江苏省卫生厅科研基金(H200336)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：徐建尹全章许文嵘周锋陈云更多>>
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- 发文基金：江苏省卫生厅科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EB病毒潜伏膜蛋白2A抗原表位的融合表达及其意义被引量：2
- 2008年
- 为了探讨含有EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)抗原表位片断表达的融合蛋白在鼻咽癌血清学检测中的应用意义,通过重叠延伸PCR方法,合成了3对相互重叠的寡核苷酸引物,涵盖LMP2A的主要的4个抗原表位,将它们拼接在一起构建一个多肽融合基因,克隆到PGEX-4T-2载体中表达融合蛋白,以GST亲和层析柱法纯化融合蛋白,鉴定后以此为抗原检测鼻咽癌患者的血清。结果表明,获得了含EB病毒LMP2A主要的4个抗原表位的融合蛋白(EC2A),蛋白纯度达90%以上,ELISA结果显示鼻咽癌患者血清的检出率为77.9%,正常人群血清为阴性,与常规的VCA-IgA法进行比较,有9份(13.3%)血清VCA-IgA为阴性而EC2A-IgG检出阳性,为鼻咽癌的临床检测提供了新思路,也为后续的单克隆抗体制备奠定了基础。
- 陈云姚堃许文嵘周锋徐建尹全章谢芳艺
- 关键词：EB病毒LMP2A重叠PCR表位
- EB病毒潜伏膜蛋白2A胞外区重组基因在大肠杆菌中的表达及其在血清学检测中的应用被引量：1
- 2007年
- 目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)胞外区重组基因的表达载体在大肠杆菌中表达,并将表达的蛋白用于EB病毒相关鼻咽癌(NPC)患者的血清学检测。方法:用BamHⅠ和EcoRⅠ将含LMP2A胞外区重组基因的质粒pEC2A双酶切后,克隆到pET32a中。重组质粒经PCR、酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌(E.coli)BL21,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用Western blot法检测其抗原活性。用纯化的蛋白进行鼻咽癌患者血清学检测。结果:重组表达质粒经PCR及酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot结果显示表达的重组蛋白分子质量约为40ku。以此为抗原能在鼻咽癌患者血清中检测到特异性的抗体。结论:成功获得了LMP2A胞外区重组基因表达的蛋白,纯化的蛋白可用于EBV相关鼻咽癌患者的血清学检测。
- 许文嵘姚堃陈云尹全章徐建周锋
- 关键词：EB病毒LMP2A重组基因血清学检测
