深圳市科技计划项目(201102108)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心中山大学深圳市儿童医院更多>>
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- 甲型H1N1病毒感染BEAS-2B细胞差异蛋白的初步研究
- 2013年
- 目的通过建立2009H1N1流感病毒感染BEAS-2B(人支气管上皮细胞)细胞模型,探讨病毒感染细胞后细胞蛋白质差异变化,为2009H1N1流感病毒的致病机理研究奠定基础。方法 100 TCID50 2009H1N1(D、S、O)流感病毒感染BEAS-2B细胞12、24、48、72h后提取细胞总蛋白进行双向电泳,Image MasterTM 2D Platinum Software 7.0软件分析图像,对有差异的蛋白酶解,质谱分析鉴定差异蛋白。结果质谱共鉴定出包括蛋白酶体α5、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、前纤维蛋白1(profilin-1)、α-2干扰素等13个差异蛋白。结论 13个差异蛋白可能参与了2009H1N1流感病毒的致细胞病变过程。
- 张红宇房师松王婷王昕吕星
- 关键词：BEAS-2B细胞双向电泳差异蛋白
- 双重荧光定量RT-PCR快速检测N1、N2亚型流感病毒的研究被引量：2
- 2012年
- 目的利用荧光定量RT-PCR技术建立快速检测流感病毒N1、N2亚型的方法。方法根据N1、N2亚型流感病毒NA基因的相对保守序列,设计两对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒建立、优化反应体系后,采用十倍稀释体外转录RNA检验建立体系的灵敏度和重复性并建立相对定量标准曲线;利用多种流感病毒和具有相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性。结果 N1、N2亚型流感病毒的检测灵敏度为10拷贝/μl,扩增效率分别为102.21%和101.78%,标准曲线相关系数大于99%,重复性良好,特异度实验未发现有非特异性扩增。结论双重荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确的检测N1、N2亚型流感病毒。
- 黄亮张红宇王婷房师松王昕李健雄程小雯吕星吴春利张仁利程锦泉
- 关键词：流感病毒
- 双重荧光定量RT-PCR快速检测流感病毒H1、H3亚型的研究被引量：3
- 2012年
- 目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测流感病毒H1、H3亚型的方法。方法根据H1、H3亚型流感病毒HA基因的相对保守序列,设计两对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒建立优化反应体系后,将荧光定量RT-PCR的产物采用10倍稀释法,即107～100copies/μl,再次用荧光定量PCR方法检验建立体系的灵敏度和重复性,并建立相对定量标准曲线;利用多种流感病毒和具有相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性。结果 H1和H3亚型流感病毒的检测灵敏度为102copies/μl,扩增效率分别为101.35%和113.28%,标准曲线相关系数大于99%,重复性良好,特异度实验未发现有非特异性扩增。结论本研究建立的双重荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确地检测H1、H3亚型流感病毒。
- 肖丽霞刘涛李健雄王婷房师松
- 关键词：流感病毒H3亚型荧光定量RT-PCR
- B型流感病毒Yamagata系和Victoria系双重荧光PCR诊断方法的建立与应用被引量：1
- 2012年
- 目的建立一种新型的双重荧光PCR诊断方法，用于B型流感病毒By（B／Yamagata）和Bv（B／Victoria）亚系的准确分子分型。方法从GenBank随机下载By和By HA（hemagglutinin）基因各50条序列，通过MEGA分析，利用Primer Primer软件设计亚系特异性引物和通用探针，建立双重荧光PCR诊断方法。用HAI（hemagglutination inhibition）实验确认的B型流感病毒亚系分离毒株和A型流感病毒进行特异性验证，用体外转录核酸拷贝数进行灵敏度实验。结果2006--2010流感监测年份，对17765份流感样病例咽拭标本中分离到B型流感病毒793株，本方法鉴定有152株By和641株Bv病毒，与HAI鉴定结果一致。本诊断方法的检测特异性达100％，灵敏度达102拷贝／μl，重复性变异系数〈3．5％。结论本研究所建立的荧光PCR方法为流感实时监测提供了有力的技术支撑，适合于流感监测实验室对流感病毒的快速分子诊断。
- 房师松李娟王昕刘涛程小雯吕星吴春利郑青张仁利程锦泉
- 关键词：流感病毒聚合酶链反应荧光抗体技术
- 双碱基延伸法结合荧光偏振法快速检测新甲型H1N1耐药位点方法的建立
- 2014年
- 目的建立一种利用双碱基延伸法与荧光偏振技术(Fluorescence polarization,FP)快速检测甲型H1N1流感病毒NA基因耐药突变位点的新方法。方法从GenBank随机下载30条甲型H1N1的NA(neuraminidase)基因序列,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计3条特异引物,其中一对引物通过RT-PCR用于扩增含有耐药位点H275Y的NA基因,第3条引物是应用双碱基延伸终止法与荧光偏振技术检测NA基因对达菲类药物耐药位点H275Y的突变情况,再随机选取50株甲型H1N1流感病毒进行检测,与测序结果进行比对,验证检测结果的准确性。结果 50株甲型H1N1流感病毒的NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸,未发生H Y的替换,在灵敏度与特异性方面,与传统的基因测序结果一致性均达100%。结论本方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,能实现对耐药位点突变的快速、准确检测,可应用于与SNP相关疾病的快速分型和突变位点的实时监测和临床检测。
- 房师松柴燕文王昕吕星吴春利程小雯张仁利薛红程锦泉
- 关键词：NA基因SNP荧光偏振
