广东省科技计划工业攻关项目(2006B19901014)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：杨冬华汤绍辉叶刚丁世华钟健更多>>
- 相关机构：暨南大学附属第一医院深圳市第二人民医院广州医学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省名医工程研究项目广东省中医药局建设中医药强省科研课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 特异性抗肝癌单链抗体HscFv4-16的分子模建被引量：2
- 2007年
- 目的:模建特异性抗肝癌单链抗体HscFv4-16的三维结构,为高亲和力的抗肝癌单链抗体的人源化设计提供结构信息。方法:采用同源模建技术,在SGI图形工作站上,通过Accelrys公司InsightⅡ软件包的Homology模建分子结构,用Discover进行分子力学和动力学优化,最后用Prostat验证模拟结构的合理性。结果:HscFv4-16结构6个CDR襻位于Fv段的N端,形成一个与抗原结合的口袋,口袋深15.6。用Prostat验证,模建的三维结构的81.3%的Φ和Ψ分布于Ramachandran图的核心区域,模板1NQB的为83.2%。结论:成功模建特异性抗肝癌单链抗体HscFv4-16的三维结构,模拟结构合理可靠。
- 叶刚杨冬华汤绍辉周旻丁世华罗静兰
- 关键词：肝肿瘤
- 抗肝癌单链抗体二聚体的制备及其对肝癌细胞株增殖的影响
- 2010年
- 目的:探讨特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中高效表达、纯化和鉴定其生物学活性的方法,并观察其对肝癌细胞增殖的影响。方法:构建酵母表达载体pGAPZαA-BDM,转化感受态大肠埃希菌DH5α,选择测序正确的阳性克隆进行扩增后,电转化酵母细胞,表达抗体二聚体,对表达抗体进行纯化、二聚体相对分子质量及形成比例和浓度检测,鉴定其对肝癌细胞的结合活性,免疫组化检测二聚体对肝癌组织抗原的特异性,MTT法观察二聚体抗体对肝癌细胞株增殖的影响。结果:测序及SDS-PAGE显示,成功构建及在酵母中表达抗体二聚体BDM,纯化后的抗体经凝胶过滤色谱检测,二聚体的相对分子质量为62×103,二聚体形成比例为92%;表达量为30mg/L菌液。BDM与3株肝癌细胞结合效价为1:128,高于其亲本单链抗体。免疫组化显示,BDM与肝癌、肝硬化、胃癌、肠癌及正常肝组织反应的阳性率分别为40.0%、11.0%、6.7%、5.0%和0,P值均<0.05;MTT显示,二聚抗体BDM显示较好的抑瘤性,对肝癌细胞株的抑制率为30%,且有浓度依赖性。结论:成功制备高表达量、高特异性、较好的活性及较高稳定性的抗肝癌单链抗体二聚体BDM,其对肝癌细胞株的增殖有明显抑制作用,为后续将该抗体用于肝癌的放射免疫诊断和靶向治疗研究奠定了基础。
- 别彩群杨冬华汤绍辉丁世华
- 关键词：肝细胞抗体毕赤酵母
- 基于同源模建技术的抗肝癌单链抗体人源化抗体库设计
- 2015年
- 目的完成抗肝癌噬菌体单链抗体sc Fv DM的人源化设计,为进一步构建人源化抗肝癌噬菌体单链抗体库奠定基础。方法通过IgBlast搜索基因数据库获取鼠源抗体序列模板,从蛋白质晶体结构数据库获得结构模板;在SGI图形工作站上,通过InsightlⅡ软件包进行抗肝癌噬菌体单链抗体scFv DM的三维结构模建,分析抗体氨基酸序列和分子结构,确定影响抗原结合部位的框架区关键残基。结果成功模建抗肝癌噬菌体单链抗体scFv DM的三维结构,确定AAW67378、BAB18257分别为单链抗体scFv DM的重链和轻链框架区最佳人源化模板,确定了人源化残基、回复突变的残基,将可能影响抗原结合位点结构的残基的鼠源和人源副本编入到人源化抗体库序列中。结论计算机辅助下的同源模建技术可为抗体人源化设计提供方案,为抗肝癌噬菌体单链抗体scFv DM同步实现人源化和优化提供可能性。
- 叶刚刘丽杨冬华汤绍辉周旻丁世华韦宏成钟健
- 关键词：同源模建人源化单链抗体肝癌
- 两株抗肝癌细胞单链抗体三维结构的同源模建
- 2015年
- 目的模建特异性抗肝癌单链抗体Hsc Fv 4-16和sc Fv DM的三维结构,比较两者结构的异同,为高亲和力的抗肝癌单链抗体的人源化设计提供结构信息。方法采用同源模建技术,在SGI图形工作站上,通过Accelrys公司InsightⅡ软件包的Homology模建分子结构,用Discover进行分子力学和动力学优化,最后用Prostat验证模拟结构的合理性。结果 Hsc Fv 4-16和sc Fv DM六个CDR襻位于Fv段的N端,形成一个与抗原结合的口袋,口袋分别深15.6和16.1。其中CDRL3和CDRH3与抗原最接近,有较多接触。sc Fv DM的CDRL3和CDRH3两个襻比sc Fv 4-16的更靠近中央。结论采用同源模建技术成功模建特异性抗肝癌单链抗体Hsc Fv 4-16和sc Fv DM的三维结构,sc Fv DM的三维结构显示与抗原的结合更紧密,亲和力比Hsc Fv 4-16高,与实验检测结果一致。
- 叶刚钟健汤绍辉黄卫周旻卢筱华杨冬华
- 关键词：肝肿瘤同源模建
