四川省青年科技基金(09ZQ026-030)
- 作品数：3 被引量：34H指数：2
- 相关作者：郭万柱徐志文吴云飞朱玲阳爱国更多>>
- 相关机构：四川农业大学四川省动物疫病预防控制中心动物疫病与人类健康四川省重点实验室更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”四川省青年科技基金四川省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪细小病毒四川株的分离鉴定及其一步生长曲线
- 2013年
- 为了研究猪细小病毒(PPV)的增殖规律,利用PK-15细胞从流产胎儿的肝、肠系膜淋巴结和肾样品中分离到1株病毒,经PCR检测、蚀斑纯化、病毒理化试验、微量中和试验和血凝试验证实该分离株为猪细小病毒,命名为SC-L。针对PPV的VP1和NS1基因设计特异性引物,建立PPV的荧光定量PCR方法。以SC-L分离株感染PK-15细胞,感染后每隔4h分别收集感染细胞与上清液,利用荧光定量PCR方法对不同样品中的病毒DNA进行定量分析,绘制PPV SC-L的一步生长曲线。PPV SC-L株感染PK-15细胞,细胞外病毒含量在第4～20小时缓慢增加,20h后呈对数增长,第56小时达到最大值,随后病毒含量迅速下降,在第68小时时趋于稳定;在细胞内感染4h检测到微量的病毒粒子,第4～24小时细胞内病毒缓慢增长,24h细胞内病毒粒子呈对数增长,第44小时达到最大量,随后胞内病毒粒子逐渐降低。表明PPV在细胞内增殖到一定数量后逐步释放到细胞外,且细胞外病毒最大量高于细胞内。
- 江一帆吴云飞朱玲徐志文阳爱国廖珊陈蕾黄仆郭万柱
- 关键词：猪细小病毒实时荧光定量PCR
- 猪细小病毒PK-15细胞适应株的培育及增殖特性被引量：8
- 2013年
- 为了研究猪细小病毒不同接毒方式的增殖规律及在不同细胞的病毒含量差异。本实验利用PK-15细胞对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)分离株进行适应性培养。针对PPV的NS1基因设计特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法。利用该方法检测PPV分离株同步和分步接毒的病毒含量,绘制一步生长曲线;同时检测PPV在HeLa、MDBK、PK-15、ST、F81、BHK-21和Marc-145细胞上的增殖特性。结果显示,PPV分离株盲传至12代产生CPE,继续传代培养10代仍能产生稳定的细胞病变,成功培育出PK-15细胞适应株。一步生长曲线显示,分步接毒的病毒含量高于同步接毒,而增殖周期短于同步接毒;PPV在不同细胞的增殖结果显示,各细胞开始出现CPE的时间依次为PK-15、ST、HeLa和MDBK,病毒含量高低依次是ST、PK-15、MDBK和HeLa,而不能在F81、BHK-21和Marc-145细胞上增殖。本实验首次利用荧光定量PCR方法成功分析PPV不同接毒方式的增殖规律及不同细胞的增殖特性,为PPV基础研究和疫苗生产提供资料。
- 吴云飞朱玲徐志文付梦瑾陈蕾阳爱国郭万柱
- 关键词：猪细小病毒实时荧光定量PCR
- 伪狂犬病病毒四川株的分离鉴定及增殖特性被引量：26
- 2013年
- 利用PK-15细胞从四川某猪场分离到1株病毒,经PCR检测、蚀斑纯化、病毒理化试验、血清学试验和动物回归试验证实,该分离株为伪狂犬病病毒(PRV),遂将其命名为PRV-SL;用其分别感染PK-15、Vero、Marc-145、Hela、BHK-21和MDBK细胞,观察病变情况及绘制PRV-SL株在不同动物细胞的一步生长曲线;用TCID50法检测PRV-SL株不同细胞毒的病毒效价。结果显示,PRV-SL株在细胞中均能增殖,但不同细胞之间CPE及病毒效价有所差异:PRV-SL株感染PK-15细胞的病毒效价最高;病毒一步生长曲线显示,PRV-SL株感染BHK-21细胞的隐蔽期最短,在猴源细胞(Vero、Marc-145)上增殖周期最长,增殖周期由短至长依次为BHK-21、MDBK、Hela、PK-15、Vero和Marc-145细胞。结果表明,PRV-SL株具有泛嗜性,在不同动物细胞上的增殖效价和增殖曲线具有明显差异,病毒在不同细胞上的增殖周期长短与病毒效价高低无相关性。
- 吴云飞朱玲徐志文周远成魏浩澈杨雪郭万柱
- 关键词：伪狂犬病病毒
