广东省中医药管理局基金(402003)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
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- 应用抑制性差减杂交技术构建铁皮石斛差减cDNA文库的探讨被引量：5
- 2005年
- [目的]探讨构建铁皮石斛抑制差减文库的方法,为克隆石斛碱生物合成相关功能基因奠定基础。[方法]采用抑制性差减杂交(SSH)技术,分别以4年生和1年生铁皮石斛叶片互补脱氧核糖核酸(cDNA)作为检测子(tester)与驱赶子(driver),将所获得差减cDNA片段克隆入质粒表达载体(PointTMXa-1T-Vector),转化大肠杆菌JM109,聚合酶链反应(PCR)扩增鉴定插入片段。[结果]成功地构建了与石斛碱生物合成相关的差减cDNA文库,获得的正、反向差减文库分别含560、220个重组子;插入片段的平均大小为550bp。[结论]所构建的差减cDNA文库适合进一步克隆分析石斛碱相关功能基因研究。
- 魏小勇
- 关键词：差减CDNA文库抑制性差减杂交铁皮石斛
- 铁皮石斛互补脱氧核糖核酸表达文库的构建及分析被引量：1
- 2006年
- 构建铁皮石斛互补脱氧核糖核酸(cDNA)表达文库,为克隆石斛活性成分生物合成相关功能基因的全长奠定基础。【方法】以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛中提取总RNA,分离纯化mRNA,LD-PCR(long distance polymerase chain reaction)法反转录合成双链cDNA,以λTripIEX2为载体,构建铁皮石斛cDNA文库,文库滴度以每mL含噬菌斑形成单位 (pfu)的数目来表示,PCR扩增鉴定插入片段。【结果】成功地构建了铁皮石斛cDNA表达文库,原始文库的噬菌斑滴度为 4．3×105pfu/mL,总克隆数为3．1×105,重组率为97．6％,扩增后文库总滴度为6．8×109 pfu／mL,对随机挑取的噬菌斑进行 PCR鉴定,结果插入片段多分布在0．5～2．0kb之间,绝大部分在1．2～1．7 kb左右。【结论】文库质量鉴定结果表明,所构建的铁皮石斛cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。
- 魏小勇
- 关键词：基因文库
- 组织芯片联合基因芯片在肿瘤研究中的应用
- 组织芯片是指固定在载玻片上的组织微点阵,可同时进行分析大量同一实验指标(DNA、RNA及蛋白质)的研究;基因芯片是指固相载体上的高密度DNA微点阵,可检测异常组织与正常组织差异表达基因。组织芯片与基因芯片配合使用在寻找肿...
- 魏小勇罗灼玲李彩霞
- 文献传递
