江苏省高校自然科学研究项目(08KJD180003)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：朱爱华吕爱军郑元林金亮刘景晶更多>>
- 相关机构：徐州师范大学中国药科大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠HSP60基因的克隆与表达条件的优化
- 2011年
- 目的:克隆小鼠热休克蛋白60(HSP60)基因,在大肠杆菌中表达,并进一步对其表达条件进行优化。方法:采用RT-PCR技术克隆出非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠HSP60的cDNA序列。构建重组表达载体pET28a-HSP60,以其转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),在不同的菌体浓度、不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、不同诱导时间以及不同温度条件下诱导,检测重组蛋白的表达情况。结果:获得一个含有1 721bp的cDNA的片段,重组蛋白HSP60在E.coli BL-21(DE3)中的最佳表达条件是菌体密度A600nm为0.6,诱导时间为5h,诱导物(IPTG)浓度为4mmol/L,诱导温度为35℃,重组蛋白大小约为60kD。结论:成功克隆了小鼠HSP60基因,并在大肠杆菌中获得高效表达,为重组蛋白的分离纯化及进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 朱爱华夏文静黄赛男季卫丹吕爱军
- 关键词：热休克蛋白60克隆大肠杆菌
- 重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:研究重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫途径对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响。方法:通过PCR方法克隆出结核分枝杆菌的热休克蛋白65的基因序列,构建了pET28a-HSP65高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达,利用阴离子交换柱层析分离纯化。在不添加佐剂的情况下以纯化的HSP65通过3次鼻黏膜免疫非肥胖型1型糖尿病模型动物(NOD)小鼠,每月采集小鼠的血清,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测血清中抗体的产生,利用自动生化分析仪检测血糖浓度。结果:通过鼻黏膜免疫途径可成功诱导小鼠产生特异的抗HSP65抗体,组织病理学分析也显示HSP65通过鼻黏膜免疫能降低NOD小鼠胰腺病变的产生。结论:HSP65通过鼻黏膜免疫能预防NOD小鼠糖尿病的发生,证实了HSP65经鼻黏膜免疫能降低和自身免疫性糖尿病有关的炎症过程的严重性,对1型糖尿病的治疗提供了一个新的途径。
- 朱爱华金亮刘景晶刘美艳吕爱军郑元林
- 关键词：热休克蛋白鼻内胰腺炎
