国家杰出青年科学基金(31200726)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 红色荧光基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞:表达21d对细胞活性无影响被引量：2
- 2015年
- 背景:掌握转染的最佳感染复数和产生较强荧光强度的时间,可为后期观察人骨髓间充质干细胞在动物模型体内的示踪奠定基础。目的:探讨HIV-1来源的慢病毒携带增强型红色荧光蛋白转染人骨髓间充质干细胞的可行性。方法:将第4代人骨髓间充质干细胞分成空白组和感染复数为2,3,4组,以细胞数5.0×105个接种于12孔培养皿,添加含有体积分数为1%胎牛血清的成人骨髓间质干细胞完全培养基1 m L。调整慢病毒携带增强型红色荧光蛋白感染滴度为1.0×1011TU/L,加入各组培养皿中病毒液体积分别为10,15,20μL,感染复数分别为2,3,4,空白组加入10μL PBS。转染后24,72 h荧光倒置显微镜观察细胞红色荧光表达情况并计算出转染率。结果与结论:增强型红色荧光蛋白在骨髓间充质干细胞中稳定表达,转染后24 h倒置荧光显微镜下可见红色荧光,72 h荧光达到最强,细胞转染率与感染复数值呈线性增长关系。转染后21 d内,各转染实验组的人骨髓间充质干细胞数量与空白组比较差异无显著性意义(P>0.05),以上结果提示采用HIV-1来源的慢病毒载体介导增强型红色荧光蛋白转染标记人骨髓间充质干细胞是可行的,当感染复数为4时转染效率高并可持续表达至少21 d,且标记后对其增殖活性无影响。
- 尹飚杨逸禧杨波王簕黎双庆杨富国
- 关键词：骨髓间质干细胞慢病毒感染干细胞骨髓干细胞慢病毒人骨髓间充质干细胞转染
- 慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染的人脐静脉内皮细胞被引量：1
- 2014年
- 背景:人脐静脉内皮细胞转染慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白方便后期示踪该细胞,掌握转染的最佳感染复数(MOI)和产生较强荧光强度的时间,可为后期观察人脐静脉内皮细胞在动物模型体内的示踪奠定基础。目的:观察慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白在人脐静脉内皮细胞中的表达,找到稳定标记人脐静脉内皮细胞的方法。方法:采用胶原酶灌注消化分离人脐静脉内皮细胞,将其置于含有体积分数20%胎牛血清、内皮细胞生长因子的培养基内培养,倒置显微镜观察内皮细胞生长情况,消化离心重悬后进行计数,平均分成4组,每组细胞数5.0×105个,接种于24孔培养皿,空白组加入10μL的DMEM无血清培养基,剩余3组加入慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白进行转染,MOI分别为2,3,4,每组3个皿。结果与结论:分离的人脐静脉内皮细胞在体外培养5-7 d可长成单层,光镜下胞体为单层鹅卵石状排列,第Ⅷ因子相关抗原的检测为阳性。转染后24 h可见绿色荧光,72 h荧光达到最强,细胞转染率与MOI值呈线性增长关系,至21 d时仍可见绿色荧光。转染后0,7,14,21 d,MOI=3组的人脐静脉内皮细胞数量均与空白组差异无显著性意义,表明转染后细胞增殖能力不受慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白影响。提示慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染人脐静脉内皮细胞效率高,绿色荧光蛋白基因可持续表达21 d,且标记后不影响人脐静脉内皮细胞的增殖活性。
- 丁强杨波王簕尹飚唐龙章波
- 关键词：血管内皮细胞慢病毒增强型绿色荧光蛋白人脐静脉内皮细胞国家自然科学基金
