山东省自然科学基金(ZR2009CM132)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 人肌细胞增强因子2C基因慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究MEF2C的功能。方法以人MEF2C基因序列为模板合成其编码框序列,通过限制性内切酶NotⅠ和NsiⅠ酶切、T4DNA连接酶连接,将MEF2C插入慢病毒载体质粒LV5-GFP,构建人MEF2C基因重组慢病毒质粒载体,转化感受态细菌,筛选阳性克隆,与包装质粒通过脂质体共转染人胚肾细胞系293T,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察感染效率,PCR方法检测MEF2C mRNA的过表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体LV5-MEF2C-GFP,三质粒共转染293T细胞后形成假慢病毒颗粒;浓缩假病毒后测定其滴度为2×109TU/ml;以复感染系数MOI为5感染293T细胞,感染效率在70%以上。PCR证实感染带有目的基因假病毒的293T细胞表达MEF2CmRNA的水平较感染阴性对照病毒的293T细胞表达水平明显升高(t=11.93,P=0.000)。结论成功构建MEF2C慢病毒表达系统,为应用过表达技术探索其在肿瘤发生和发展中的作用奠定了基础。
- 孙兆刚付鹏刘爱华王静波孙新六刘兴田
- 关键词：慢病毒属绿色荧光蛋白质类293T细胞
- 沉默MEF2C基因对髓母细胞瘤Daoy细胞形态结构的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨抑制人MEF2C基因后对髓母细胞瘤Daoy细胞形态结构的影响作用。方法实验分为两组:对照组和干扰组。对照组Daoy细胞培养感染阴性慢病毒液,干扰组Daoy细胞培养感染MEF2C-RNAi慢病毒液。光镜下观察培养细胞的大体形态,然后利用透射电镜观察细胞的超微结构变化情况。同时将两组细胞分别接种至裸鼠背部皮下,观察裸鼠成瘤情况以及肿瘤组织的光镜下结构和电镜下超微结构变化情况。结果干扰组Daoy细胞生长较对照组细胞生长缓慢,种植裸鼠后成瘤重量较对照组轻;光镜下显示对照组瘤组织细胞较干扰组瘤组织细胞排列密集;电镜下显示干扰组瘤组织细胞排列疏松,核固缩,凋亡小体形成。结论沉默MEF2C基因可以引起异染色质减少、凋亡小体形成,影响细胞的形态结构,抑制肿瘤细胞生长,为其肿瘤生物治疗提供了实验依据。
- 付鹏赵立军孙鹏刘广丽刘兴田
- 关键词：髓母细胞瘤RNAI
- 髓母细胞瘤组织MEF2C表达与预后相关性分析被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨肌细胞增强因子2C(myocyte enhancer factor 2C,MEF2C)表达情况与髓母细胞瘤患者预后的关系。方法:选取3家三级甲等医院2001-01-01-2007-12-31病理确诊的髓母细胞瘤患者56例,其中泰安市中心医院12例,齐鲁医院26例,山东省立医院18例;对照组脑组织取自泰安市中心医院2010-01-01-2010-12-31 12例非肿瘤脑外伤患者。免疫组织化学法检测56例髓母细胞瘤患者肿瘤组织和12例非肿瘤患者脑组织中MEF2C的表达;收集髓母细胞瘤患者临床资料,应用统计学方法对髓母细胞瘤患者进行生存分析。结果:髓母细胞瘤患者肿瘤组织MEF2C相对高表达率为53.6%(30/56),非肿瘤患者脑组织MEF2C相对高表达率为0(0/12),两组比较差异有统计学意义,χ2=11.50,P=0.001;肿瘤患者肿瘤组织MEF2C相对高表达组与相对低表达组间生存时间的差异有统计学意义,χ2=4.34,P=0.037。MEF2C相对高表达(P=0.023)、肿瘤转移(P=0.042)与患者3年生存率降低显著有关,而患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位与患者3年生存率无关,P值均>0.05。结论:MEF2C在患者肿瘤组织中的高表达可降低患者3年生存率,是患者预后不良的危险因素之一。
- 左丽李静文孙立刘广丽刘兴田
- 关键词：髓母细胞瘤预后
