国家科技攻关计划(413010209)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：刘金玲魏澍潘树德李晓辉何建斌更多>>
- 相关机构：沈阳农业大学辽宁省动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 高致病性猪蓝耳病病毒GST-N融合蛋白的原核表达及纯化
- 2010年
- 为了构建高致病性猪蓝耳病病毒(HPPRRSV)GST-N融合蛋白,试验采用RT-PCR技术扩增ORF7基因片段,对其胶回收产物进行测序分析,再将目的片段连接到质粒PGEX-6P-1上,得到重组质粒PGEX-6P-1-N,并转化到E.coliBL21(DE3)感受态细胞中,筛选阳性菌落,并用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行检测与鉴定。结果表明:该序列与GenBank公布的HN2007的同源性为97%;重组质粒在大肠杆菌中获得了表达,表达产物为42ku的GST-N融合蛋白。
- 李晓辉何建斌刘金玲罗芳
- 关键词：ORF7基因原核表达
- 高致病性猪蓝耳病病毒GST-Nsp2融合蛋白的原核表达被引量：1
- 2012年
- 通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HPPRRSV)Nsp2基因进行克隆表达以获得蛋白,为该病的诊断预防奠定基础。采用自行设计的引物对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒进行RT-PCR扩增,将产物基因回收纯化测序后构建PGEX-6P-1-Nsp2原核表达载体,用BL21(DE3)细胞进行转化,挑选阳性菌,用IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE电泳和Western-Blot对表达产物进行鉴定。获得了HPPRRSV Nsp2基因序列,成功构建了PGEX-6P-1-Nsp2原核表达载体,经37℃,4 h获得表达产物,将表达产物进行SDS-PAGE和Western-Blot分析,获得了一条约42 ku浓缩蛋白带。本实验的克隆表达产物为高致病性蓝耳病病毒Nsp2目的蛋白。
- 刘金玲魏澍潘树德
- 关键词：高致病性NSP2基因原核表达
- 辽宁地区高致病性蓝耳病病毒N基因的克隆及序列分析
- 2010年
- 从辽宁的本溪、沈阳、抚顺、鞍山等地采集疑似高致病性蓝耳病病料,将采集的肺和淋巴结分别研磨,离心并制备成病毒悬液,用试剂提取RNA,将提取出的RNA反转录成cDNA,然后用特异性引物对目的片段进行克隆扩增,最后将所得目的片段测序并与国内其他分离株进行序列分析。结果获得480bp特异性高致病性蓝耳病病毒N基因片段,与国内其他地区高致病性蓝耳病病毒分离株的N基因相比较,核苷酸序列同源性在91.1%以上,氨基酸序列同源性在98.6%以上,表明高致病性蓝耳病病毒辽宁地区分离株与国内其它分离株亲源关系较近,属于同一分支。
- 刘金玲魏澍支海兵
- 关键词：N基因克隆
