国家科技支撑计划(2012BAB19B09)
- 作品数：18 被引量：154H指数：9
- 相关作者：李培武张奇张文丁小霞张兆威更多>>
- 相关机构：中国农业科学院油料作物研究所中华人民共和国农业部中国农业科学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程理学生物学更多>>
- 中国花生黄曲霉毒素污染风险预警模型研究
- 花生（Arachis hypogaea L.）是我国主要油料作物和优势出口农产品，是食油兼用型经济作物，其营养价值高兼具食疗功能，在中国及世界油料生产中占有重要地位。然而花生易受真菌侵染产生黄曲霉毒素，严重影响人体健康，...
- 武琳霞
- 关键词：花生黄曲霉毒素风险预警
- 基于异源策略的黄曲霉毒素B_1酶联免疫(ELISA)分析方法的建立被引量：7
- 2014年
- 为提高黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)酶联免疫分析灵敏度,建立了基于异源策略的间接竞争酶联免疫分析(IC-ELISA)方法。首先采用黄曲霉毒素B1与羟基乙酸(glycolic acid,GA)进行衍生化反应,生成缩醛(AFB2-GA),即AFB1半抗原,质谱鉴定结果为ESI-MS:388.07[M+H]+,表明半抗原合成成功。然后采用活泼酯法,将AFB1半抗原羧基与牛血清白蛋白(BSA)的氨基经脱水反应实现化学共价偶联,得到AFB1人工抗原AFB2-GA-BSA。紫外扫描结果表明人工抗原AFB1特征吸收峰与BSA和AFB1的特征吸收峰有明显差异,BSA与黄曲霉毒素B1成功偶联,摩尔结合比分别为8.45∶1。最后将黄曲霉毒素B1人工抗原AFB2-GA-BSA作为包被原,利用黄曲霉毒素B1高特异性3G1抗体,建立了基于异源策略的IC-ELISA方法。利用该方法测定了3G1抗体的灵敏度,检测灵敏度达到0.3ng/m L,比同源ELISA方法检测灵敏度(1.6ng/m L)提高了81.25%,并将方法应用于花生中黄曲霉毒素的实际检测。测定结果与高效液相色谱法结果进行比对,结果符合曲线y=1.044 4x+0.090 2,R2=0.975 1,说明该方法能满足花生中黄曲霉毒素快速筛查的测定准确度的要求。
- 李敏马飞李培武张奇张文周海燕印南日王恒玲吴慧
- 关键词：黄曲霉毒素B1人工抗原ELISA
- 农产品与饲料中T-2毒素免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱检测技术研究被引量：6
- 2014年
- 利用T-2毒素单克隆抗体2G7和CNBr活化的Sepharose 4B研制出T-2免疫亲和柱，考察了T-2免疫亲和柱的最佳应用条件。利用免疫亲和柱，建立了农产品与饲料中T-2毒素免疫亲和柱净化/液相色谱-串联质谱（ IAC/LC-MS/MS）确证性检测技术，并考察该方法的准确度和精密度。结果表明，T-2毒素在0.5-500.0 ng/g范围内线性关系良好，相关系数为0.9997，检出限为0.05 ng/g，定量下限为0.17 ng/g。大米、玉米、饲料样品在T-2毒素10，50，100 ng/g的加标水平下，回收率为92.9％-109.7％，相对标准偏差为2.1％-8.3％。对市售36份农产品与饲料样品进行测定，检测结果的相对标准偏差均小于10.0％。
- 李静马飞李培武张奇丁小霞张文
- 关键词：T-2毒素免疫亲和柱
- 抗单端孢霉烯族T-2毒素单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2014年
- 通过将T-2毒素与戊二酸酐在吡啶中反应生成T-2HG中间体(TLC验证大部分的T-2毒素都已转化为T-2HG),然后采用活泼酯法将T-2HG中间体和载体蛋白BSA/OVA共价偶联,紫外扫描结果显示偶联成功。以合成的BSA偶联物(T-2HG-BSA)作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经细胞融合,采用改进的半固体培养基和两步筛选法共筛选到5株性能良好的单克隆细胞株,分别是4F12、2B5、2G7、1D7和4F3。其中2G7所分泌抗体的灵敏度(IC50)0.83μg/kg,分泌抗体的性能稳定,而且与ZEN、AFB1、OTA、DON均无交叉反应或交叉反应率很低。本研究为研发粮油产品中T-2毒素特异性免疫分析技术及产品奠定了重要基础。
- 张宁李培武张奇张文李敏李鑫李冉
- 关键词：T-2毒素单克隆抗体人工抗原灵敏度
- 产后花生黄曲霉毒素污染监测抽样方法研究被引量：2
- 2015年
- 以连续5年全国13个花生主产省产后花生黄曲霉毒素污染监测数据为材料,分析适合我国产后花生黄曲霉毒素污染监测的抽样方法。采用方差分析、回归分析等方法,研究了我国不同花生主产省黄曲霉毒素污染程度与其标准差和变异系数之间的相关性,并以安徽省为例,研究了在一定精确度保证下的最优抽样方案。结果显示:我国各花生主产省产后花生黄曲霉毒素污染水平差异显著,污染程度与样本标准差呈正相关。以安徽省为例,在满足一定抽样精度要求下,最优抽样方案为选取8个花生主产县市,每个县市随机选取8个村,每个村抽取1个样本。
- 都晓慧丁小霞周海燕李培武武琳霞印南日白艺珍
- 关键词：黄曲霉毒素污染监测抽样方法
- 氯化钙对花生中黄曲霉毒素B_1提取及其快速检测结果的影响被引量：2
- 2014年
- 以氯化钙为蛋白沉淀剂、黄曲霉毒素B1为靶标,探究了70%甲醇水(V/V)提取液中不同含量氯化钙对花生中黄曲霉毒素提取及其免疫检测结果的影响;采用样品加标回收的方法,研究比较了五种不同含量氯化钙对胶体金免疫层析试纸条和ELISA检测结果的影响。研究结果表明,样品经含1%CaCl2(m/V)的甲醇水处理后,用胶体金免疫层析试纸条检测时,试纸条T线颜色梯度变化,不同浓度加标回收率等参数均得到明显改善,前处理效果显著;选取20份花生实际样品,经过这种前处理之后,进行胶体金免疫层析试纸条和ELISA检测,同时将其检测结果与免疫亲和层析高效液相色谱法(IAC-HPLC)进行比对,胶体金免疫层析试纸条与IAC-HPLC检测结果符合率为90%,间接竞争ELISA与IAC-HPLC检测结果相关系数达0.996,表明本研究所改进的样品前处理方法能提高免疫检测准确度,具有很好的应用性。
- 李敏陈冉李培武张奇张文王督李冉
- 关键词：花生黄曲霉毒素B1氯化钙胶体金免疫层析
- 农产品中赭曲霉毒素A免疫层析试纸条快速检测技术研究被引量：10
- 2014年
- 基于胶体金免疫层析原理建立了一种快速检测赭曲霉毒素A(ochrotaxin A,OTA)的胶体金试纸条的研制方法,包括胶体金的制备、金标记探针的制备、试纸条各条件参数的测试和优化等。试纸条检测OTA的肉眼可视检测限为0.25ng/mL,检测时间为10min,试纸条能特异性识别OTA而不与赭曲霉毒素B及其他真菌毒素发生交叉反应,使用简单、方便、成本低,重复性好,保质期长,尤其适用于农产品中OTA的现场快速筛查。
- 李鑫李培武张奇张文丁小霞唐晓倩
- 关键词：赭曲霉毒素A胶体金免疫层析试纸条
- 农产品中黄曲霉毒素的时间分辨荧光免疫层析快速检测技术研究被引量：28
- 2014年
- 【目的】黄曲霉毒素严重污染农产品,威胁人畜生命健康,是政府重视、社会关注的一大焦点问题,因此亟需研究建立黄曲霉毒素高灵敏高快速检测方法。目前已研制出高特异性高灵敏度黄曲霉毒素单克隆抗体,本研究旨在应用该抗体,建立黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析快速检测技术,为农产品质量监管、风险评估提供技术支持。【方法】本研究通过将黄曲霉毒素抗体与乳胶铕进行偶联标记,利用自主研制的黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条进行黄曲霉毒素检测,通过检测线T信号值与质控线C信号值的比值和标准溶液浓度的自然对数值实现定量。针对花生、稻米、植物油等不同农产品,研究建立样品粉碎均质提取一体化技术。对铕标记时间分辨荧光免疫层析检测技术进行方法学考核,以花生、稻米、植物油等为例,进行实际样品检测,并与HPLC法进行结果比对。【结果】在花生、稻米、植物油等农产品实际样品检测中,本研究建立的时间分辨荧光免疫层析检测技术检测黄曲霉毒素B1得到检测限均为0.3μg·kg-1,线性范围分别为0.8—25、0.8—15和0.8—30μg·kg-1。上述3种农产品对应的标准曲线的线性方程分别为y=0.238x+0.654(R2=0.992)、y=0.321x+0.811(R2=0.990)和y=0.146x+0.173(R 2=0.993),标准偏差分别为0.024、0.039和0.021。该方法的批内准确度和精密度添加回收试验结果表明,添加回收率在81.0%—113.0%,变异系数在7.2%—14.2%;批间准确度和精密度试验结果显示,添加回收率在75.8%—114.9%,变异系数在7.7%—15.3%。说明该检测技术批内、批间均具有良好的准确度和精密度。该方法与HPLC法检测结果相比,相对误差小于10%,说明黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析技术与行业标准方法检测结果具有良好的一致性。【结论】时间分辨荧光免疫层析检测技术灵敏度高、线性范围宽,重复性和稳
- 张兆威李培武张奇丁小霞
- 关键词：黄曲霉毒素农产品
- 二氧化硅-氧化石墨烯复合物固相萃取-高效液相色谱法检测植物油中黄曲霉毒素B_1、B_2被引量：27
- 2014年
- 以二氧化硅-氧化石墨烯复合物为固相萃取材料,建立了植物油中黄曲霉毒素B1、B2的高效液相色谱（HPLC）检测方法。优化的条件为：复合材料的最佳用量为0.15 g,最佳萃取时间20 min,洗脱溶剂为乙腈,洗脱次数为2次。结果表明,在优化条件下,建立的二氧化硅-氧化石墨烯复合物固相萃取-高效液相色谱法对黄曲霉毒素B1、B2的检出限分别为0.17和0.05μg/L。将本方法应用于植物油实际样品的检测中,加标回收率在81.4%~105.3%之间,相对标准偏差为1.3%~8.6%。
- 王恒玲喻理李培武李敏张奇张文
- 关键词：固相萃取植物油高效液相色谱
- 粮油产品T-2毒素单克隆抗体研制及应用被引量：2
- 2015年
- 以T-2毒素与琥珀酸为原料,通过琥珀酸酐法合成出T-2毒素半抗原T-2HS,再通过活泼酯法,将T-2毒素半抗原分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）共价偶联,合成出T-2毒素人工抗原T-2HSBSA和T-2HS-OVA,以T-2HS-BSA作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经细胞融合和阳性筛选,共获得4株T-2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别是1D6、2A8、2C5和4G3。其中2C5分泌的抗体灵敏度（IC50）最高,达0.13μg/kg,特异性强,与HT-2的交叉反应率仅为4%,与FB1、DON、ZEN无交叉反应。进一步利用该抗体建立了间接竞争ELISA检测方法,最低检测限为0.015μg/kg,检测范围（IC20-IC80）为0.05-57.6μg/kg,该方法对大豆、玉米、花生等粮油产品的检测范围为0.5-576μg/kg,在线性范围内加标回收率为93.5%-107.5%。本研究建立的检测方法可用于大豆、玉米、花生等多种粮油产品中T-2毒素的检测。
- 张亮李培武张奇张文杨青青朱建国
- 关键词：T-2毒素单克隆抗体间接竞争ELISA
