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携带甲胎蛋白基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及其对靶基因的沉默效率: 2012年; 目的构建携带甲胎蛋白（AFP）基因小干扰RNA（siRNA）的慢病毒载体并转染肝癌细胞，评价其对AFP基因的沉默效率。方法设计和构建针对AFP基因的阳性siRNA及不针对任何已知基因的阴性siRNA，将其分别插入携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的重组慢病毒载体，然后转染到表达AFP基因的人肝癌细胞HepG2并筛选阳性表达细胞株，分别为慢病毒转染阳性siRNA组和慢病毒转染阴性siRNA组。同时设立脂质体转染阳性siRNA组、脂质体转染阴性siRNA组以及加AFPsiRNA而未用转染试剂的siRNA组、空白对照组。荧光显微镜观察评估转染效率，荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组HepG2细胞APFmRNA及蛋白的相对表达量，比较不同转染方法对AFP基因表达的抑制率。结果慢病毒能够有效地转染siRNA到HepG2细胞内。荧光定量PCR显示慢病毒转染siRNA对AFPmRNA表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA（92．1％比74．3％，P〈0．05）。免疫印迹亦显示慢病毒转染siRNA对AFP蛋白表达的抑制率显著高于脂质体转染siRNA（88．2％比63．7％，P〈0．05）。结论慢病毒转染AFPsiRNA能够更有效地抑制HepG2细胞内AFP基因表达。; 程木华李建芳张峰曾凤伟谢良骏; 关键词：甲胎蛋白类基因表达调控慢病毒属

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国家自然科学基金(30970855)