国家科技重大专项(2012ZX09103-301-008)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：段相国杨华李小康徐广贤郭乐更多>>
- 相关机构：中国药科大学宁夏医科大学更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- rCtUBE的生物信息学分析及其表达优化(英文)
- 2013年
- 目的:幽门螺旋杆菌(Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌的重要致病因子。研发基于Hp尿素酶的表位疫苗是一种很有前景的防治Hp感染的策略。方法:通过生物信息学软件对位于Hp尿素酶酶活性中心的表位肽F8和霍乱毒素B亚基(CTB)的连接顺序和间隔序列加以分析,设计出一种Hp表位疫苗rCtUBE。通过基因克隆技术构建含有融合基因rCtUBE的重组表达载体pETCUB及其重组菌株;重组菌株经蛋白表达和优化后,利用Ni-NTP镍离子亲和层析和DEAE Sepharose FF阴离子交换层析纯化融合蛋白rCtUBE,并进一步通过腹腔注射免疫BALB/c小鼠,鉴定Hp表位疫苗rCtUBE的免疫学活性。结果:经生物信息学软件分析,Hp表位疫苗rCtUBE具有科学合理的结构,并成功构建了重组表达载体pETCUB及其重组菌株BL21(DE3)/pETCUB,经蛋白表达优化及纯化,可获得高纯度(95.3%)的融合蛋白rCtUBE。融合蛋白rCtUBE以氢氧化铝为佐剂注射免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA鉴定:小鼠能够产生针对CTB和表位肽F8的高滴度特异性抗体。结论:Hp表位疫苗rCtUBE具有科学合理的结构,能在大肠杆菌表达系统中获得较高水平的表达,且具有较高的免疫学特异性,因此为研发防治Hp感染的表位疫苗奠定了一定的实验基础。
- 郭乐刘昆梅秦玉红李小康段相国杨华徐广贤奚涛
- 关键词：幽门螺旋杆菌尿素酶表位疫苗
