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福建省自然科学基金(B0120001)

作品数：9 被引量：77H指数：6
相关作者：林琳施巧琴吴松刚吴祥甫谢联辉更多>>
相关机构：福建师范大学福建农林大学中国科学院上海生命科学研究院更多>>
发文基金：福建省自然科学基金国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>

文献类型

  • 9篇期刊文章
  • 2篇会议论文

领域

  • 9篇生物学
  • 2篇化学工程
  • 1篇轻工技术与工...

主题

  • 11篇脂肪酶
  • 8篇碱性脂肪酶
  • 6篇扩展青霉
  • 6篇扩展青霉碱性...
  • 3篇叠加突变
  • 3篇热稳定
  • 3篇热稳定性
  • 3篇扩展青霉脂肪...
  • 3篇基因
  • 2篇启动子
  • 2篇最适作用温度
  • 2篇克隆
  • 2篇克隆及序列分...
  • 2篇基因克隆
  • 1篇蛋白质纯化
  • 1篇蛋白质工程
  • 1篇点突变
  • 1篇定点突变
  • 1篇脂肪酶基因
  • 1篇质粒

机构

  • 11篇福建师范大学
  • 3篇福建农林大学
  • 3篇中国科学院上...
  • 1篇厦门大学

作者

  • 10篇林琳
  • 4篇吴松刚
  • 4篇施巧琴
  • 3篇谢联辉
  • 3篇吴祥甫
  • 3篇谢必峰
  • 3篇王彩梅
  • 3篇蔡少丽
  • 2篇杨冠珍
  • 2篇黄建忠
  • 2篇江贤章
  • 2篇林奇英
  • 1篇张娟梅
  • 1篇陈国仁
  • 1篇黄平
  • 1篇林俊涵
  • 1篇吴义真
  • 1篇杨月梅
  • 1篇舒正玉
  • 1篇柯崇榕

传媒

  • 2篇中国生物化学...
  • 2篇生物工程学报
  • 1篇生物技术通讯
  • 1篇工业微生物
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇微生物学通报
  • 1篇厦门大学学报...
  • 1篇华东六省一市...

年份

  • 1篇2008
  • 3篇2007
  • 1篇2006
  • 2篇2005
  • 2篇2003
  • 2篇2002
共 9 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
扩展青霉脂肪酶ep8与R182K叠加突变体的构建被引量：3
2007年
利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,并将含突变基因的重组质粒pAO815-ep8-R182K在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中进行表达。叠加突变体PEL-ep8-R182K表达产物与野生型PEL、PEL-ep8比较实验表明:叠加突变体表达蛋白PEL-ep8-R182K最适反应温度与野生型PEL、PEL-ep8一致,均为40℃;热稳定性与野生型相似,比PEL-ep8降低2.25℃。但是,在比活上,PEL-ep8-R182K与PEL-ep8、野生型PEL相比,其比酶活分别提高了14.03%和3.86%。
王彩梅蔡少丽吴义真林琳
关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变最适温度热稳定性
扩展青霉碱性脂肪酶的纯化及N-端氨基酸序列分析被引量：4
2002年
扩展青霉PF898的发酵液经硫酸铵沉淀、DE5 2纤维素离子交换柱、SephadexG 10 0凝胶过滤等步骤 ,其碱性脂肪酶的活性被纯化了 79.3倍 ,回收率约 15 % ,比活为 76 .9U/mg .纯化蛋白经SDS PAGE和HPLCTSK GELG30 0 0SW凝胶过滤分析显示其分子量约为 2 8kDa .纯化蛋白经氨基酸序列测定仪分析表明 ,其N 端 12个氨基酸的序列为 :A T A D A A A F P D L H .
林琳施巧琴郭小玲吴松刚吴祥甫谢联辉
关键词：扩展青霉碱性脂肪酶蛋白质纯化水解酶酶活性
D92P点突变对扩展青霉碱性脂肪酶最适作用温度的改善被引量：7
2005年
利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,并构建了含突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-D92P。将该质粒在毕赤酵母GS115菌株中表达。与野生型表达产物PEL-GS相比较,突变体表达产物PEL-D92P-GS最适作用温度为45℃,比野生型提高了5℃;其热稳定性与野生型相当;突变体在40℃下的表达量为109U/mL,约为野生型的29%。结果分析表明,Pro替代Asp92后,可能是由于Pro一级结构的特点,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合。
陈木妹林琳
关键词：扩展青霉碱性脂肪酶最适作用温度重叠延伸PCR法蛋白质工程
E83V对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的影响被引量：6
2005年
利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因作了体外定点突变,获得了最适作用温度有所提高的突变体。含突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-E83V在PichiapastorisGS115中表达。对突变体表达产物PEL-E83V-GS与野生型表达产物PELGS作了比较:前者最适作用温度为45℃,比野生型提高了5℃;其热稳定性基本不变;突变体在37℃下的表达量为188U/mL,约为野生型的80%。最适作用温度的提高可能是由于83位亲水性的Glu用疏水性的Val取代,增加了脂肪酶表面的疏水作用,使其在高温下更适于与底物的结合。
陈国仁林琳
关键词：扩展青霉碱性脂肪酶定点突变最适作用温度
K55R与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善被引量：9
2007年
利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。实验结果表明:该叠加突变体在毕赤酵母中获得了活性表达,得到表达产物脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS。其表达量为508u/mL,分别约为野生型脂肪酶PEL-GS(627u/mL)的81%,随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS(924u/mL)的55%;其比活力为2309.1u/mg,与随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS和野生型脂肪酶PEL-GS的相仿。叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的最适作用温度为37℃,与野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS一致;其Tm值为41.0℃,比野生型脂肪酶PEL-GS提高了2.3℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS提高了0.8℃。表明叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的热稳定性有了进一步的提高。
蔡少丽林俊涵王彩梅林琳
关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性
扩展青霉碱性脂肪酶基因5’端侧翼区域的克隆与鉴定被引量：3
2007年
应用衔接头PCR技术,扩增得到约2000 bp的扩展青霉碱性脂肪酶基因5’端侧翼区域的单一产物。对该产物测序并提交GenBank数据库(GenBank accession DQ677520),经序列比对分析,发现该序列具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、GC盒等元件。将扩增得到的脂肪酶基因5’端侧翼序列,连接到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒中,构建了一个重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞。荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认。
杨月梅江贤章张娟梅谢必峰杨欣伟林琳黄建忠
关键词：扩展青霉脂肪酶启动子GFP
K55R与ep8叠加突变对扩展青霉碱性脂肪酶热稳定性的改善
利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机诱变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化毕赤酵母GS115进行表达。结果表明:该叠加突变体在...
蔡少丽王彩梅邹有土黄平林琳
关键词：扩展青霉碱性脂肪酶叠加突变热稳定性
文献传递
扩展青霉PF898碱性脂肪酶cDNA的克隆及序列分析被引量：36
2002年
扩展青霉 (Penicilliumexpansum)PF898可产生一种具有工业价值的碱性脂肪酶 (PEL) .在测定了其N端 12个氨基酸残基序列的基础上 ,通过RT PCR、5′RACE、基因克隆及序列测定 ,获得了PEL完整的cDNA序列 (GenBank登录号为AF2 84 0 6 4 ) .cDNA全长 10 5 0bp ,包括PEL编码区、3′非翻译区和部分 5′非翻译区基因的序列 .编码区cDNA由 85 5个碱基组成 ,编码 1个由 2 85个氨基酸残基组成的酶蛋白 ,其信号肽及前肽部分由 2 7个氨基酸残基组成 ,成熟肽部分由 2 5 8个氨基酸残基组成 .根据氨基酸组成推导该脂肪酶蛋白的分子量为 2 7 3kD .该脂肪酶的氨基酸序列 130～ 134位上有各类脂肪酶中普遍存在的G X S X
林琳谢必峰杨冠珍施巧琴林奇英谢联辉吴祥甫吴松刚
关键词：扩展青霉碱性脂肪酶基因克隆
扩展青霉PF898碱性脂肪酶基因组DNA的克隆及序列分析被引量：29
2003年
扩展青霉 (Penicilliumexpansum)PF898可产生一种具有重要工业生产价值的碱性脂肪酶(PEL) .在通过 3′RACE和 5′RACE获得PEL完整的cDNA序列的基础上 ,通过PCR方法首次克隆了该脂肪酶的完整的基因组DNA序列 (GenBank登录号为AF330 6 35 ) .该脂肪酶DNA全长 14 0 4bp ,包括PEL编码区、3′非翻译区和部分 5′非翻译区基因的序列 .编码区DNA由 1135个碱基组成 ,含有 5个内含子 ,大小分别为 5 8bp、4 7bp、5 0bp、5 6bp和 6 9bp .在已报道的丝状真菌脂肪酶中 ,PEL基因的内含子数量最多 ,而其大小与其它丝状真菌脂肪酶基因的内含子一样 ,均为只有几十个碱基的小内含子 .PCR扩增获得的PLEDNA序列还包括由 195个碱基组成的 3′端非编码区序列 ,74个碱基的部分 5′端非编码区序列 .PELDNA全长序列中的 - 2 4至 - 2 7nt为TATAbox ,终止码TGA下游15 6nt出现AATAAA序列 ,TGA下游 182位出现poly(A)尾 ,为典型的真核基因结构 .同源性序列分析表明 ,PEL与其它真菌来源脂肪酶的基因组DNA序列同源性约为 39%～ 4 9% ,PEL内含子之间或PEL内含子与其它丝状真菌脂肪酶基因的内含子之间的序列同源性约 4 2 %～ 5 7% .
林琳谢必峰杨冠珍施巧琴林奇英谢联辉吴松刚吴祥甫
关键词：扩展青霉碱性脂肪酶基因克隆基因组DNA
扩展青霉碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达被引量：39
2003年
将编码扩展青霉碱性脂肪酶 (PEL)的cDNA克隆到酵母整合型质粒pPIC3.5K ,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115 ,通过橄榄油 MM平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDS PAGE分析、橄榄油检验板鉴定 ,表明扩展青霉碱性脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中获得了高效表达。表达蛋白分泌至培养基中 ,分子量约 2 8kD ,与扩展青霉碱性脂肪酶大小一致 ,占分泌蛋白的 95 %。橄榄油检验板检验表明该表达蛋白可分解橄榄油 ,通过优化该表达菌的发酵条件 ,以橄榄油为底物进行酶活测定 ,其发酵液酶活可达 2 6 0u mL。
袁彩林琳施巧琴吴松刚
关键词：扩展青霉碱性脂肪酶巴斯德毕赤酵母基因表达质粒
全选 清除 导出
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