江苏省博士后科研资助计划项目(2005-2007)
- 作品数：5 被引量：117H指数：5
- 相关作者：陈凤毛吴小芹叶建仁汤坚更多>>
- 相关机构：南京林业大学安徽省林业厅安徽省林业有害生物防治检疫局更多>>
- 发文基金：江苏省博士后科研资助计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 真菌ITS区序列结构及其应用被引量：73
- 2007年
- 分析了真核生物以及原核生物核糖体基因内部转录间隔区序列结构。核rDNA的内转录间隔区ITS序列包含被5.8SrDNA所分隔的ITS1和ITS2两个片段。列举了根据真菌ITS区序列设计的扩增通用引物与特异引物。在此基础上,综述了真菌ITS序列结构在种间亲缘关系研究、植物病原真菌的检测、未知病原真菌的鉴定、近似种或疑难种的确定等方面的应用。
- 陈凤毛
- 关键词：真菌ITS
- 松材线虫实时PCR检测技术被引量：20
- 2007年
- 根据松材线虫核糖体DNA内部转录区设计了一对特异引物F11/R11与探针TaqMan-11,构成松材线虫实时PCR检测方法。采用该检测方法对分离自枯死松树体内的松材线虫、拟松材线虫、大核滑刃线虫、霍夫曼尼伞滑刃线虫和长尾属线虫进行检测。结果显示,所有松材线虫株系都能够检测到荧光信号,而拟松材线虫、大核滑刃线虫、霍夫曼尼伞滑刃线虫、长尾属线虫以及对照均没有检测到荧光信号。表明探针Taq-Man-11与引物组合对松材线虫具有很强的特异性。此外,利用检测方法,在10μL的反应体系中,最少可以检测到0.005pg的松材线虫DNA含量。实时PCR也可以成功地检测出单条松材线虫。
- 陈凤毛叶建仁吴小芹
- 关键词：松材线虫实时PCR特异引物探针
- 松材线虫快速检测试剂盒研制被引量：7
- 2007年
- 采用引物对K09F2/R对枯死松树内分离的松材线虫、拟松材线虫及其他线虫进行检测,结果表明,所有松材线虫株系均扩增出一条340bp的清晰、明亮的条带。而拟松材线虫、其他线虫均无扩增产物。利用引物对K09F2/R构建了松材线虫检测试剂盒。采用该试剂盒可使整个检测过程不超过2.5h;该试剂盒检测灵敏度为1/7条线虫,达到了对幼虫成功鉴定的目的,且检测结果便于判读,检测费用较低。
- 陈凤毛叶建仁吴小芹汤坚
- 关键词：松材线虫试剂盒
- 应用特异引物组合检测松材线虫被引量：14
- 2006年
- 采用特异引物组合对枯死松树内分离的松材线虫、拟松材线虫及其他线虫进行检测。结果表明,所有松材线虫株系均扩增出一条860 bp的清晰、明亮的条带,而拟松材线虫、其他线虫均无扩增产物。利用此特异引物组合构建了松材线虫检测试剂盒。采用本试剂盒可以在较短时间内对线虫进行鉴定。整个检测过程约需3 h,实现了对松材线虫的快速检测目标。检测结果便于判读,适合于生产上应用。
- 陈凤毛叶建仁吴小芹
- 关键词：松材线虫PCR
- 应用PCR-RFLP技术鉴别松材线虫与拟松材线虫被引量：20
- 2006年
- 应用PCR-RFLP技术分析松材线虫与拟松材线虫之间的差异。实验扩增出松材线虫rDNA-ITS区片段长度约为890 bp,拟松材线虫rDNA-ITS区片段长度约为930 bp。用5种限制性内切酶对两种线虫的ITS区扩增产物进行酶切,结果表明:(1)DraI酶切松材线虫群体均产生两个长度约510 bp和380 bp的片段,而拟松材线虫均不能被DraI酶切;(2)所有的松材线虫群体与拟松材线虫群体的ITS区扩增产物均不能被ApaI酶切;(3)用MspI酶切松材线虫群体,除GZ02不能够被酶切外,其余样本能够产生两条长度分别为530 bp和360 bp的谱带。拟松材线虫群体,都能产生3条一致的亮带,长度分别为340 bp2、90 bp、180 bp;(4)所有松材线虫样本均不能被SalI酶切,而拟松材线虫群体均能够被酶切为两个720 bp和220 bp的片段;(5)XhoI酶切松材线虫ITS区为两条大小分别为520 bp和370 bp的谱带。而拟松材线虫产生两条大小分别为530 bp和400 bp的谱带。因此,内切酶DraI、SalI可以用于检测松材线虫与拟松材线虫。MspI、ApaI、XhoI不宜用于鉴别松材线虫与拟松材线虫。
- 陈凤毛叶建仁汤坚吴小芹
- 关键词：松材线虫拟松材线虫核糖体基因
