湖北省科技攻关计划(2002AA301C38)
- 作品数：4 被引量：23H指数：3
- 相关作者：汪道文周炼红邢怡桥胡燕华陈春莲更多>>
- 相关机构：华中科技大学武汉大学更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血管内皮生长因子反义核苷酸抑制大鼠角膜新生血管的实验研究被引量：12
- 2006年
- 目的探讨重组腺相关病毒介导的血管内皮生长因子反义核苷酸(rAAV aVEGF165)抑制大鼠角膜新生血管(CNV)发生与发展的作用。方法三质粒共转染法构建rAAV aVEGF165和重组腺相关病毒介导的β半乳糖苷酶的结构基因(rAAV Lacz)。48只SD大鼠用抽签法随机分成实验组和对照组,每组24只,碱烧伤方法诱导CNV生成。实验组结膜囊注射rAAV aVEGF165(1010pfu/ml),对照组结膜囊注射rAAV Lacz(1010pfu/ml);5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷(X gal)组织化学染色,检测Lacz基因在结膜囊中的表达情况;碱烧伤后1、2、4、7、14及30d,形态学分析评价角膜新生血管的生长情况,免疫组织化学检测角膜组织中VEGF的表达。结果对照组rAAV Lacz结膜囊注射2d后,检测Lacz基因在结膜组织中的表达效率为21.36%±1.07%;30d后Lacz基因在结膜下组织中的表达效率为28.02%±1.16%。碱烧伤后结膜囊注射rAAV aVEGF165,实验组CNV面积明显减少,新生血管密度降低,VEGF在角膜组织中的表达明显降低,差异有统计学意义(F=1639.22,F=2187.16,F=719.17,P<0.01)。结论rAAV aVEGF165能显著抑制碱烧伤后CNV的形成,其机制与降低角膜组织中VEGF的表达有关,重组腺相关病毒是眼反义基因治疗的有效载体。
- 周炼红邢怡桥陈春莲汪道文
- 关键词：依赖病毒血管内皮生长因子A角膜新生血管化基因疗法
- 碱烧伤后抑制角膜新生血管的实验研究——血管内皮生长因子165反义RNA的作用被引量：4
- 2004年
- 目的 研究重组腺相关病毒介导的血管内皮生长因子 165反义RNA(rAAN_aVEGF165)抑制碱烧伤后角膜新生血管的作用。方法 3 0只SD大鼠随机分成 2组 ,每组 15只。实验组前房注射rAAV_aVEGF165,对照组前房注射rAAV_Lacz。 3 0天后 ,碱烧伤诱导角膜新生血管 ,以形态学分析评价角膜新生血管的情况 ,Westernblot评价角膜VEGF的表达。结果 形态学分析显示实验组角膜新生血管得到抑制 ,Westernblot结果显示 ,碱烧伤后各个时期角膜VEGF165的表达实验组明显低于对照组。结论 下调VEGF能有效抑制角膜新生血管的形成 ,重组腺相关病毒是眼反义基因治疗的有效载体。
- 周炼红胡燕华徐惠民汪道文
- 关键词：碱烧伤角膜新生血管血管内皮生长因子
- 炎症增强报告基因在角膜内皮的表达
- 2005年
- 目的研究脂多糖(LPS)诱发的眼内炎症反应能否增强腺相关病毒介导的报告基因在角膜内皮的表达。方法20只SD大鼠前房注射rAAVLacz(1010个病毒颗粒/ml),28d后,取10只大鼠的玻璃体腔注射脂多糖溶液诱发眼内炎症,另10只玻璃体腔注射PBS作为对照,2d后,取角膜行5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷(Xgal)组织化学染色,评价报告基因的表达情况;Westernblot检测核因子κB(NFκB)蛋白的表达。结果Xgal组织化学染色证实,报告基因可以在角膜内皮、角膜基质和虹膜细胞表达,玻璃体腔注射LPS2d后,眼内炎症反应达高峰,此时角膜内皮细胞表现出明显的Lacz基因的表达;Westernblot亦证实,角膜组织NFκB蛋白表达与炎症反应成正比。结论rAAV载体能有效携载目的基因到角膜内皮细胞,并且目的基因的表达在炎症情况下明显增强。
- 周炼红胡燕华徐惠明汪道文
- 关键词：重组腺相关病毒角膜内皮报告基因眼内炎症
- 重组腺相关病毒介导的报告基因在角膜内皮细胞中的表达被引量：8
- 2006年
- 目的研究重组腺相关病毒(rAAV)能否介导报告基因(Lacz)转移至大鼠的角膜内皮细胞;以及眼内炎症反应能否增强报告基因在大鼠角膜内皮细胞的表达。方法20只SD大鼠前房注射rAAV-Lacz(109Pfu),28d后,随机抽取10只SD大鼠为实验组,玻璃体腔注射脂多糖溶液(LPS)诱发眼内炎症;对照组(10只)玻璃体腔注射PBS溶液。2d后,分别取两组大鼠的角膜行5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)组织化学染色,评价报告基因的表达情况。结果X-gal组织化学染色证实,经前房注射,报告基因可以在角膜内皮细胞表达,对照组表达效率为5.12%±0.03%;玻璃体腔注射LPS溶液2d后,眼内出现明显的炎症反应,此时报告基因在角膜内皮细胞的表达效率为46.03%±2.12%,较对照组明显增强,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论rAAV载体能有效携载目的基因至角膜内皮细胞,炎症可增强rAAV载体介导的报告基因在角膜内皮的表达。
- 周炼红邢怡桥叶美洪汪道文
- 关键词：重组腺相关病毒角膜内皮报告基因
