国家自然科学基金(30200249)
- 作品数：26 被引量：95H指数：8
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- HSPCO16重组蛋白对毛乳头细胞增殖的影响被引量：3
- 2007年
- 目的观察HSPCO16重组蛋白对培养的低/高传代毛乳头细胞(DPC)的影响。方法消化对数期生长的第2代和第7代DPC,调整细胞浓度为3×105细胞/mL,接种于24孔细胞培养板;至对数生长期时加入HSPCO16重组蛋白,调整浓度为0.1mg/mL继续培养,倒置显微镜下定期观察;一组细胞采用流式细胞仪进行检测;另一组细胞内加入3H-TdR继续孵育6h,消化收集细胞,检测HSPCO16重组蛋白对DPC增殖的影响。结果HSPCO16重组蛋白处理的DPC增殖活跃,生长状态明显好于对照组;流式细胞仪分析和3H-TdR掺入试验均证实重组HSPCO16蛋白可促进第8代DPC的增殖及其DNA合成,而对第3代DPC则无明显作用。结论HSPCO16重组蛋白具有促进高传代DPC增殖的作用,可能是一种新的促进毛囊生长蛋白。
- 夏汝山郝飞尹锐宋志强邹锋钟白玉
- 关键词：流式细胞仪^3H-TDR掺入
- 抗人毛乳头细胞造血干细胞016基因多克隆抗体的制备
- 2006年
- 目的:在大肠杆菌中重组表达人毛乳头细胞造血干细胞(HSPC)016基因功能序列,制备特异性多克隆抗体。方法:采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出目的基因克隆至pMD18-T载体,酶切回收目的片段连接至表达载体pET-28a(+)。重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coliBL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定后免疫日本大耳白兔,制备兔抗HSPC016多抗血清,以双向免疫扩散、ELISA、Westernblotting检测抗体效价及特异性。结果:在大肠杆菌中高效表达了相对分子质量约7200的HSPC016蛋白,目的蛋白N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致。双向免疫扩散显示兔抗HSPC016多克隆抗体效价为1∶16;ELISA分析兔抗HSPC016血清的滴度可达320000EU;Westernblotting显示抗血清可与原核表达的HSPC016蛋白特异结合。结论:成功制备了兔抗HSPC016多抗血清,为进一步研究HSPC016蛋白的结构与生物学意义奠定了基础。
- 邹锋郝飞宋志强易勇翟志芳邹全明叶庆佾
- 关键词：人毛乳头细胞原核表达抗体
- 抑制性消减杂交筛选生长期毛乳头细胞差异表达基因被引量：11
- 2004年
- 目的应用抑制性消减杂交构建生长期毛囊毛乳头细胞(DPC)差异表达cDNA消减杂交文库,从中克隆鉴定出差异表达基因。方法分别从生长期DPC及休止期DPC提取总RNA;采用SMARTcDNA合成技术合成cDNA,进行2次消减杂交及2次抑制性PCR;将产物与T/A载体连接构建生长期毛囊DPC的cDNA消减文库,通过反向RNA印迹杂交验证阳性克隆,测序并登录基因库寻找同源性基因。结果成功构建了毛囊生长期DPC消减文库,并获得35个阳性克隆,其中功能已知基因22个,功能未知基因13个。结论抑制性消减杂交技术是一种高效的筛选差异基因的方法,并可用于小量临床标本研究,本实验所发现的生长期DPC差异表达基因对今后研究毛囊生长调控可能具有重要意义。
- 杨希川郝飞杨卫兵宋志强程波钟白玉向明明
- 关键词：差异表达基因毛乳头细胞消减文库未知基因CDNA合成
- 条件培养基对高传代人毛乳头细胞生长的影响被引量：12
- 2004年
- 目的研究人毛乳头细胞条件培养基的生物学活性。方法通过体外培养低传代人毛乳头细胞,收集其基础培养基的上清液配制成条件培养基,用于培养高传代人毛乳头细胞,观察细胞形态及细胞生长曲线的变化;同时观察高传代人毛乳头细胞与低传代人毛乳头细胞共培养情况。结果低传代条件培养基使高传代人毛乳头细胞出现了凝集生长现象,其生长曲线显著优于基础培养基培养的高传代毛乳头细胞(P<0.01),其细胞的3H鄄TdR测定值亦显著升高(P<0.01)。高传代人毛乳头细胞与低传代人毛乳头细胞共培养后出现凝集性生长趋势。结论低传代人毛乳头细胞在培养状态下可分泌具有明确生物学活性的物质。
- 罗洋郝飞钟白玉麦跃姜晓勇
- 关键词：毛乳头细胞条件培养基传代^3H-TDR凝集性生长
- 人毛乳头细胞条件培养液治疗雄激素源性脱发的临床观察被引量：3
- 2009年
- 目的:观察人毛乳头细胞条件培养液治疗雄激素源性脱发患者的临床疗效。方法:用人毛乳头细胞条件培养液皮下注射16例雄激素源性脱发患者的脱发区,每周1次,共4次。结果:人毛乳头细胞条件培养液治疗过的雄激素源性脱发区,可见到重新生长的毳毛和终毛。结论:人毛乳头细胞条件培养液对雄激素源性脱发患者有明显的治疗作用。
- 罗洋郝飞杜华鞠英王洁
- 关键词：雄激素源性脱发
- 人毛乳头细胞生长相关蛋白作用下细胞VEGF的表达被引量：8
- 2004年
- 目的研究人毛乳头生长相关蛋白作用下不同代人毛乳头细胞VEGF的表达。方法通过体外培养低传代的人毛乳头细胞,收集其上清配制成条件培养基,用此条件培养基培养高传代人毛乳头细胞,通过RT-PCR观察各代毛乳头细胞的VEGF变化。结果用低传代人毛乳头细胞的上清液培养过的9代人毛乳头细胞的VEGF表达不仅明显好于对照组(P<0.01),而且明显好于基础培养基作用下的7代人毛乳头细胞的VEGF表达(P<0.01)。结论低传代人毛乳头细胞的培养液在体外能明显地促进VEGF的表达。
- 罗洋郝飞钟白玉麦跃姜晓勇
- 关键词：人毛乳头细胞生长相关蛋白VEGF体外培养
- 人毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因cDNA文库的构建被引量：4
- 2003年
- 目的 构建毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因的消减cDNA文库。方法 分别提取凝集性生长和非凝集性生长状态下毛乳头细胞中的总RNA ,应用SMARTcDNA合成技术和抑制性消减杂交技术分离毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因的cDNA片段并建立消减cDNA文库 ;利用PCR对随机挑选的 10 0个白色菌落进行插入片段的验证 ,对其中证实有插入片段的 3 0个克隆进行cDNA斑点杂交验证。结果 所构建的消减cDNA文库扩增后得到 3 2 0个阳性克隆 ,随机挑选的 10 0个阳性克隆中 95 %的均有长度在 10 0～ 60 0bp的插入片段 ,cDNA斑点杂交验证显示 2 7个( 90 0 % )克隆为阳性。结论 结合SMARTcDNA合成技术 ,应用抑制性消减杂交成功地构建了毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因消减cDNA文库 。
- 宋志强郝飞杨希川杨卫兵程波麦跃叶庆佾
- 关键词：毛乳头细胞抑制性消减杂交文库
- 毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因的筛选及分析被引量：21
- 2003年
- 目的筛选和分析毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因。方法分别提取凝集性生长和非凝集性生长状态下毛乳头细胞中的总RNA,应用SMARTcDNA合成技术和抑制性消减杂交技术分离毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因的cDNA片段,并构建消减cDNA文库,通过PCR筛选、cDNA斑点杂交验证、测序和同源性检索对差异表达基因进行分析。结果成功地构建了毛乳头细胞凝集性生长差异表达cDNA文库。通过对毛乳头细胞凝集性生长状态差异表达基因文库的筛选、克隆,证实毛乳头在体外凝集性生长状态下可以特异表达与细胞同源凝集、生长调控、分化发育及信号转导相关的基因,包括已知基因(如加帽蛋白、palladin,VEGF)、造血干细胞分化相关基因(HSPC011、HSPC016)及1条新基因。结论毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因消减cDNA文库的构建,为进一步筛选和克隆毛乳头细胞凝集性生长相关基因奠定了基础。在凝集性生长状态下,多种基因可能协同作用,参与毛乳头细胞生长调控和功能发挥。
- 宋志强郝飞杨希川钟白玉杨卫兵麦跃叶庆佾
- 关键词：毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因基因序列分析基因克隆
- HSPC016的表达、纯化与生物学活性分析
- 2007年
- 目的:测定大肠杆菌中造血干细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC)016融合蛋白的表达,纯化及其生物学活性。方法:采用PCR技术从pET-28a(+)/HSPC016中扩增出目的基因HSPC016重组到质粒pET-22b(+)中,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍离子亲和层析和分子筛法纯化;用胰蛋白酶消化对数期生长的第3代和第9代DPC,细胞记数法记录生长曲线。结果:原核表达载体pET-22b(+)/HSPC016在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白表达率约28%,纯化后纯度达95%以上;经重组蛋白处理的DPC增殖活跃;细胞记数结果初步证实HSPC016重组蛋白能促进第9代DPC的增殖及其DNA合成,对第3代DPC无明显作用。结论:HSPC016基因在大肠杆菌中得到了高效表达;HSPC016重组蛋白具有促进高传代DPC增殖的作用。
- 邹锋郝飞易勇邹全明宋志强杨希川叶庆佾
- 关键词：生物学活性
- 应用抑制性消减杂交技术从斑秃脱发区毛乳头中克隆出一条自身抗原基因被引量：2
- 2004年
- 目的 寻找斑秃脱发区毛乳头中特异表达的基因片段 ,探讨斑秃发病机制。方法 应用抑制性消减杂交构建斑秃脱发区毛乳头差异表达基因的cDNA文库 ,并通过PCR筛选、杂交验证和同源性检索对差异表达基因进行分析。结果 成功建立了高消减效率的斑秃脱发区毛乳头cDNA消减文库 ,并克隆到一条斑秃毛乳头特异表达的基因片段DP3( 3 0 7bp) ,应用cDNA斑点杂交及Northern杂交证实它仅在脱发区毛乳头特异表达 ,同源性检索其为一条甲状腺相关的自身抗原基因。结论 DP3在斑秃脱发区毛乳头的特异表达提示其可能参与斑秃的发病过程 。
- 宋志强郝飞杨希川钟白玉杨卫兵叶庆佾
- 关键词：斑秃毛乳头CDNA文库
