国家烟草专卖局科技攻关项目(2010)
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 相关作者：吴元华赵秀香赵艳琴安梦楠陈建光更多>>
- 相关机构：沈阳农业大学内蒙古民族大学沈阳化工大学更多>>
- 发文基金：辽宁省烟草专卖局科技攻关项目国家烟草专卖局科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 轮丝链霉菌(Streptomyces Ys.03)代谢产物的抗植物病毒活性及其分类鉴定被引量：1
- 2012年
- [目的]1株从土壤中分离得到的放线菌的抗植物病毒活性及其分类鉴定。[方法]室内对峙培养、枯斑和系统寄主的保护及治疗试验,菌株形态观察并结合培养特征、生理生化性状及16S rDNA序列测定。[结果]菌株Ys.03对蜡状芽孢杆菌有稳定的拮抗作用;发酵液与烟草花叶病毒(TMV)混合后接种枯斑和系统寄主,对TMV抑制率分别为95.01%和88.67%;接种前、后叶面分别喷施发酵液抑制率均较高;菌株孢子链轮生,16S rDNA测序与师岗轮丝链霉菌(Streptomyces mormookaensis)同源性达100%。[结论]菌株Ys.03代谢产物对TMV有显著的抑制作用,鉴定为链霉菌属轮生类群师岗轮丝链霉菌。
- 宋影关丽杰赵秀香白雪婧吴元华
- 关键词：RDNA
- 烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)SRAP-PCR体系建立及优化被引量：1
- 2014年
- 采用烟草靶斑病菌YC-9,LJT-8和QYS-7为DNA模板,初步筛选SRAP引物组合;采用L16(45)正交试验设计,对烟草靶斑病菌的SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs,Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板浓度等5个因素进行优化试验。结果表明:共筛出13对扩增条带清晰且多态性好的引物组合;烟草靶斑病菌的最佳SRAP反应体系为Mg2+浓度2.0 mmol/L、dNTP浓度200μmol/L、Taq DNA聚合酶0.8 U、引物浓度140 mmol/L、模板DNA 20 ng及1×PCR buffer,反应总体积为20μL;各因素对SRAP-PCR扩增反应结果影响的差异较大,依次为Taq DNA聚合酶>引物>Mg2+>dNTPs=模板DNA。
- 赵艳琴吴元华赵秀香安梦楠陈建光
- 关键词：正交试验设计反应体系优化引物筛选
- 烟草靶斑病菌内切多聚半乳糖醛酸酶基因endoPGs的克隆及表达特征分析被引量：6
- 2014年
- 【目的】内切多聚半乳糖醛酸酶(endo polygalacturonases,endoPGs)是重要的致病因子之一。论文从烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)强致病力菌株YC-9和弱致病菌株LF-2中克隆该致病基因,分析比较该基因的序列特征、进化关系和表达特性,研究其在与烟草互作过程的致病作用。【方法】通过比较GenBank中不同植物病原真菌的endoPGs序列设计简并引物,首先获得菌株YC-9及LF-2的endoPGs基因片段,再采用RACE技术克隆获得其cDNA全长序列;生物信息学分析比较其保守结构域及序列特征;采用MEGA 4.0软件构建endoPGs的系统进化树;通过real-time RT-PCR技术对强致病力菌株YC-9及弱致病力菌株LF-2的endoPGs与烟草K326互作的表达特性进行研究。【结果】克隆获得了烟草靶斑病菌强致病力菌株YC-9和弱致病力菌株LF-2的endoPGs的cDNA全长序列,分别命名为endoPG1和endoPG2,开放阅读框(ORF)长度均为1 086 bp,编码361个氨基酸;比较分析表明endoPG1和endoPG2的推测蛋白均具有PLNO3003基因家族保守结构域,其跨膜结构间存在差异;成功构建了该基因系统进化树,结果表明来自烟草靶斑病菌的endoPGs构成独立分支,且烟草靶斑病菌endoPG1及endoPG2同源关系最近;real-time RT-PCR表达特性分析结果显示,靶斑病菌endoPG1和endoPG2与烟草互作(接种)之后该基因的表达与未互作(不接种)的对照样品相比均呈明显上调趋势,同时endoPG1表达迅速且高于endoPG2。【结论】烟草靶斑病菌强致病力菌株YC-9及弱致病力菌株LF-2的内切多聚半乳糖醛酸酶基因均具有PLNO3003基因家族的保守结构域,其推测蛋白的跨膜结构间存在差异,该推测蛋白与烟草靶斑病菌同源关系最近,且endoPG1和endoPG2的推测蛋白的同源性最高;内切多聚半乳糖醛酸酶基因的表达受与烟草互作的诱导,在不同致病力菌株中存在明显差异。
- 赵艳琴吴元华赵秀香陈建光伏颖安梦楠
- 关键词：克隆基因表达
