作为一种基因转移载体 ,可有效介导 p2 7在肿瘤细胞中的表达 ,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景。; 陈珺徐少勇邓长生王家宁黄永章; 关键词：重组腺病毒结肠癌细胞 SW480 细胞周期素 CDK

腺病毒介导的突变型p27对裸鼠大肠癌的抑制作用: 2005年; 目的:以腺病毒为载体,研究外源性突变型p27(p27mt)基因对大肠癌的体内抑制作用.方法:应用细胞移植法把人大肠癌SW480细胞接种于BALB/c裸鼠皮下,构建大肠癌裸鼠模型,将已成功构建的腺病毒介导的突变型p27(Adp27mt)及LacZ采用瘤体内直接注射法注射到瘤体内,与对照组比较,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率,并进行细胞凋亡的相关检测.结果:Adp27mt基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制,有明显的促凋亡作用,与LacZ、对照组比较,有显著性差异(P<0.01).结论:Adp27mt基因对大肠癌裸鼠模型的体内肿瘤有明显的抑制作用.; 杜勇徐少勇陈珺杨建业王家宁黄永章; 关键词：结直肠肿瘤

腺病毒介导的人突变p27基因转染对人大肠癌细胞系的作用被引量：2: 2004年; 目的　用人重组p2 7mt腺病毒感染大肠癌细胞株SW 480 ,研究p2 7mt对大肠癌细胞的抑制作用。方法　用重组腺病毒Ad -p2 7mt转染SW 480后 ,用Westernblot检测目的基因的表达 ;用流式细胞仪对转染细胞进行倍体分析 ,绘制生长曲线观察对细胞的生长抑制作用。结果　Ad -p2 7mt转染SW 480后 ,通过Westernblot分析发现p2 7在细胞中出现了高表达 ;PI染色流式细胞仪检测 ,77 9%的细胞阻滞于G0 /G1 期 ,而Ad -LacZ组及空白对照组分别为 2 5 5 7%和 2 5 2 9%(P <0 0 0 1) ;由生长曲线可以看出Ad -p2 7mt于 2 4h内对细胞就有明显的抑制作用 ( P<0 0 5 ) ,且持续时间长。结论　重组腺病毒能够有效转染p2 7mt基因进入SW480细胞内并获得了高表达 ;p2 7mt对细胞周期有明显的阻滞作用且对细胞的生长有明显的抑制作用。突变p2 7是一种细胞周期高效阻滞因子和高效生长抑制因子 ,为p2; 陈珺徐少勇邓长生王家宁黄永章; 关键词：腺病毒介导作用基因突变 P27基因转染大肠癌细胞系

人突变p27基因转染大肠癌细胞凋亡的实验研究被引量：2: 2005年; 目的:探讨人突变p27基因对大肠癌细胞凋亡的诱导作用。方法:构建重组腺病毒Ad-p27mt,转染大肠癌细胞SW480,用流式细胞仪、DNA片段分析法、TUNEL法观察Ad-p27mt对大肠癌细胞凋亡的诱导作用。结果:成功构建了Ad-p27mt,在感染复数≥50时,可达100%的转导效率。Ad-p27mt转染SW48024h后流式细胞仪检测在G1期前出现了亚二倍体凋亡峰,细胞DNA提取电泳后出现了凋亡特征性梯带,TUNEL法检测凋亡指数实验组和对照组分别为82·6±3·2和5·0±3·5,差异显著(P<0·01)。结论:人突变p27基因能有效诱导大肠癌细胞的凋亡。; 陈珺徐少勇熊玲王家宁黄永章; 关键词：结直肠肿瘤细胞凋亡

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