陕西省自然科学基金(2007C259)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：解放军第451医院第四军医大学西京医院更多>>
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- 嵌合锚定T淋巴细胞对肝癌细胞增殖的阻滞效应
- 2011年
- 目的探讨肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)靶向性嵌合锚定T淋巴细胞的制备方法,并检测它对TAG72阳性肝癌细胞增殖的阻滞效应。方法分离外周血单核细胞(PBMC),然后用免疫磁珠法分离得到CD8+T淋巴细胞。将重组真核表达载体anti-TAG72-scFv-CD28-pcDNA3.0采用脂质体介导的细胞转染和细胞培养,以制备TAG72靶向性的嵌合锚定T淋巴细胞;将嵌合锚定T淋巴细胞与TAG72阳性肝癌细胞SMMC7721共培养,通过流式细胞仪检测肝癌细胞的周期变化,分析嵌合锚定T淋巴细胞对肝癌细胞增殖的抑制效应。结果 TAG72靶向性嵌合锚定T淋巴细胞可识别肝癌细胞SMMC7721;用流式细胞仪检测发现,嵌合锚定T淋巴细胞可引起肝癌细胞SMMC7721的增殖阻滞。结论 TAG72靶向性嵌合锚定T淋巴细胞可特异性识别TAG72阳性肝癌细胞SMMC7721并引起其增殖阻滞。
- 徐宏勇徐立李开宗
- 关键词：肝癌T淋巴细胞
- 嵌合锚定融合分子在T淋巴细胞的荧光表达及检测被引量：1
- 2010年
- 目的构建含有由抗肿瘤相关糖蛋白72(anti-TAG72)单链抗体片段(single chain variable fragment,scFv)及CD28胞内区及跨膜区的融合基因anti-TAG72 scFv-CD28的重组绿色荧光表达载体pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28,并转染获得嵌合锚定T淋巴细胞。方法将anti-TAG72单链抗体及CD28胞内区及跨膜区基因的嵌合锚定融合分子克隆入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C3,获得pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28表达载体。用卡那霉素筛选阳性克隆,经酶切和测序鉴定。将上述重组质粒pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28以脂质体法瞬时转染外周血单核细胞(PBMC),以获得嵌合锚定T淋巴细胞,用荧光显微镜检测嵌合分子anti-TAG72 scFv-CD28在PBMC中的表达,并检验嵌合锚定融合分子anti-TAG72 scFv-CD28的表达。结果重组绿色荧光表达载体pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28中anti-TAG72 scFv-CD28片段为1 002 bp,与已知的序列相符。酶切、测序结果表明,嵌合锚定融合分子基因片段anti-TAG72 scFv-CD28被正确插入pEGFP-C3载体;转染后anti-TAG72 scFv-CD28片段及绿色荧光物质表达于嵌合锚定T淋巴细胞胞膜表面及胞浆中,为绿色荧光显色。结论完成了绿色荧光表达载体pEGFP-C3-anti-TAG72 scFv-CD28的构建,并成功在PBMC瞬时表达。
- 徐宏勇徐立李开宗窦科峰
- 关键词：CD28转染
- 肿瘤相关糖蛋白-72嵌合锚定T细胞对肝癌的抑癌效应被引量：3
- 2014年
- 目的制备肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)嵌合锚定T细胞,体内外实验检测其对肝癌的抑癌活性。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),采用脂质体lipofectamineTM2000介导的细胞转染,将已制备的重组真核表达载体抗TAG-72 scFv-CD3ζ-pcDNA3.0导入PBMC,获得肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)嵌合锚定T细胞,以此为实验组治疗细胞;用SDS-PAGE检测TAG-72嵌合锚定T细胞中抗TAG-72 scFv-CD3ζ嵌合分子的表达,并用Western blotting证实。用转染空载体pcDNA3.0的PBMC作为对照组治疗细胞。将实验组及对照组的治疗细胞分别经尾静脉注射治疗荷TAG-72+肝癌细胞HepG2、荷TAG-72-肝癌细胞BEL7402裸鼠动物模型,观察对裸鼠的抑癌效应。结果 SDS-PAGE检测TAG-72嵌合锚定T细胞嵌合分子抗TAG-72 scFv-CD3ζ的表达,显示大小为47 kDa的融合蛋白片段,与抗TAG-72 scFv-CD3ζ的理论值相符;Western blotting证实该片段CD3呈阳性表达。TAG-72嵌合锚定T细胞与肝癌细胞HepG2共培养后可对后者产生G1期阻滞。用TAG-72嵌合锚定T细胞经尾静脉注射治疗荷瘤裸鼠,发现实验组细胞对荷HepG2细胞裸鼠存活时间、体质量、肿瘤包块大小等方面疗效优于荷BEL7402细胞裸鼠的疗效,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAG-72嵌合锚定T细胞可特异性抑制荷TAG-72+肝癌细胞裸鼠的肝癌细胞生长;该治疗策略将为肝癌的临床诊治提供一种有希望的途径。
- 徐宏勇徐立李开宗
- 关键词：肝癌T细胞
- 抗TAG-72抗原单链抗体的原核表达及对人肝癌的检测被引量：2
- 2010年
- 目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)单链抗体的原核表达及与4种肝癌细胞系和肝癌组织的特异性亲和力。方法将抗TAG-72单链抗体的cDNA片段插入噬菌粒载体pCANTAB5E,获得噬菌粒载体TAG-72-scFv-pCANTAB5E。将后者转化入E.coliHB2151,经β,D异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得抗TAG-72单链抗体蛋白。采用细胞培养及免疫细胞/组织化学方法 ,检测4种肝癌细胞系及石蜡包埋的肝癌组织中TAG-72抗原的表达。结果 SDS-PAGE及Western blot法证实,抗TAG-72单链抗体蛋白分子得以正确表达。抗TAG-72单链抗体可与肝癌细胞系SMMC7721、HepG2和HHCC结合,表明这3种细胞表达了特异性肿瘤抗原;抗TAG-72单链抗体不能结合BEL7402细胞。40例肝癌组织中TAG-72抗原表达阳性率Ⅰ期、Ⅱ～Ⅲ期分别为23.08%(3/13)和62.96%(17/27),在正常肝组织标本中无TAG-72抗原表达,TAG-72抗原在正常肝组织及肝癌组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAG-72抗原在肝癌细胞或肝癌组织中有特异性表达,有可能成为判断肝癌的标志物。
- 徐宏勇徐立李开宗窦科峰
- 关键词：肝细胞癌单链抗体原核表达
- 一种新型胃肠道癌特异性单链抗体的表达及其在胃癌中的检测被引量：1
- 2011年
- 目的通过原核可溶性表达将我们制备的抗胃肠道肿瘤特异性单链抗体(single chain antibody variable fragment,scFv)基因表达出单链抗体蛋白,初步鉴定并检测其在几种胃癌细胞中的表达。方法通过基因原核表达、Western blot、ELISA等方法检测单链抗体的表达;通过免疫细胞化学方法检测其对几种胃癌细胞的肿瘤相关抗原的识别。结果 获得的单链抗体分子量31 KD,与理论分子量基本一致,并通过Western blot、ELISA加以证实;免疫细胞化学方法证明该单链抗体可识别胃癌细胞KATOⅢ、HGC-27、肝癌细胞SMMC7721等细胞,不能识别SGC7901。结论通过对单链抗体的原核表达,明确了单链抗体对胃癌细胞的识别能力,为进一步临床应用提供理论基础。
- 徐宏勇徐立李开宗
- 关键词：胃肠道癌单链抗体基因表达
