国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-22-ZJ0305)
- 作品数：3 被引量：15H指数：1
- 相关作者：沈卫德卫正国李兵刘罡张晨更多>>
- 相关机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金更多>>
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- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)的基因克隆、原核表达和多克隆抗体制备被引量：15
- 2011年
- 丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)为丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员。本研究旨在研制高效价的家蚕Bombyxmoriserpin-4多克隆抗体,为深入研究serpin-4基因的生理功能打下物质基础。首先于家蚕脂肪体中克隆了serpin-4基因,利用基因重组技术构建了pET28a-serpin-4原核表达载体,经IPTG诱导,获得原核表达重组融合蛋白,利用镍柱回收纯化技术,获得目的蛋白;经SDS-PAGE和抗His多抗检测,纯化蛋白的分子量大小与预测的一致,即获得了高纯度的目的蛋白,以此蛋白为免疫抗原,采用4次免疫方式对昆明小鼠进行抗原免疫,最终获得抗serpin-4的多克隆抗体血清;该血清经ELISA和Westernblot验证,效价达到1:20000,特异性较好。家蚕serpin-4多克隆抗体的成功制备,一方面表明应用于其他生物的多克隆抗体制备所采用的方法对于家蚕serpin基因的研究同样适用;另一方面,也为深入研究家蚕serpin-4的生理功能打下了物质基础。
- 查宏贤刘罡张晨王彦云卫正国李兵陈玉华许雅香沈卫德
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆原核表达多克隆抗体
- 家蚕蜕皮激素受体基因EcR-A的启动子活性区域分析
- 2014年
- 昆虫蜕皮激素(20-羟基蜕皮酮)与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)相互作用启动蜕皮级联反应过程,由EcR和USP组成的复合物是蜕皮激素的作用靶标。为研究家蚕EcR-A基因(Bm EcR-A)的转录调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-to-Bac表达系统制备含5'端长度不同Bm EcR-A基因启动子片段的重组杆状病毒,分别将重组杆状病毒感染家蚕后检测启动子的活性。结果表明,在Bm EcR-A启动子的-637^-518 bp和-278^-177 bp区域存在正调控元件,并且能被0.002 g/L 20E诱导。通过构建含5'端长度不同Bm EcR-A启动子片段的荧光素酶报告质粒,在细胞水平上进一步分析Bm EcR-A启动子活性区域,结果显示:在-637^-612 bp和-278^-177 bp区域包含Bm EcR-A基因启动子转录调控必需的重要调控元件;当删除-197^-177 bp区域后,启动子活性明显增强,推测在该区域可能含有一个转录抑制因子结合位点。研究结果提示:上述启动子区域包含有转录调控元件的结合位点,是进一步研究Bm EcR-A启动子核心区域的重要线索。
- 杜杰黄明霞刘云垒赵国栋卫正国沈卫德
- 关键词：家蚕启动子活性
- 5龄家蚕乙酰胆碱酯酶基因的转录水平
- 2012年
- 乙酰胆碱酯酶(AChE)是有机磷和氨基甲酸酯类物质的作用靶酶。通过半定量PCR的方法测定家蚕4龄眠到上蔟期的2种ace基因的表达量,并测定该时期家蚕的AChE活性,以及5龄3 d各组织中2种ace基因的表达量。结果表明,ace1基因在4龄眠到5龄第2天,第6天到第8天的转录表达量较多,第3天到第5天表达量相对较少;ace2基因在4龄眠期转录表达量多,进入5龄后,转录表达量减少且隔天转录表达量大致相同。在5龄中期和后期,AChE各具有1个峰值。5龄3 d,ace1基因在脂肪体、脑、卵巢中的转录表达量多,在其他组织中表达量较少,其中在血液中最少,ace2基因在脂肪体、精巢、卵巢中转录表达量多,在其他组织中表达量较少。
- 曹雅琪王彬彬顾芝亚张霞沈卫德李兵
- 关键词：家蚕乙酰胆碱酯酶基因转录
