广东省自然科学基金(05300713) 作品数:3 被引量:13 H指数:2 相关作者: 陈炬 熊利华 华平 张惠忠 张华 更多>> 相关机构: 中山大学附属第二医院 广州市第一人民医院 中山市陈星海医院 更多>> 发文基金: 广东省自然科学基金 教育部留学回国人员科研启动基金 广东省中山市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
腺病毒介导血管内皮生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞移植梗死心肌的血管再生 被引量:1 2008年 背景:骨髓间充质干细胞的存活率与良好的血液供应关系密切,在移植早期其自身所分泌产生的促血管生长因子不足以刺激血管新生而容易导致移植的细胞死亡。目的:观察骨髓间充质干细胞移植联合血管内皮生长因子基因转染对大鼠梗死心肌组织修复重建、血管再生的影响。设计、时间及地点:随机分组设计的细胞基因工程实验,于2006-01/2007-12在中山大学第二附属医院医学研究中心完成。材料:选取具有相同遗传背景的雄性SD大鼠40只建立急性心肌梗死模型,6~8周龄.体质量250~300g。方法:体外分离、培养、纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞,以BrdU标记骨髓间充质干细胞。腺病毒介导血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞。将造模后大鼠随机分为4组.每组10只:基因转染骨髓间充质干细胞组,梗死心肌内注射体外转染腺病毒介导血管内皮生长因子的骨髓间充质干细胞;骨髓间充质干细胞组,梗死心肌内注射骨髓间充质干细胞;基因转染组,注射腺病毒介导的血管内皮生长因子;对照组,注射无血清IMDN培养液。主要观察指标:移植4周后观察移植细胞分化和新生血管的形成,并通过超声多普勒检测心功能变化。结果:细胞移植4周后,基因转染骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞组移植区移植细胞表现为心肌肌钙蛋白T染色阳性,细胞呈肌样细胞形态,并且两组心功能都较移植前有明显改善,基因转染骨髓间充质干细胞组改善程度优于骨髓间充质干细胞组。部分BrdU染色阳性的细胞可以分化成为内皮细胞,参与构成了梗死区域新生毛细血管,相对于单纯细胞移植与细胞因子移植,细胞移植结合血管内皮生长因子基因转染促进毛细血管新生更明显。结论:骨髓间充质干细胞移植联合血管内皮生长因子基因转染可以通过促进� 陈国祥 华平 熊利华 陈炬 潘德强 李美荣关键词:骨髓间充质干细胞 血管内皮生长因子 腺病毒介导血管内皮细胞生长因子基因体外转染骨髓间充质干细胞 被引量:6 2007年 【目的】探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子(VEGF165)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)后目的基因表达情况及对MSCs增殖分化的影响。【方法】构建含VEGF基因的腺病毒表达载体,利用贴壁法分离培养MSCs后,用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效果和转染率,用免疫组化、Western-Blot和ELISA方法分别检测VEGF基因转染MSCs后VEGF的表达情况。【结果】腺病毒介导的VEGF基因对于MSCs具有很高的转染效率,转染效率与病毒感染复制数(multiplicyties of infection,MOI)具有量效关系。MOI为150倍时,转染效率>95%,转染VEGF后,MSCs可有效表达VEGF,9d时达到表达高峰(1125pg/mL),13d后仍可检测到VEGF的表达。转染VEGF对MSCs的增殖分化没有明显影响。【结论】腺病毒介导的VEGF基因可以有效的转染MSCs,MSCs是一种理想的基因载体细胞,其携带的VEGF基因可获得较高的表达水平。 华平 陈炬 张惠忠 杨淞然 杨艳旗 熊利华 张华关键词:血管内皮生长因子 骨髓间充质干细胞 腺病毒 转染 血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞移植于梗塞心肌的实验研究 被引量:6 2006年 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植联合血管内皮生长因子(VEGF)基因转染对大鼠梗塞心肌组织的修复重建、血管再生及梗塞后心功能的影响。方法体外分离、培养、纯化SD大鼠的MSCs,以BrdU标记MSCs,腺病毒介导VEGF基因转染MSCs。建立大鼠急性心肌梗死模型4周后,随机分为4组(每组10只),分别行梗塞心肌内注射:转染VEGF基因的MSCs移植组(组Ⅰ)、单纯MSCs移植组(组Ⅱ)、单纯VEGF基因治疗组(组Ⅲ)和以注射无血清IMDM培养液为对照组(组Ⅳ)。移植4周后观察移植细胞的分化和新生血管的形成,并通过超声多普勒检测心功能变化。结果组Ⅰ和组Ⅱ中,梗塞心肌处可见BrdU标记的移植细胞,cTnT染色阳性。超声心动图检查发现,组Ⅰ和组Ⅱ的左室射血分数(LVEF)的改善显著高于对照组(P均<0.01),而组Ⅰ的LVEF改善程度要明显高于组Ⅱ;部分BrdU染色阳性的细胞可以分化成为内皮细胞,参与构成了梗塞区域的新生毛细血管。相对于对照组,组Ⅰ和组Ⅲ都有明显的血管新生(P均<0.01)。结论MSCs移植联合VEGF基因转染可以通过促进心肌再生和新生血管的形成来重建缺血心肌,显著改善心功能。 华平 陈炬 张惠忠 杨淞然 杨艳旗 熊利华 张华关键词:骨髓间充质干细胞 血管内皮生长因子