国家自然科学基金(30200258)
- 作品数：13 被引量：23H指数：3
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- pCDR1 Th表位和CTLA4Ig双基因共表达真核表达载体的构建
- 2008年
- 目的构建能稳定表达pCDR1 Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体,探讨其在小鼠体内的表达并对表达产物进行鉴定。方法用Touchdown PCR法扩增CTLA4Ig基因,同时引入pCDR1Th表位。将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA4Ig-pCDR1。将构建表达CTLA4Ig-pCDR1减毒鼠伤寒沙门菌SL7207喂饲BALB/c小鼠,取脾脏进行免疫组化鉴定重组蛋白在动物体内的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。重组蛋白在BALB/c小鼠脾脏免疫细胞胞浆中有阳性表达。结论成功构建了能稳定表达pCDR1 Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体。
- 周春丽郝进李强郝飞
- 关键词：TH表位基因表达
- 系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞核小体释放水平及其临床意义被引量：9
- 2003年
- 目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)释放核小体的水平变化及其与自身抗体、病情活动度的关系。方法应用ELISA方法检测SLE患者PBMC裂解上清液核小体及其血清自身抗体水平,用SLEDAI积分法评估SLE活动度。结果活动期SLE患者PBMC释放核小体的平均水平为(39.39±25.70)IU/mL,明显高于正常人对照组(11.73±7.87)IU/mL和静止期SLE患者(13.44±8.82)IU/mL,并且与其凋亡率呈显著正相关(r=0.83,P<0.001);SLE患者PBMC的核小体释放水平与SLEDAI积分数、ds鄄DNA抗体水平和补体C3降低水平均呈显著正相关(P值分别<0.01、0.01和0.05)。结论SLE患者PBMC凋亡产生的核小体水平变化与SLE临床病情活动程度密切相关,提示核小体可能是诱导SLE发病的重要抗原之一。
- 郝进郝飞钟白玉徐云升唐书谦龚小云叶庆佾
- 关键词：SLEDAIPBMC核小体外周血单一核细胞病情活动
- 核小体诱导BALB/c小鼠产生狼疮肾的研究被引量：10
- 2004年
- 目的了解核小体在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法用蔗糖连续密度梯度离心法从新鲜鸡血红细胞中提取核小体,皮下免疫BALB/c小鼠,采集小鼠血清和肾脏标本。ELISA方法检测其IgG型dsDNA抗体和ANA抗体水平;直接免疫荧光检测小鼠肾脏IgG型免疫复合物的沉积情况;组织病理观察小鼠肾脏损伤情况。结果核小体免疫后14d,BALB/c小鼠血清中开始出现IgG型dsDNA抗体和ANA抗体,其滴度随时间延长逐渐升高;核小体免疫后35d,小鼠肾脏出现大量IgG型免疫复合物沉积,光镜观察显示有明显肾脏损伤。对照组小鼠无明显自身抗体产生和肾脏病变。结论核小体可以诱导正常小鼠产生SLE样征候群,提示核小体参与SLE的发病。
- 郝进郝飞钟白玉唐书谦潘峰苟俊徐云升
- 关键词：核小体BALB/C小鼠系统性红斑狼疮肾脏损伤并发症
- 核小体的提取纯化及鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的 探索一种操作简便、实用的核小体提取方法。方法 取无菌新鲜鸡血 ,提取细胞核 ,用葡萄球菌核酶消化后裂解、离心 ,获得上清组分用连续性密度梯度蔗糖进行分离 ,收集分子量 3 5 0bp左右的组分。结果 2 %琼脂糖电泳显示该组分含有长度为 15 0bp的双链DNA ,15 %SDS PAGE电泳显示该组分含有组蛋白H2A、H2B、H3和H4;本实验分离的核小体在 0℃条件下存放 4周未见DNA成分和组蛋白成分发生解聚。结论 该方法可以正确的分离出核小体 ,且具有良好的稳定性 ,为深入研究核小体在SLE自身抗体产生中的作用打下基础。
- 钟白玉郝进郝飞徐云升
- 关键词：核小体纯化
- 人CTLA-4Ig融合基因减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2006年
- 目的构建能稳定表达人CTLA4 Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,探讨其在哺乳动物细胞中的表达并对表达产物进行鉴定。方法用touchdown PCR法扩增CTLA-4 Ig融合基因,将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA-4 Ig,用电穿孔仪转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207。将表达质粒转染COS-7细胞,SDS-PAGE、W estern b lot检测转染细胞裂解上清中目的蛋白的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。在pcDNA3.1(+)-CTLA-4 Ig质粒转染后48 h细胞裂解上清中,检测到CTLA-4 Ig融合蛋白的表达,该蛋白能与抗人CTLA-4单抗特异结合。结论成功构建了能稳定表达人CTLA4 Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,并在哺乳动物细胞中成功表达有生物学活性的重组人CTLA-4 Ig蛋白。
- 周春丽郝进唐书谦钟白玉吴军贺伟峰郝飞
- 关键词：CTLA-4IG减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体基因表达
- 表达核小体Th表位减毒鼠伤寒沙门菌株的构建被引量：1
- 2006年
- 目的:构建表达核小体Th表位(H2B14-28)的口服减毒鼠伤寒沙门菌株。方法:将H2B14-28基因插入原核表达载体pYA3149中,构建重组质粒pH2B(pYA3149-H2B14-28)后,转入鼠沙门菌株X4550,斑点印迹鉴定表位肽的表达。观察X4550(pH2B)体内外携带重组质粒的稳定性。结果:酶切鉴定和基因测序显示pH2B构建成功。斑点印迹证实表位肽的表达。重组菌株在体内、外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖。结论:成功构建了能稳定表达核小体Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株,为进一步直接应用减毒鼠伤寒沙门菌活菌苗在肠道内表达抗原诱导SLE免疫耐受奠定基础。
- 周春丽郝进唐书谦钟白玉叶庆佾邓军曾韦锟郝飞
- 关键词：伤寒沙门菌减毒TH表位核小体
- 静脉应用核小体H2B表位肽防治小鼠实验性系统性红斑狼疮的研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨静脉途径应用基于核小体的表位肽防治系统性红斑狼疮(SLE)的可行性。方法以凋亡细胞诱导的SLE样症状小鼠为模型,用核小体表位肽H2B14￣28静脉途径诱导小鼠免疫耐受,观察实验小鼠自身抗体产生情况以及SLE样临床症状改善情况。结果用表位肽H2B14￣28诱导免疫耐受以后,可显著降低实验小鼠抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNP抗体和抗心磷脂(ACL)抗体的产生,同时显著改善小鼠蛋白尿、白细胞低下、肾脏免疫复合物沉积程度和病理损伤程度。结论静脉途径应用核小体表位肽H2B14￣28可有效阻止实验性SLE病变的形成,基于核小体表位肽的肽疫苗的研究有可能为SLE的防治开辟一条全新的思路和途径。
- 郝进郝飞钟白玉唐书谦杨希川徐云升叶庆佾
- 关键词：静脉核小体小鼠系统性红斑狼疮自身抗体
- 重组核小体通用性Th表位诱导系统性红斑狼疮样小鼠模型口服免疫耐受被引量：2
- 2009年
- 目的探讨直接应用活菌苗在肠道内表达核小体通用性Th表位抗原诱导系统性红斑狼疮（SLE）样小鼠模型口服免疫耐受的可行性。方法以同系凋亡淋巴细胞免疫BALB／c小鼠制备SLE样小鼠模型，喂饲构建的重组减毒鼠伤寒沙门菌菌株进行口服免疫耐受的诱导。观察SLE样小鼠模型血清抗核抗体（ANA）、抗双链DNA抗体（抗ds—DNA抗体）和抗核小体抗体等自身抗体、白细胞、蛋白尿和肾脏损伤情况。结果成功制备了SLE样小鼠模型。与对照组相比，CTLA4-Ig—H2B组小鼠ANA、ds．DNA和抗核小体抗体等自身抗体的水平均较低，白细胞减少和蛋白尿明显改善，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。CTLA4-Ig—H2B组小鼠肾小球内免疫复合物沉积强度明显轻于CTLA4-Ig组和H2B组，差异均有统计学意义[积分（1．35±0．16）分比（1．66±0．23）分和（1．69±0．24）分，均P〈0．05]。CTLA4-Ig—H2B组肾小球病婵损害积分与CTLA4-Ig组和H2B组比较，差异均有统计学意义[（1．26±0．14）分比（1．73±0．25）分和（1．71±0．20）分，均P〈0．05]。结论利用减毒鼠伤寒沙门菌携带核小体Th细胞表位肽H2B14-28诱导SLE的口服免疫耐受足可行的，这为口服诱导免疫耐受防治SLE提供了一个新的途径。
- 周春丽郝进唐书谦钟白玉郝飞
- 关键词：核小体免疫耐受
- 自身免疫病治疗性肽疫苗的研究现状及展望
- 2005年
- 郝进郝飞
- 关键词：肽疫苗治疗性自身免疫病AID耐受生物学方法
- 重组pCDR1 Th表位诱导SLE口服免疫耐受的实验研究
- 2009年
- 目的探讨直接应用活菌苗在肠道内表达pCDR1Th表位抗原诱导SLE口服免疫耐受的可行性。方法以同系凋亡淋巴细胞免疫BALB/c小鼠制备SLE样症状小鼠模型,喂饲构建的重组SL7207菌株进行免疫耐受的诱导。观察血清ANA、ds-DNA和抗核小体抗体等自身抗体、白细胞、蛋白尿和肾脏损伤情况。结果成功制备了SLE鼠模型。与阴性对照组相比,CTLA4-Ig-pCDR1能明显降低实验小鼠ANA、ds-DNA和抗核小体抗体等自身抗体的水平,对白细胞减少和蛋白尿有明显的改善作用,对肾脏损伤有明显的保护作用。结论利用减毒鼠伤寒沙门菌携带pCDR1Th表位诱导SLE的口服免疫耐受是可行的,这为口服诱导免疫耐受防治SLE提供了一个新的途径。
- 周春丽郝进唐书谦钟白玉郝飞
- 关键词：TH表位CTLA4-IG减毒鼠伤寒沙门菌口服免疫耐受
