陕西省中医药管理局科研基金(2009jc53)
- 作品数：7 被引量：42H指数：4
- 相关作者：闻勤生刘震雄赵曙光李强王旭霞更多>>
- 相关机构：第四军医大学唐都医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 姜黄素诱导Nrf2核转位对氧化应激诱导人肝细胞胰岛素抵抗的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:研究姜黄素诱导转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)核转位对氧化应激诱导人肝细胞L02胰岛素抵抗的影响。方法:用15μM和30μM姜黄素干预L02肝细胞6 h和l2 h,Western blot检测Nrf2核转位水平;将肝细胞分为对照组、模型组、干预组,对照组用RPMI1640正常培养,模型组用100U/L葡萄糖氧化酶(GO)干预2 h,干预组用15μM和30μM姜黄素分别干预12h后给予100U/LGO干预2h,各细胞均给予100nM胰岛素干预30min。流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS),用荧光强度(FI)来表示ROS水平。分光光度法检测检测细胞MDA、GSH,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测细胞培养液中葡萄糖的水平,Western blot检测胰岛素受体底物-1(IRS-1)磷酸化水平。结果:①姜黄素明显诱导Nrf2核转位。②模型组FI、MDA水平较对照组显著升高(P<0.01),干预组FI、MDA水平均较模型组显著降低(P<0.01),姜黄素15μM组FI、MDA水平高于30μM组(P<0.01)。模型组GSH水平较对照组显著降低(P<0.01),干预组GSH水平较模型组显著升高(P<0.01),姜黄素15μM组FI、MDA水平高于30μM组(P<0.01)。③模型组上清液葡萄糖浓度显著高于对照组(P<0.01),干预组上清液葡萄糖浓度显著低于模型组(P<0.01),姜黄素15μM组上清液葡萄糖浓度高于30μM组(P<0.01)。模型组IRS-1磷酸化水平较对照组降低,干预组IRS-1磷酸化水平均较模型组增高,姜黄素30μM组IRS-1磷酸化水平高于15μM组。结论:姜黄素通过诱导Nrf2核转位,降低细胞内氧化应激水平,进而逆转氧化应激诱导的胰岛素抵抗。
- 赵曙光李强王景杰王旭霞刘震雄闻勤生
- 关键词：NRF2姜黄素氧化应激胰岛素抵抗
- 姜黄素对人肝细胞氧化应激及胰岛素抵抗的影响被引量：8
- 2010年
- 目的采用葡萄糖氧化酶(GO)制备人肝细胞(LO2)氧化应激及胰岛素抵抗模型,观察姜黄素对LO2中氧化应激水平及胰岛素抵抗的影响。方法将人肝细胞LO2分成对照组、模型组、干预组。对照组正常培养,未给予GO和姜黄素干预,模型组先加入不含姜黄素的细胞培养液培养12h,然后加入100mU/mlGO干预2h,制备细胞氧化应激模型;干预组加入含30μmol/L姜黄素的培养液干预12h,然后给予100mU/mlGO干预2h。免疫荧光法观察LO2细胞Nrf2核转位情况,分光光度法检测细胞丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平,速率法检测细胞培养液AST和ALT的水平,流式细胞术检测细胞内ROS水平的变化。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)检测上清液中葡萄糖的含量。结果①模型组MDA、AST、ALT、ROS阳性细胞荧光强度较对照组显著升高(P<0.01),干预组MDA、AST、ALT、ROS阳性细胞荧光强度较模型组显著降低(P<0.01);模型组GSH较对照组显著降低(P<0.01),干预组GSH较模型组显著升高(P<0.01)。②姜黄素能够诱导Nrf2的核转位,12h作用优于6h。③模型组葡萄糖水平较对照组显著增高(P<0.01),干预组葡萄糖水平较模型组显著降低(P<0.01)。结论姜黄素能够降低细胞内活性氧的水平,减轻细胞氧化应激损伤,进而改善肝细胞胰岛素抵抗。
- 李强赵曙光王旭霞刘震雄严慧闻勤生
- 关键词：姜黄素氧化应激胰岛素抵抗
- 姜黄素诱导Nrf2核转位对脂多糖引起库普弗细胞分泌炎症细胞因子的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:研究姜黄素诱导大鼠Kupffer细胞Nrf2核转位对脂多糖(LPS)引起的炎症细胞因子分泌的影响。方法:分别用10μM、20μM和30μM干预Kupffer细胞8h,诱导Nrf2核转位水平;将Kupffer细胞随机分为对照组、LPS组和干预组,对照组正常培养未加姜黄素和LPS,LPS组用10μg/mL的LPS加入Kupffer细胞培养液共同培养2 h;干预组用30μM姜黄素干预8h后,余处理同LPS组。Western blot检测Nrf2核转位水平,分光光度法检测细胞MDA、GSH水平,ELISA法检测上清液TNF-α和IL-6,放免法检测IL-1β。结果:①姜黄素诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,核转位水平随浓度增加而增高。②LPS组MDA水平较对照组显著升高(P<0.01),干预组MDA水平较LPS组显著降低(P<0.01),仍显著高于对照组(P<0.01)。LPS组GSH水平较对照组显著降低(P<0.01),干预组GSH水平较LPS组显著升高(P<0.01),仍显著低于对照组(P<0.01)。③LPS组上清液TNF-α,IL-1β和IL-6显著高于对照组(P<0.01),干预组均显著低于模型组(P<0.01),但显著高于对照组(P<0.01)。结论:姜黄素通过诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,降低LPS诱导的氧化应激损伤,抑制Kupffer细胞分泌炎症细胞因子。
- 赵曙光李强王景杰王旭霞刘震雄闻勤生
- 关键词：NRF2内毒素KUPFFER细胞细胞因子
- 磷脂酰肌醇3-激酶信号通路在姜黄素诱导肝细胞转录因子Nrf2核转位中的作用被引量：4
- 2011年
- 目的研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在姜黄素诱导人肝细胞Nrf2核转位中的作用。方法用30μmol/L姜黄素和Wortmannin(PI3K抑制剂)干预L02肝细胞12 h,Western blot观察Nrf2核转位水平;将L02肝细胞分为对照组、模型组、干预组和抑制剂组,对照组用RPMI1640正常培养,模型组用100 U/L葡萄糖氧化酶(GO)干预2 h,干预组用30μmol/L姜黄素干预12 h后给予100 U/L GO干预2 h,抑制剂组先用0.1μmol/L Wortmannin预处理1h,余处理同干预组。流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)。分光光度法检测细胞MDA、GSH及培养液LDH水平,速率法检测细胞培养液AST的水平。结果姜黄素明显诱导Nrf2核转位,其诱导作用可被Wortmannin部分阻断。模型组ROS、MDA、AST、LDH水平较对照组显著升高(P<0.01),干预组ROS、MDA、AST、LDH水平较模型组显著降低(P<0.01),抑制剂组ROS、MDA、AST、LDH水平显著高于干预组,低于模型组(P<0.01)。模型组GSH水平较对照组显著降低(P<0.01),干预组GSH水平较模型组显著升高(P<0.01),抑制剂组GSH水平显著低于干预组(P<0.01),高于模型组(P<0.01)。结论 PI3K信号通路是姜黄素诱导Nrf2核转位的重要信号通路,通过抑制该通路可减弱姜黄素对肝细胞氧化应激损伤的保护作用。
- 赵曙光李强王景杰王旭霞刘震雄闻勤生
- 关键词：PI3K姜黄素NRF2氧化应激
- 葡萄糖氧化酶诱导肝细胞氧化应激模型的建立被引量：8
- 2011年
- 目的:研究不同浓度葡萄糖氧化酶(GO)对人肝细胞L02氧化应激水平的影响,以确定建立肝细胞氧化应激模型的合适浓度。方法:用不同浓度GO干预L02肝细胞2h,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS),荧光强度(FI)来表示ROS水平。分光光度法检测检测细胞MDA、GSH,速率法检测细胞培养液LDH、AST和ALT的水平。结果:①随GO浓度增加,肝细胞的存活率逐渐降低,其中75U/L、100U/L和125U/L组存活率显著低于对照组(P<0.05)。②随GO浓度增加,MDA含量逐渐增高,其中50U/L、75U/L、100U/L、125U/L组MDA水平较对照组显著增高(P<0.05)。GSH水平随GO浓度增高而逐渐减低,各干预组较对照组均显著降低(P<0.05)。GO各干预组FI均较对照组显著降低(P<0.05)。③各干预组LDH活性均显著高于对照组(P<0.05),50U/L、75U/L、100U/L、125U/L干预组AST与ALT水平均较对照组显著增高(P<0.05)。结论:GO能引起的肝细胞氧化应激损伤有剂量依赖性,100U/L是建立肝细胞氧化应激的合适浓度。
- 赵曙光李强王旭霞刘震雄闻勤生
- 关键词：氧化应激ROS葡萄糖氧化酶
- 一种改良大鼠肝脏Kupffer细胞分离方法被引量：4
- 2012年
- 目的观察改良大鼠肝脏Kupffer细胞(KCs)分离方法获取KCs的效果。方法参照Akira提供的方法进行以下改进:①前灌注液在体灌注,Ⅳ型胶原酶离体灌注消化;②Percoll分离液不连续密度梯度离心;③台盼蓝染色检测分离细胞的活度;④选择性贴壁法纯化获取的细胞;⑤吞墨实验、DAB染色及CD163细胞免疫荧光法鉴定所分选细胞。结果肝脏KCs的获得量为(3±1.5)×105/g鼠肝,细胞活度>92%;光镜下细胞呈圆形,培养24 h后呈梭形或多角形;具有较强的吞噬能力,DAB染色呈"煎蛋"样,荧光显微镜下>99%为KCs。结论改良的大鼠肝脏KCs分离方法较Akira法能够获取更高纯度的KCs,简捷经济,值得推广。
- 张哲赵曙光倪阵刘震雄唐华李慧艳闻勤生
- 关键词：KUPFFER细胞细胞分离原代培养细胞鉴定
- 姜黄素激活转录因子Nrf2对人肝细胞氧化应激的影响被引量：20
- 2010年
- 目的观察姜黄素对人肝细胞系L02中细胞转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)核转位及细胞氧化应激水平的影响。方法用15μmol/L和30μmol/L姜黄素干预L02细胞,用RPMI1640培养作为对照,干预6h和12h,间接免疫荧光法观察核转位水平;将人肝细胞L02分成对照组、模型组、干预组三组,对照组正常培养未给予葡萄糖氧化酶(GO)和姜黄素干预,模型组仅加入100U/LGO干预2h,制备细胞氧化应激模型,干预组加入最佳浓度的姜黄素干预12h,然后给予100U/LGO干预2h。免疫荧光法观察L02细胞Nrf2核转位情况,分光光度法检测细胞MDA、GSH水平,速率法检测细胞培养液AST和ALT的水平,流式细胞术检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平的变化。结果姜黄素能够诱导Nrf2的核转位,其中30μmol/L的作用优于15μmol/L,各浓度时12h作用优于6h。模型组MDA、AST、ALT较对照组显著升高(P<0.01),干预组MDA、AST、ALT较模型组显著降低(P<0.01),模型组GSH较对照组显著降低(P<0.01),干预组GSH较模型组显著升高(P<0.01)。模型组ROS阳性细胞荧光强度较对照组显著升高(P<0.01),干预组阳性细胞水平较模型组显著降低(P<0.01)。结论姜黄素通过促进肝细胞L02的Nrf2核转位,降低细胞内活性氧的水平,进而减轻细胞氧化应激损伤。
- 李强赵曙光王旭霞刘震雄严慧崔晓娜闻勤生
- 关键词：姜黄素NRF2氧化应激
