陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项(2007ZDKG-76)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：陈超李拴美刘端王会娟马平平更多>>
- 相关机构：陕西北美基因股份有限公司西北大学更多>>
- 发文基金：陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外研究人细胞色素P450 3A4等位基因多态性对药物代谢和药物相互作用的影响被引量：7
- 2009年
- 目的体外研究药物对人细胞色素P4503A4(CYP3A4)(野生型,WT)及其4个突变等位基因重组酶CYP3A4*3(M445T)、CYP3A4*4(I118V)、CYP3A4*17(F189S)和CYP3A4*18(L293P)的抑制程度。方法采用荧光高通量法和HPLC法分别测定WT及其4个突变等位基因重组酶催化荧光底物——二甲基荧光素(DBF)脱烷基化和探针底物——硝苯地平氧化反应时的酶动力学参数;且通过测定大扶康、万络、西乐葆、酮康唑、地尔硫卓和维拉帕米的半数抑制浓度(IC50)值,确定6种药物对酶的抑制程度。结果除F189S外,其余4种重组酶均能催化DBF和硝苯地平反应生成相应的产物。各突变等位基因重组酶催化DBF反应的Km值(亲和力)与WT相当,M445T和L293P的内在清除率分别是WT的3.1和3.8倍(P<0.05),I118V是WT的1.3倍(P=0.1010)。各重组酶催化硝苯地平氧化反应的Km值均比WT小,I118V和L293P的内在清除率分别是WT的0.7和2.6倍(P<0.05),M445T与WT相当(P=0.7676)。6种药物对各重组酶的抑制程度强弱均为:酮康唑>地尔硫卓>维拉帕米>大扶康>西乐葆>万络;药物对各重组酶的IC50值大小为:WT
- 李拴美刘端朱娟莉陈超
- 关键词：细胞色素P450酶系统半数抑制浓度药物相互作用
- 体外重组人细胞色素P450 2C9酿酒酵母表达体系的构建及其基因多态性对药物相互作用影响的初探被引量：3
- 2009年
- 目的体外构建重组人细胞色素P450 2C9(CYP2C9)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达体系,且利用该体系研究药物对CYP2C9基因多态性酶抑制程度的差异性。方法将CYP2C9*1(野生型)和通过定点突变PCR法获得的等位基因突变克隆CYP2C9*2(R144C突变体)和CYP2C9*3(I359L突变体)电穿孔转化酿酒酵母后,差速离心法制备酿酒酵母微粒体,蛋白免疫印迹法检测3种CYP2C9微粒体蛋白的表达;HPLC法检测CYP2C9*1与特异性底物双氯芬酸的反应,记录产物峰面积值,利用Prism Demo软件计算米氏常数(Km)值;利用荧光底物BOMCC对3个等位基因进行酶活性分析,分别计算Km、最大酶促反应速度(Vmax)和内在清除率。采用荧光高通量方法测定5种药物(甲苯磺丁脲、磺胺苯比唑、酮康唑、氟西汀和泰洛平)对酶的抑制程度。结果蛋白免疫印迹结果表明,3个等位基因均表达目的蛋白。CYP2C9*1代谢双氯芬酸的Km值为5.34±0.96μmol/L;以BOMCC为底物时,CYP2C9*1和CYP2C9*2的Km值分别为16.94±4.78、34.73±5.51μmol/L,Vmax分别为0.21±0.10、0.12±0.01pmol/(min·pmolP450),内在清除率分别为0.012±0.003、0.003±0.0001μl/(min·pmolP450);CYP2C9*3无催化活性。5种药物对CYP2C9*1的抑制程度:磺胺苯比唑>酮康唑>氟西汀>甲苯磺丁脲>泰洛平;对CYP2C9*2的抑制程度:磺胺苯比唑>甲苯磺丁脲>酮康唑>氟西汀>泰洛平。结论成功构建了重组人细胞色素CYP2C9及其多态性等位基因(CYP2C9*2、CYP2C9*3)酿酒酵母表达系统;初步建立了药物对CYP2C9基因多态性酶的抑制作用体外检测体系,为指导临床联合用药奠定了基础。
- 马平平王会娟朱娟莉陈超
- 关键词：细胞色素P450酶系统半数抑制浓度药物相互作用
