山东省自然科学基金(ZR2009CM135)
- 作品数：5 被引量：35H指数：5
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- 相关机构：山东中医药大学附属眼科医院山东中医药大学更多>>
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- 枸杞多糖对人视网膜色素上皮细胞脂褐素清除作用的影响被引量：9
- 2012年
- 目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)在预防或阻止视网膜色素上皮老年性改变中所起的作用。方法将提取纯化的猪眼光感受器外节(photorecepter ourer segment,POS)与人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞共养3周,建立RPE脂褐素模型。将脂褐素化的RPE细胞分为4组,分别加入浓度为0μg/ml(空白对照组)、10μg/ml、100μg/ml、1 000μg/ml的LBP培养12 h、24 h、48h,流式细胞技术测定不同浓度LBP干预后的人RPE细胞内脂褐素值。结果各LBP培养组人RPE细胞在不同时间的脂褐素荧光面积均低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);枸杞多糖浓度为1 000μg/ml时人RPE细胞内脂褐素荧光面积最小。结论 10μg/ml、100μg/ml、1 000μg/ml的LBP具有促进体外培养的人RPE细胞清除脂褐素的作用;浓度为1 000μg/ml时对hRPE细胞内脂褐素的清除作用最强。
- 杨茂兰董卫红毕宏生解孝锋杜秀娟
- 关键词：视网膜色素上皮细胞脂褐素枸杞多糖
- 黄芪多糖对过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用被引量：8
- 2015年
- 目的观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)氧化损伤的保护作用。方法培养的人RPE细胞系ARPE-19分为正常对照组、过氧化氢损伤组和不同浓度(1000 mg·L-1、500mg·L-1)APS干预组,正常对照组不作任何处理,过氧化氢损伤组加入200μmol·L-1过氧化氢,APS干预组加入不同浓度(1000 mg·L-1、500 mg·L-1)APS后加入200μmol·L-1过氧化氢。用倒置荧光显微镜观察各组细胞形态变化;MTT检测各组细胞活性;DAPI染色观察各组细胞核形态学变化;实时细胞电子分析系统(real-time cell electronic sensing system,RT-CES)实时记录细胞生长状态;应用caspase-3活性检测试剂盒测定各组细胞中caspase-3的活性。结果过氧化氢损伤组细胞皱缩,悬浮细胞增多,APS干预后细胞状态改善。MTT检测结果显示:1000 mg·L-1、500 mg·L-1APS孵育24 h后细胞存活率分别为(99.86±3.64)%和(101.03±3.52)%,与正常对照组(100%)相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05),过氧化氢损伤组细胞存活率为(56.49±2.30)%,与正常对照组相比显著降低(P<0.01),1000 mg·L-1、500 mg·L-1APS干预后,细胞存活率升高到(88.14±2.97)%和(80.75±3.13)%,与过氧化氢损伤组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。DAPI染色显示正常细胞核均匀淡染,过氧化氢损伤组出现强荧光点和致密的细胞核,APS处理后凋亡程度减轻。RT-CES显示,APS处理可以减少过氧化氢造成的细胞损伤。Caspase-3检测发现过氧化氢造成细胞caspase-3水平升高,APS处理后caspase-3水平下降。结论 APS可以抑制过氧化氢诱导的人RPE细胞系ARPE-19的凋亡,这为APS的临床应用提供了一定的实验基础。
- 司俊康郭俊国郭大东唐凯杜宇翔王兴荣
- 关键词：黄芪多糖视网膜色素上皮细胞凋亡
- 枸杞多糖对蓝光诱导损伤人视网膜色素上皮细胞凋亡及线粒体膜电位影响被引量：6
- 2013年
- 目的利用蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮细胞（humanretinalpigmentepitheli．alcell，hRPEcell）损伤建立年龄相关性黄斑变性（Age—relatedmaculardegeneration，AMD）的实验模型，观察不同浓度的枸杞多糖对hRPE细胞凋亡及线粒体膜电位的影响，探讨枸杞多糖防治AMD的可行性。方法通过蓝光诱导建立hRPE细胞光损伤模型，不同浓度的枸杞多糖进行干预。实验分组：A组为正常hRPE细胞，B组（hRPE＋光照）为光照损伤组，C组（hRPE＋光照＋0．01mg／ml枸杞多糖），D组（hRPE＋光照＋O．1mg／ml枸杞多糖），E组（hRPE＋光照＋1mg／ml枸杞多糖）。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，并检测光照后24h及48h各组细胞的凋亡数及线粒体膜电位。结果（1）倒置像差显微镜下见正常hRPE细胞呈梭形或多边形，单层贴壁生长，细胞边界清楚。光照损伤组部分细胞体积缩小，变圆，细胞周围见透亮圈；细胞核缩小，出现核边聚，培养液中出现圆形悬浮细胞及细胞碎片。枸杞多糖干预组少许细胞积缩小，变圆，折光性改变，培养液中未出现圆形悬浮细胞及细胞碎片。（2）AnnexinV—FITC／PI凋亡检测显示A组凋亡细胞数量最少；B组凋亡细胞数量最多；C组iD组及E组凋亡细胞数量与B组细胞差异有统计学意义（P〈0．01）；E组凋亡细胞数量与A组差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）线粒体膜电位检测显示A组阳性细胞数量最多；B组阳性细胞数量最少；c组、D组及E组阳性细胞数量及线粒体膜电位与B组相比差异有统计学意义（P〈O．01）；E组与A组差异无统计学意义（P〉0．05），B、C、D组与A组比较P〈0．05有统计学意义。结论枸杞多糖能抑制蓝光诱导损伤的hRPE凋亡，增强hRPE细胞线粒体膜电位，对hRPE有很好的保护作用。
- 杜秀娟董卫红毕宏生解孝锋
- 关键词：枸杞多糖凋亡
- 黄芪多糖对过氧化氢诱导大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的保护作用被引量：9
- 2014年
- 目的观察黄芪多糖(APS)对过氧化氢诱导的大鼠视网膜神经节细胞(RGC)氧化损伤的保护作用。方法将RGC-5细胞分为正常对照组、阴性对照组、过氧化氢损伤组、黄芪多糖干预组。正常对照组不做处理,阴性对照组和过氧化氢损伤组分别加入1 000μg/ml的黄芪多糖和100μmol/L的过氧化氢,黄芪多糖干预组加入不同浓度(1 000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml)黄芪多糖后加入100μmol/L的过氧化氢。用倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化;MTT法检测细胞活性;DAPI染色观察细胞核形态学变化;实时细胞电子传感器(RT-CES)分析系统记录细胞生长状态。结果倒置相差显微镜下正常RGC-5细胞呈扁平梭形,边缘清晰,有较短突起,过氧化氢损伤组细胞皱缩,细胞密度减低,轴突缩短,其他各组细胞形态未见明显改变。MTT:各浓度黄芪多糖干预组的细胞活性均较过氧化氢损伤组升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。DAPI染色:过氧化氢处理后RGC-5细胞核可见染色质凝聚,边缘化;黄芪多糖干预后仅少量细胞出现染色质凝聚现象。RT-CES:与正常对照组相比,过氧化氢损伤组细胞生长受到抑制,其余各组细胞生长曲线基本正常。结论黄芪多糖可以抑制过氧化氢诱导的大鼠RGC凋亡,这为黄芪类药物治疗糖尿病视网膜病变提供了一定的实验基础。
- 司俊康郭俊国唐凯杜宇翔郭大东王兴荣
- 关键词：黄芪多糖视网膜神经节细胞
- 枸杞多糖对蓝光损伤的视网膜色素上皮细胞的保护作用被引量：6
- 2013年
- 目的:研究不同浓度的枸杞多糖对蓝光诱导损伤的体外培养人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞的保护作用。方法:通过蓝光诱导建立hRPE细胞光损伤模型,分别用不同浓度的枸杞多糖(分别为0.01,0.1,1mg/mL)对体外培养的hRPE细胞进行干预,通过流式细胞仪检测各实验组的细胞线粒体活性氧和凋亡率。实验组分为正常对照组、光照损伤组以及不同浓度枸杞多糖(0.01,0.1,1mg/mL)干预组。结果:线粒体活性氧检测:正常对照组荧光强度最小;蓝光损伤组荧光强度最大,不同浓度枸杞多糖处理组荧光度与蓝光损伤组强度相比,荧光强度差异有统计学意义(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI凋亡检测显示不同浓度枸杞多糖干预组凋亡细胞数量与蓝光损伤组凋亡细胞相比差异均有统计学意义(P<0.05);1mg/mL枸杞多糖干预组凋亡细胞数量与对照组凋亡数量相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:枸杞多糖能抑制蓝光诱导损伤的hRPE细胞的凋亡,1mg/mL枸杞多糖抑制蓝光诱导的hRPE细胞凋亡的作用更强,其作用机制可能与抑制细胞线粒体产生活性氧有关。
- 董卫红杜秀娟郭大东窦冉解孝锋毕宏生
- 关键词：枸杞多糖视网膜色素上皮细胞线粒体活性氧凋亡
