湖南省卫生厅科研基金(A2003001)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
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- 抗体药物用于肿瘤治疗的研究进展被引量：1
- 2008年
- 抗体药物是近年来发展起来的新的抗肿瘤药物，在肿瘤治疗方面有着独特的优势。研究表明，抗体药物能选择性杀伤肿瘤细胞，具有良好的疗效和较低的毒性，在体内呈特异性分布，能特异性结合于肿瘤相关分子靶点，并且对耐药性肿瘤细胞有杀伤作用。
- 黄建李官成
- 关键词：抗体抗肿瘤药免疫疗法肿瘤
- 全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定被引量：6
- 2008年
- 目的:构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库,从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv),并对其特异性进行鉴定。方法:采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库。对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选,获得的阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序。结果:scFv基因与载体连接后得到库容量为1.0×108的初级噬菌体抗体库。对抗体库进行3轮正负淘选和富集后,随机挑取2798个克隆进行ELISA,发现3个克隆对HepG2呈强阳性反应,而与QSG-7701等人正常细胞系呈弱阳性或不反应。对克隆SA3进行免疫细胞化学鉴定,结果与ELISA一致。免疫组织化学鉴定表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率的差别有统计学意义。结论:构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌噬菌体抗体库。通过淘选富集、ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础。
- 黄建肖艳童永清郭锋杰周国华李跃辉胡锦跃李官成
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库单链抗体
- 噬菌体抗体库的筛选策略及其进展
- 2005年
- 噬菌体抗体库技术的出现开创了一条简便快捷的基因工程抗体生产路线,为人源抗体的制备提供了新途径随着现代分子生物技术的迅速发展,抗体库的筛选工作也在传统的亲和淘选的基础上不断改进,涌现出越来越多新的有效筛选方法,显示出噬菌体抗体库技术在抗体开发应用中极为广阔的前景。
- 肖艳李官成
- 关键词：细菌噬菌体抗体亲和力抗体筛选
- 用EBV转化的肝癌患者B细胞构建噬菌体单链抗体库被引量：1
- 2008年
- 目的构建抗肝癌人源噬菌体单链抗体库。方法体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后,转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型ScFv库。结果经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生,经多次PCR,扩增出6种VH(γ、μ)和9种VL(κ、λ)基因,经连接组成54种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061。经四环素抗性筛选,得到库容为1.0×108的初级噬菌体抗独特型抗体库,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为80%。结论用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术,制备全人源抗肿瘤单链抗体(ScFv),这一策略是完全可行的。
- 肖艳李官成李跃辉童永清张志杰
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库单链抗体
- 全人源抗肝癌噬菌体单链抗体库的构建与筛选鉴定被引量：2
- 2008年
- 体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC.用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因.将ScFv基因与载体fuse5连接后,电击转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型ScFv库.用人肝癌细胞及人肝细胞对初级噬菌体抗体库进行亲和富集及phage-ELISA筛选.筛选获得的阳性克隆进行ELISA及免疫组化鉴定并测序.结果表明,经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生,经多次PCR,扩增出6种VH(γ、μ)和9种VL(κ、λ)基因,经连接组成54种ScFv基因.将ScFv基因与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061,得到库容为1.0×108的初级噬菌体抗体库,全长ScFv基因的插入率为80%.用人肝癌细胞系HepG2和人肝细胞系QSG-7701对抗体库进行三轮正负淘选和富集后,从中随机挑取533个克隆进行ELISA筛选,得到179个阳性克隆,阳性率为33.6%.将179个阳性克隆进一步进行其他细胞系的鉴定,发现克隆A82对肝癌细胞系HepG2、人胚肾上皮细胞系HEK293呈强阳性反应,免疫组织化学结果显示与人肝细胞癌组织有特异性反应,而不与正常肝组织反应.且A82的相对亲和力为2.4mol/L,解离常数Kd为5.32×10-9mol/L,显示其亲和力较高.对克隆A82进行测序分析,结果表明:A82全长742bp,含linkercDNA序列45bp,重链可变区基因与人胚系IgVH3-23有94.3%的同源性,轻链可变区基因与人胚系IgV4-2有94.9%的同源性,V-D-J分别属于VH3-23-D2-21-JH6-linker-V4-2-JL2.由上述结果可见,应用体外抗原致敏方法和EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术,构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌单链抗体库,通过细胞ELISA和免疫细胞化学鉴定,获得的噬菌体抗体克隆A82具有较强的特异性,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础.
- 肖艳李官成李跃辉黄建童永清张志杰
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库肝癌单链抗体
- 用体外致敏联合EB病毒转化技术构建抗肝癌的人源Fab噬菌体抗体库被引量：2
- 2007年
- 目的构建抗肝癌的人源Fab噬菌体抗体库。方法体外致敏并用EB病毒(EBV)转化肝癌患者的外周血单个核细胞(PBMC)。RT-PCR扩增人抗体轻链和重链Fd段基因,将抗体基因分别与载体pComb3连接后,电转化大肠杆菌XLI-Blue,构建噬菌体呈现型Fab抗体库。结果经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生;经PCR扩增出13条轻链基因片段(κ、λ)和28条重链Fd基因片段(γ);电转化构建的噬菌体抗体库库容为1.7×107puf/mL;Fab基因的重组率约为100%。结论用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术,成功构建了全人源抗肝癌Fab组合抗体文库。
- 水漩李官成李跃辉黄建赵艳
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库肝癌FAB抗体
