国家自然科学基金(30200282)
- 作品数：7 被引量：135H指数：5
- 相关作者：孙建国陈正堂廖荣霞王志新张青更多>>
- 相关机构：第三军医大学新桥医院第三军医大学解放军第458医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Livin异构体基因转染对肺腺癌A549细胞生长及放化疗敏感性的影响被引量：29
- 2005年
- 目的研究转染Livin α、β两种异构体基因对肺腺癌A549细胞生长及放、化疗敏感性的影响.方法基因转染获得稳定表达Livin α和β的A549细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应及免疫荧光化学法了解Livin α、β在转染细胞中基因水平和蛋白水平的表达情况;用平板克隆形成实验研究细胞生长情况;甲基偶氮唑蓝法研究细胞对放、化疗的敏感性;细胞周期分析法了解细胞凋亡情况.结果与转染前比较,基因转染后,阳性细胞尤其是表达Livin α的A549细胞克隆形成能力提高约20%、倍增时间缩短5～6 h(P<0.05),对多种化疗药物和放射线敏感性降低(P<0.01),10 Gy放射线照射下仅有0.2%细胞发生凋亡.结论 Livin尤其是Livin α参与肺癌的发生发展,是肺癌细胞对放、化疗耐受的重要机制之一.
- 孙建国廖荣霞陈正堂王志新张青胡义德王东林
- 关键词：基因转染技术脱噬作用LIVIN
- 凋亡抑制蛋白Livin两种异构体真核表达载体的构建及表达鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR获得Livin基因异构体全长cDNA序列,TA克隆将Livin全长cDNA序列克隆到T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切取所需目的片段,然后将该片段插入真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,最后对产生的重组子进行双酶切、PCR鉴定,并经过测序证实后,构建成为Livin基因异构体表达载体(pcDNA3.1-Livin)。电穿孔法获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆,Westernblot验证Livin蛋白在转染细胞中的表达情况。结果成功获得Livinα和Livinβ全长cDNA序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;基因转染后,阳性细胞分别表达Livinα和β。结论Livin基因两种异构体真核表达载体的构建及在细胞中的表达鉴定,为进一步研究Livin异构体功能及在肺癌细胞中的抗凋亡效应奠定了基础。
- 孙建国陈正堂王志新张青廖荣霞
- 关键词：凋亡抑制蛋白LIVIN凋亡真核表达载体
- 一种新的凋亡抑制蛋白Livin在非小细胞肺癌组织中的表达被引量：71
- 2004年
- 目的 探讨一种新的凋亡抑制蛋白 (inhibitorofapoptosisprotein ,IAP)Livin两种异构体Livinα和Livinβ在非小细胞肺癌 (NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC组织类型、放化治疗的关系。方法 采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)检测NSCLC组织中Livinα和LivinβmRNA的表达 ,并用westernblot分析Livin蛋白的表达。 结果 4 8例NSCLC组织中Livin表达阳性率为 2 2 .9% ,其表达与NSCLC组织学类型相关 ,腺癌中Livin表达阳性率达 4 5 .5 % ,明显高于鳞癌和大细胞癌 (P <0 .0 1 ) ,而癌旁组织和良性疾病肺组织未检出阳性结果 ;Livin表达还与肿瘤治疗相关 ,放化治疗可明显诱导Livin表达 (P <0 .0 1 )。结论 Livin异构体在非小细胞肺癌组织中表达 ,作为肺腺癌的分子标志物 。
- 孙建国廖荣霞陈正堂王志新张青伍伟玲
- 关键词：凋亡抑制蛋白LIVIN非小细胞肺癌
- 小鼠肝脏特异的微RNA真核表达载体的构建及鉴定被引量：10
- 2004年
- 目的 利用分子克隆技术 ,构建微RNA(microRNA ,miRNA)真核细胞载体。方法 人工合成小鼠肝脏特异的微RNA(miR 1 2 2 )前体基因序列 ,并添加酶切位点及 polyT转录终止序列 ,经退火处理后形成双链结构 ,插入小干涉RNA(smallin terferingRNA ,siRNA)表达载体 pAVU6 +2 7中 ,经酶切鉴定和测序证实后 ,构建成为miR 1 2 2真核表达载体 (pAVU6 +2 7 mir1 2 2 )。结果 合成的基因序列完全正确并成功克隆到真核表达载体pAVU6 +2 7上。结论 miR 1 2 2真核表达载体的构建 ,为进行真核细胞转染及miR 1 2
- 廖荣霞孙建国陈正堂周建新
- 关键词：微RNA小干涉RNA真核表达载体
- Livin异构体特异性基因沉默诱导肺腺癌SPC-A1细胞凋亡被引量：18
- 2005年
- 目的:利用基因转染和RNA干涉(RNAi)技术,在SPC-A1细胞中建立Livin异构体α和β特异的基因沉默体系,探讨其在诱导SPC-A1细胞凋亡效应中的不同作用及价值。方法:在肺腺癌SPC-A1细胞中稳定表达Livinα+β、Livinα和Livinβ特异性小干涉RNA(siRNA),观察SPC-A1细胞形态、增殖等生物学行为的改变,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:Livinα+β、Livinα和Livinβ基因沉默后,SPC-A1细胞克隆形成能力较对照组显著下降(P<0.05);转染后SPC-A1细胞发生凋亡,TUNEL法显示细胞凋亡指数分别为(9.20±1.90)%、(6.75±1.20)%和(4.82±1.20)%,(流式细胞仪检测)细胞凋亡率分别为(7.48±1.30)%、(5.50±0.90)%和(4.16±0.70)%。结论:Livinα和β两种异构体均能作为诱导肺癌细胞凋亡的分子靶点,Livin基因沉默靶向诱导肺癌细胞凋亡可能作为手术、化疗、放疗等传统治疗的辅助手段。
- 孙建国廖荣霞陈正堂王志新张青胡义德
- 关键词：凋亡抑制蛋白LIVIN凋亡基因沉默RNA干涉
- Livin异构体特异性siRNA表达载体的构建及其在SPC-A1细胞中的稳定表达被引量：20
- 2006年
- 目的利用基因转染和RNA干涉(RNAinterference,RNAi)技术在肺腺癌SPC-A1细胞株中分别建立2种Livin异构体的基因沉默体系,旨在进一步体外观察两种异构体基因沉默诱导SPC-A1细胞凋亡效应。方法构建Livin两种异构体小干涉RNA(small interfering RNA,si RNA)表达载体;以电穿孔法转染SPC-A1细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆;通过半定量RT-PCR和Western blot验证Livin异构体在SPC-A1细胞中的基因沉默效率,建立高效Livin异构体基因沉默体系。结果成功获得Livin异构体si RNA表达载体,经基因转染以及G418抗性筛选,成功建立Livin异构体特异基因沉默SPC-A1细胞克隆。结论RNAi能高效特异阻断两种Livin异构体表达,为进一步研究其不同的抗凋亡生物学功能,探讨其作为诱导肺癌细胞凋亡治疗分子靶点以及提高肺癌细胞放化疗敏感性打下基础。
- 孙建国廖荣霞陈正堂王志新张青胡义德王东林粟永萍
- 关键词：肺肿瘤腺癌RNA干扰SPC-A1细胞
- Livin异构体基因沉默对肺腺癌SPC-A1细胞化疗增敏效应研究被引量：2
- 2007年
- 背景与目的前期研究发现,凋亡抑制蛋白家族(IAP)新成员Livin尤其是Livinα,参与肺癌的发生发展,是肺癌细胞化疗耐药的重要机制之一。本研究的目的是利用基因转染和RNA干涉(RNAi)技术,在肺腺癌SPC-A1细胞中建立Livin异构体α和β特异的基因沉默体系,探讨其对增加SPC-A1细胞化疗敏感性的不同作用及价值。方法在SPC-A1细胞中稳定表达Livinα+β、Livinα和Livinβ特异性小干涉RNA(siRNA),体外实验用甲基偶氮唑蓝(MTT)法,研究Livin基因沉默后SPC-A1细胞对化疗药物的敏感性改变;体内实验利用荷瘤裸鼠模型,研究Livin基因沉默后荷瘤小鼠对顺铂的敏感性改变。结果Livinα+β、Livinα和Livinβ基因沉默后,SPC-A1细胞对顺铂、卡铂、环磷酰胺、阿霉素等多种化疗药物敏感性增加(P<0.05),其中,Livinα+β基因沉默能更有效增加肺癌细胞化疗敏感性(P<0.01)。动物实验表明,pSilencer-Livinα+β组、pSilencer-Livinα组和pSilencer-Livinβ组抑瘤率分别为146.1%、130.7%、110.5%。结论Livin异构体尤其是Livinα+β可作为肺癌细胞化疗增敏的分子靶点,其基因沉默有望成为非小细胞肺癌基因治疗新手段。
- 孙建国廖荣霞陈正堂王志新张青胡义德
- 关键词：凋亡抑制蛋白LIVIN凋亡基因沉默肿瘤耐药
